2025届四川省广元市虎跳中学高三第一次调研测试生物试卷含解析

2025届四川省广元市虎跳中学高三第一次调研测试生物试卷注意事项：1．答题前，考生先将自己的姓名、准考证号填写清楚，将条形码准确粘贴在考生信息条形码粘贴区。2．选择题必须使用2B铅笔填涂；非选择题必须使用0．5毫米黑色字迹的签字笔书写，字体工整、笔迹清楚。3．请按照题号顺序在各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试题卷上答题无效。4．保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列叙述正确的是（）A．细胞不能无限长大，所以细胞生长到一定程度就会分裂产生新细胞B．细胞分裂和分化是多细胞生物体正常发育的基础，细胞衰老和凋亡则不是C．细胞癌变细胞的形态结构发生变化，细胞衰老细胞的形态结构也发生变化D．一个细胞的原癌基因和抑癌基因中发生5-6个基因突变，人就会患癌症2．如图为人体囊性纤维病的产生机理示意图。据图分析，以下说法不正确的是（）A．图中a表示DNA、b表示mRNA、c表示核糖体，过程①和②分别表示转录和翻译B．图中异常蛋白质是钾离子转运蛋白C．核糖体沿着mRNA向左移动并合成同种肽链D．该图体现了基因通过控制蛋白质结构，直接控制生物的性状3．将某一植株放在密闭玻璃罩内，置于室外一昼夜，获得实验结果如图所示。下列有关说法错误的是（）A．图一中BC段较AB段CO2浓度增加减慢，是因为低温使植物呼吸作用减弱B．两图中分别出现FG段与ef段的变化，原因是部分气孔关闭，叶片吸收CO2的量减少C．图二中gh段时氧气含量增加，且到达i点时，该植株积累的有机物最多D．上图所示的结果表明，该植株经过这一昼夜之后，植物体中有机物含量有所增加4．某T2噬菌体DNA含1000个碱基对，某科学工作者用35S标记的T2噬菌体侵染大肠杆菌，最终形成100个子代T2噬菌体。下列有关叙述错误的是（）A．子代T2噬菌体中含35S的占1/50B．T2噬菌体利用大肠杆菌的RNA聚合酶转录形成RNAC．T2噬菌体繁殖过程中消耗脱氧核苷酸1．98×105个D．T2噬菌体利用大肠杆菌的核糖体合成自身的蛋白质5．如图①②分别表示不同的细胞，A表示相应物质。不符合该模型的是A．①效应T细胞②靶细胞，A抗体B．①传出神经元②肌肉细胞，A神经递质C．①胰岛B细胞②肝细胞，A胰岛素D．①甲状腺细胞②垂体细胞，A甲状腺激素6．下列以新鲜洋葱为实验材料的生物学实验中，叙述正确的是（）A．以鳞片叶内表皮为材料，盐酸处理后经健那绿染色可观察DNA的分布B．以鳞片叶为材料，捣烂取其汁液加入斐林试剂经水浴加热可检测蔗糖的存在C．以鳞片叶外表皮为材料，用1．3g/ml蔗糖溶液处理可观察细胞的质壁分离和复原D．以根尖为材料，经低温等处理显微镜下观察到分生区少数细胞染色体数目加倍二、综合题：本大题共4小题7．（9分）酵母菌的蛋白质可作为饲料蛋白的来源，有些酵母菌能以工业废甲醇作为碳源，研究人员拟从土壤样品中分离出可利用工业废甲醇的酵母菌，这样既能减少污染又可变废为宝。下图为主要操作流程示意图。回答下列问题：（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的____，及时对培养基进行分装，并进行高压蒸汽灭菌：在加热排除高压锅内原有的____后，将高压锅密闭，继续加热，通常在____的条件下，维持15-30min，可达到良好的灭菌效果。（2）取步骤②中梯度稀释后的适量液体加入无菌培养皿，然后将高压蒸汽灭菌后的培养基冷却至____（25℃/50℃/80℃）左右时倒入培养皿混匀（步骤⑧），冷凝后将培养皿倒置，在适宜的条件下培养一段时间。（3）挑取平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线纯化，下列叙述合理的是____。a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量c．划线时不能划破培养基表面，以确保能正常形成菌落d．第二区以后的划线起始端要与上一区的划线的末端相连接，最后一区的划线末端不能与第一区的划线相连（4）步骤⑤的培养中，应加入___作为碳源，并加入适量的氮源、无机盐和水等成分。为监测发酵罐中酵母菌活细胞的密度，取2mL发酵液稀释1000倍后，加入等体积台盼蓝染液染色，用如图所示的计数室规格为25x16型的血细胞计数板计数，要达到每毫升4x109个活酵母菌细胞的预期密度，理论上，图中标号①～⑤五个中格里的呈____色的酵母菌细胞总数应不少于____个。8．