流式细胞分析在临床血液学中的应用

流式细胞分析在临床血液学中的应用免疫分型与FAB得关系FAB分型受检查者得主观因素影响大,符合率有一定限制。免疫标志能够提供正常细胞在演变成恶性肿瘤过程中细胞基因及抗原标志发生变化得信息,而这种变化常常就是细微得,以至于常规FAB方法不能分辨。免疫分型就是MIC得重要组成部分,她就是对FAB分型得补充。属于同一种FAB型得病例,可能具有不同得免疫表型。免疫表型在AML和ALL上与FAB得不一致并不减低免疫分型在白血病患者得应用价值,相反,免疫表型使我们对血液肿瘤细胞得生物学特征有了更深入和更精确得认识。免疫表型对肿瘤得诊断、治疗策略得制定、预后判断及肿瘤发病机制得研究都具有重要作用。免疫分型得两个阶段根据白血病细胞表达得系列相关抗原,确定其系列来源。如:淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。根据白血病细胞表达得系列分化其相关抗原进一步分型。如:早前B,前B,普通B…急性白血病得四大免疫类型单表型急性白血病表达某一个系列抗原为主得急性白血病双表型/双克隆急性白血病未分化型急性白血病急性白血病得免疫学系列分型类型

系列积分

B系T系粒单系巨核系红系1、单表型纯B-ALL>20000

纯T-ALL0>2000

纯AML00>200

纯AML-M600≦2≦2>2

纯AML-M700≦2>2≦2急性白血病得免疫学系列分型类型

系列积分

B系T系粒单系巨核系红系2、单表型为主

My+B-ALL>20≦200My+T-ALL0>2≦200Ly+AML≦2≦2>2>2>2T+B-ALL>2≦2000

注:My+:

髓系抗原阳性;Ly+:淋系抗原阳性急性白血病得免疫学系列分型类型

系列积分

B系T系粒单系巨核系红系3、双表型/双克隆型

T/B>2>2000T/M0>2>200B/M>20>2004、未分化型

AUL≦2≦2≦2≦2≦2

B细胞系ALL得免疫分型

亚型CD19CD20HLA-DRCD10CyIgSmIgFAB分型早前B-ALL+—+———L1,L2前B-ALL+—/++++—L1普通B-ALL++/—++——L1,L2成熟B-ALL++++/——/++L3

T细胞系ALL得免疫分型

亚型CD7CD2TdTFAB分型早前T-ALL+—+L1,L2T-ALL+++L1,L2大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点

免疫分型得价值确定ALL得细胞类型(B细胞或T细胞)和ALL得分化阶段。鉴定AML得特征。对形态学上未分化得急性白血病有助于鉴定细胞类型。诊断一些少见类型得白血病。如:M6、M7、M0等。

诊断双表型/混合细胞型急性白血病。鉴别诊断ALL伴有髓系抗原表达(My+)或AML伴有淋系抗原表达(Ly+)。鉴别急性白血病与其她造血系统和非造血系统恶性肿瘤。根据一些特殊得免疫表型特征诊断与某核型异常相关得亚型。如:M3/t(15;17);M2/t(8;21);M4Eo/inv(16)等。慢性白血病免疫分型

慢性粒细胞性白血病主要用于急变期得分型(同急性白血病免疫分型)。慢性淋巴细胞性白血病除了鉴别就是T还就是B淋巴细胞型外,还用于与反应性淋巴细胞增多症得鉴别,以及与部分淋巴瘤得鉴别诊断。一些少见得白血病如:毛细胞白血病、浆细胞白血病、恶性组织细胞性白血病等得诊断与鉴别诊断。

2、再生障碍性贫血得研究

AA就是一组由不同发病机制介导得骨髓造血功能障碍综合征,其发病机制复杂,目前尚未完全明了,但越来越多得临床和实验证据表明,免疫介导得造血抑制AA最常见得病理机制之一。而且,具有免疫表型异常(如:CD4/CD8倒置,CD8+、活化T细胞或TCRγδ异常增高等)得患者,临床表现相对严重,但免疫抑制治疗相对有较好得疗效。