（10分）某种质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，它们的识别序列和黏性末端各不相同，该质粒同时含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。科学家利用此质粒培育转基因抗盐作物，提高粮食种植面积取得重大进展。其培育过程如下图，请回答下列问题。（1）在构建重组质粒时，应选用________两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组质粒序列的唯一性。（2）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法（使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测重组质粒是否导入了土壤农杆菌。培养基除了含有土壤农杆菌生长繁殖必需的成分和琼脂外，培养基A和培养基B分别还要含有______、______________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是____（填数字）菌落中的细菌。（3）为了确定抗盐作物是否培育成功，要用__________标记的含抗盐基因的DNA片段作探针进行分子杂交检测，还要从个体水平用__________（方法）鉴定作物的耐盐性。（4）将转入抗盐基因的工程细胞培育成完整植株需要用组织培养技术，组织培养技术依据的原理是________________________。（5）将抗盐基因导入作物细胞内，使作物具有了抗盐性状，这种变异类型属于_________。9．（10分）萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。①这是一种定点的_________技术。②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。10．（10分）人乳铁蛋白是一种药用保健蛋白。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：限制酶BamHⅠHaeⅢBclⅠSau3AⅠNotⅠ识别序列及切割位点（1）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_________，酶能起催化作用的原理是_________________________________。（2）据图分析筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含___________________（填“四环素”“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是_________________________________。（3）若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为___________，对于该部位，这两种酶___________（填“都不能”或“只有一种能”）切开。（4）培养出早期胚胎后，科学家欲进行胚胎分割移植，则应该选择发育良好、形态正常的___________，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割。11．（15分）水稻的育性由一对等位基因M、m控制，基因型为MM和Mm的个体可产生正常的雌、雄配子，基因型为mm的个体只能产生正常的雌配子，表现为雄性不育，基因M可使雄性不育个体恢复育性。通过转基因技术将基因M与雄配子致死基因A、蓝色素生成基因D一起导入基因型为mm的个体中，并使其插入到一条不含m基因的染色体上，如图所示。基因D的表达可使种子呈现蓝色，无基因D的种子呈现白色。该方法可以利用转基因技术大量培育不含转基因成分的雄性不育个体。（1）基因型为mm的个体在育种过程中作为_________（填“父本”或“母本”），该个体与育性正常的非转基因个体杂交，子代可能出现的基因型为__________。（2）图示的转基因个体自交，F1的基因型及比例为__________，其中雄性可育（能产生可育的雌、雄配子）的种子颜色为_______。F1个体之间随机授粉，得到的种子中雄性不育种子所占比例为________，快速辨别雄性不育种子和转基因雄性可育种子的方法是_________。（3）若转入的基因D由于突变而不能表达，将该种转基因植株和雄性不育植株间行种植，使其随机授粉也能挑选出雄性不育种子，挑选方法是_______。但该方法只能将部分雄性不育种子选出，原因是___________。因此生产中需利用基因D正常的转基因植株大量获得雄性不育种子。

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、C【解析】

1、细胞分化是指在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态，结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。2、细胞凋亡是由基因决定的细胞编程序死亡的过程，在成熟的生物体内，细胞的自然更新、被病原体感染的细胞的清除，是通过细胞凋亡完成的。细胞坏死是由外界环境因素引起的，是不正常的细胞死亡，对生物体有害。3、衰老细胞的特征：（1）细胞内水分减少，细胞萎缩，体积变小，但细胞核体积增大，染色质固缩，染色加深；（2）细胞膜通透性功能改变，物质运输功能降低；（3）细胞色素随着细胞衰老逐渐累积；（4）有些酶的活性降低；（5）呼吸速度减慢，新陈代谢减慢。4、细胞癌变的根本原因是原癌基因和抑癌基因发生基因突变，其中原癌基因负责调节细胞周期，控制细胞生长和分裂的过程，抑癌基因主要是阻止细胞不正常的增殖。【详解】A、细胞开始生长，长到一定程度后，除一小部分保持分裂能力，大部分丧失了分裂能力，A错误；B、细胞衰老和凋亡也有利于多细胞生物体正常发育，也是多细胞生物体正常发育的必要条件，B错误；C、癌变细胞的形态结构发生变化，细胞膜上的糖蛋白减少，细胞衰老也会表现为细胞的形态、结构和功能发生改变，C正确；D、癌症的发生并不是单一基因突变的结果，至少在一个细胞中发生5-6个基因突变，才能赋予癌细胞所有的特征，这是一种累积效应，D错误。故选C。2、B【解析】

1、过程①表示转录，转录过程以四种核糖核苷酸为原料，以DNA分子的一条链为模板，在DNA解旋酶、RNA聚合酶的作用下消耗能量，合成RNA。2、过程翻译②表示翻译，翻译过程以氨基酸为原料，以转录过程产生的mRNA为模板，在酶的作用下，消耗能量产生多肽链．多肽链经过折叠加工后形成具有特定功能的蛋白质。3、图中a表示DNA、b表示mRNA、c表示核糖体。【详解】A、图中a表示DNA、b表示mRNA、c表示核糖体，过程①和②分别表示转录和翻译，A正确；B、图中异常蛋白质是CFTR蛋白，是氯离子转运蛋白，B错误；C、由图可知，左边合成的肽链长，所以翻译过程中，核糖体沿着mRNA由右向左移动，且合成同种肽链，C正确；D、该图体现了基因通过控制蛋白质结构直接控制生物的性状，D正确。故选B。3、C【解析】

分析图解：图一中，玻璃罩内二氧化碳浓度上升表示呼吸作用大于光合作用或光合作用为0；二氧化碳浓度下降时，表示光合作用大于呼吸作用；D点时玻璃钟罩内CO2浓度最高，此时净光合速率为0；H点玻璃钟罩内CO2浓度最低，此时净光合速率也为0。图二中，纵坐标表示植物吸收或释放CO2的速率，d、h两点植物光合速率为0；f点时可能由于光照过强导致气孔关闭，二氧化碳吸收减少，导致光合作用强度下降。【详解】图一中的B点为凌晨，此时植物只进行呼吸作用，凌晨气温下降，植物呼吸作用减弱，因此BC段较AB段CO2浓度增加减慢的原因是低温使呼吸作用减弱，A正确；图一中，FG段CO2下降明显减慢，说明净光合速率下降，与图二中ef段（中午的时间段）出现下降的可能原因都是部分气孔关闭，叶片吸收CO2的量减少，B正确；图二中gh段时虽然光照强度减弱，但植物的净光合速率大于0，氧气含量增加，且到达h点（植物光合速率=呼吸速率）时，该植株积累的有机物最多，C错误；图甲中比较A点和I点，I点的二氧化碳浓度低于A点，说明一昼夜二氧化碳净吸收用于合成有机物，因此植物体的有机物含量会增加，D正确。【点睛】注意抓住两条曲线中的关键点含义：一是图一中D、H两点的含义都是净光合速率=0，二是图二中dh两点的含义也是净光合速率=0；其次要注意两曲线中出现FG段和efg段原因相同，都是部分气孔关闭，叶片吸收CO2的量减少，净光合速率下降所致。4、A【解析】

本题考查噬菌体侵染细菌实验、DNA分子复制等知识，要求考生识记噬菌体侵染细菌的过程；识记DNA分子复制方式，能运用其延伸规律进行计算。噬菌体DNA由1000个碱基对组成，其中腺嘌呤占全部碱基的20%，即A=1000×2×20%=400个，根据碱基互补配对原则，A=T=400个，C=G=600个。【详解】A、T2噬菌体侵染大肠杆菌时，蛋白质外壳没有进入大肠杆菌中，则子代T2噬菌体不含35S，A错误；B、T2噬菌体侵染大肠杆菌时，只有DNA进入大肠杆菌，则其转录形成RNA时需要的RNA聚合酶来自大肠杆菌，B正确；C、DNA复制是半保留复制，则子代噬菌体合成需要的脱氧核苷酸数量为(100-1)×2000=1．98×105，C正确；D、T2噬菌体属于病毒，无核糖体，侵入大肠杆菌内利用大肠杆菌的核糖体合成自身的蛋白质，D正确。故选A。5、A【解析】抗体不是由效应T细胞分泌的，且效应T细胞直接与靶细胞结合，A错误；在反射弧中，传出神经元分泌神经递质，作用于效应器（肌细胞），B正确；胰岛B细胞分泌的胰岛素可以作用于肝细胞，促进肝细胞中物质的氧化分解和肝糖原的形成，C正确；甲状腺细胞分泌的甲状腺激素过多时，可以作用于垂体细胞，抑制其分泌活动，D正确。6、D【解析】

1、紫色洋葱的叶片分两种，一种是管状叶，绿色，这种叶片可用于提取和分离叶绿体中的色素。紫色洋葱的另一种叶片是鳞片叶，其内外表皮都由一层细胞构成，适于显微镜观察。其中外表皮为紫色，适于观察质壁分离复原；洋葱鳞片叶的内表皮色浅，适于观察DNA、RNA在细胞中的分布状况。观察有丝分裂的最佳材料是根尖，一是色浅，无其他色素干扰；二是此处细胞处于分裂周期中，能找到进行分裂的细胞。2、观察DNA和RNA在细胞中的分布实验的原理是甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，其中甲基绿能将DNA染成绿色，吡罗红能将RNA染成红色。利用甲基绿和吡罗红混合染色剂对细胞进行染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。【详解】A、甲基绿能将DNA染成绿色，吡罗红能将RNA染成红色，以鳞片叶内表皮为材料，盐酸处理后经甲基绿和吡罗红混合染色剂染色，可观察DNA和RNA的分布，而健那绿的作用是将活细胞内的线粒体染成蓝绿色，A错误；B、斐林试剂是检测还原性糖的试剂，而蔗糖是非还原性糖，B错误；C、鳞片叶外表皮为紫色，含有大液泡，故可作为质壁分离的实验材料，用1.3

g/mL蔗糖溶液处理可观察细胞的质壁分离，但是要观察其质壁分离复原，需要滴加清水，C错误；D、低温诱导只能作用于有丝分裂前期的细胞，抑制细胞中的纺锤体的形成，低温处理时，分生区少数细胞处于有丝分裂前期，因此显微镜下可观察到分生区只有少数细胞染色体数目加倍，D正确。故选D。【点睛】本题考查观察DNA和RNA在细胞中的分布实验、低温诱导染色体数目加倍、观察细胞有丝分裂、观察质壁分离及复原，，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的材料是否合适、实验采用的试剂及试剂的作用、实验现象等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。二、综合题：本大题共4小题7、pH冷空气（压力为）100kPa、（温度为）121℃50℃a、c、d工业废甲醇无40【解析】

1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。2、分析题图：①称量土样，里面含有需要分离的酵母菌；②表示梯度稀释和涂布平板；③④表示平板划线法，进行纯化培养；⑤表示扩大培养，获得更多的酵母菌。【详解】（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量、溶化，调节培养基的pH，及时对培养基进行分装，高压蒸汽灭菌。在加热排除高压锅内原有的冷空气后，将高压锅密闭，继续加热，通常在（压力为）100kPa、（温度为）121℃的条件下，维持15-30min，可达到良好的灭菌效果。（2）倒平板需要将培养基冷却至50℃进行。（3）a、接种针、接种环使用前都必须灭菌，做到无菌操作，a正确；b、挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定培养液中，而不是细胞内甲醇的含量，b错误；c、划线时应避免划破培养基表面，否则大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落，c正确；d、第二区域以后的划线区域的菌种来源于上一区域的末端，所以第二区以后的划线起始端要与上一区的划线的末端相连接，并且最后一区的划线末端不能与第一区的划线相连，d正确，以便于分离菌落。故选acd。（4）本实验的目的是分离出可利用工业废甲醇的酵母菌，所以应该以甲醇作为碳源，活细胞膜具有选择透过性，经等体积台盼蓝染液染色，无色细胞才计数；为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，达到每毫升4×109个活细胞的预期密度，则n÷80×400÷（0.1×103）×2000=4×109，则5个中方格中无色酵母菌不少于40。【点睛】本题主要考查对食用菌菌种扩大培养并保存的过程中涉及的培养基配制、灭菌及菌种转移和保藏的一些基础知识，考生需注意归纳总结，才能减少犯错。8、SalⅠHindⅢ氨苄青霉素四环素（或答氨苄青霉素和四环素）4和6放射性同位素（或荧光素）一定浓度的盐水浇灌作物（将作物移栽到盐碱地中种植）细胞的全能性基因重组【解析】

分析第一个图：图示为转基因抗盐作物的培育过程，首先构建基因表达载体；其次采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞（作物细胞）；再采用植物组织培养技术将含有目的基因的作物细胞培养成转基因抗盐作物。分析第二个图：图示为筛选含有重组质粒的农杆菌的过程，培养基A和B中应该分别加入氨苄青霉素、四环素。【详解】（1）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，其中BamHⅠ的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalⅠ一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalⅠ和HindⅢ两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。（2）用SalⅠ和HindⅢ两种限制酶对质粒进行切割时，会破会四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青毒素的培养基上能生存，但不能在含有四环素培养基上生存，所以培养基A和培养基B分别还含有氨苄青霉素、四环素，含目的基因的是4和6菌落中的细菌。（3）探针是指用放射性同位素标记的目的基因（抗盐基因）。除了从分子水平上进行检测，还可以从个体水平上进行鉴定，即用一定浓度的盐水浇灌作物来鉴定作物的耐盐性。（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，组织培养技术依据的原理是细胞的全能性。（5）将抗盐基因导入作物细胞内，使作物具有了抗盐性状，这属于基因工程技术，变异类型是基因重组。【点睛】本题结合转基因抗盐作物的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能根据图中限制酶的位置及题干要求选择正确的限制酶；能根据题中信息判断培养基中抗生素的名称；识记植物组织培养过程及条件。9、限制酶和DNA连接CaCl2基因突变引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）抗原-抗体杂交抑菌圈对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2、“分子缝合针”——DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3、PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2、常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。【详解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√（3）根据实验中的对照原则，若要比较新蛋白A的表达效率是否提高，则需设置三组实验实验变量的处理分别为：仅含新蛋白质A的重组质粒，仅含蛋白A的重组质粒和空白对照（仅含空质粒，以排除空质粒可能产生的影响）。因此，将含有新蛋白A基因的重组质粒和含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用抗原——抗体杂交方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较抑菌圈的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，是因为蛋白A基因的发酵产物对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高。【点睛】本题主要考查基因工程、PCR技术等相关知识，考生需要理解和记忆相关知识，并学会应用所学知识正确答题。10、Sau3AⅠ可以显著降低化学反应的活化能氨苄青霉素用限制酶切割后破坏了Tetr基因，但不会破坏Ampr基因，导入重组质粒的受体细胞（对氨苄青霉素具有抗性），能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来都不能桑椹胚或囊胚【解析】

题图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程，该过程采用了基因工程技术（目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达）、动物细胞培养技术和胚胎移植技术。图中①表示将目的基因导入受体细胞；②表示早期胚胎培养；③表示胚胎移植；④表示产生转基因牛；⑤表示从转基因牛中获取目的基因产物。【详解】（1）根据表中五种酶的识别序列及切割位点可知，限制酶Sau3AI还可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将人乳蛋白基因插入载体，在只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因的情况下，应选择限制酶Sau3AI。酶能起催化作用的原理是酶可以显著降低化学反应的活化能。（2）据用限制酶Sau3AI切割后会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的