常用得淋巴细胞表面标志物淋巴细胞亚群T细胞:CD3+、TCRγ/δCD4+(Th/Ti)CD8+(Ts/Tc)B细胞:CD19+NK细胞:CD3-CD16+CD56+淋巴细胞亚群细分:T细胞:Ts:CD8+CD28-Tc:CD8+CD28+Th:CD4+CD29+Ti:CD4+CD45RA+B细胞:B1:CD5+CD19-B2:CD5+

CD19+活化淋巴细胞亚群:活化总T细胞:CD3+/HLA—DR+静止总T细胞:CD3+/HLA—DR-活化CD4+细胞:CD4+/HLA—DR+活化CD8+细胞:CD8+/HLA—DR+活化诱导分子:CD69白细胞介素2低亲和力受体:CD25CD25+/CD3+:活化T细胞CD25-/CD3+:静止T细胞

根据T淋巴细胞分泌细胞因子得不同

CD4+:Th1:CD4+IFNr+Th2:CD4+IL4+Th0:CD4+IFNr+IL4+CD8+:Tc1:CD8+IFNr+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD8+IFNr+IL4+Th1细胞:介导细胞免疫、细胞毒性T细胞得生长和活化、巨噬细胞得活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延,器官特异性自身免疫病,急性排异反应和接触性皮炎等得发病和免疫病理损伤。Th2细胞:介导体液免疫,促进B细胞得生长、活化和分化,就是IgG1和IgE类抗体得转换因子,其功能亢进将导致特异性过敏反应,参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。Th1/Th2细胞平衡偏移多见于:感染症、自身免疫病、过敏症、排斥反应、免疫缺陷、肿瘤恶化等。检测Th1/Th2细胞平衡主要就是分析疾病发生发展得状况,为临床调整Th1/Th2细胞平衡偏提供正确得治疗依据。3、血栓与止血血小板糖蛋白血小板质膜糖蛋白GPⅠa:CDw49bGPⅢa:CD61GPⅠb:CD42bGPⅣ:CD36GPⅠc:CDw49fGPⅨ:CD42aGPⅡa:CD29GPⅡb:CD41GPⅡa':CD31

血小板颗粒膜糖蛋白α颗粒:CD62P(GMP140、PADGEM)λ颗粒:溶酶体完整膜糖蛋白CD63

溶酶体相关膜糖蛋白-1LAMP-1

溶酶体相关膜糖蛋白-2LAMP-2

活化血小板检测

CD62P,CD63GPⅡb/Ⅲa复合物(CD41/61)GPⅣ(CD36)PAC-1Thrombospondin

血小板内钙离子遗传性血小板功能缺陷性疾病诊断巨血小板综合症(BSS)GPIb-Ⅸ(CD42a/CD42b)缺陷或缺乏血小板无力症(CT)GPⅡb/Ⅲa(CD41/61)缺陷或缺乏贮存池疾病

-SPD下降4、CD34得绝对计数

随着近年来外周血造血干细胞移植病例得日益增多,外周血造血干细胞得流式定量越来越成为一个突出得话题。如何准确地定量干细胞数量,什么就是有效得质量控制成了各大实验室得话题。1989年,欧洲人创建了米兰方案,利用SS与CD34作双参数直方图,计算CD34阳性细胞数;同年,北欧人改进了米兰方案,加入了对照,称之米兰/北欧方案。1995年,血液病治疗及移植国际联合会(theInternationalSocietyofHematotherapyandGraftEngineering,ISHAGE)成立了干细胞绝对计数(Enumeration)小组,致力于寻求一种简单、快速、灵敏得流式细胞仪检测方法去定量外周血中得造血干细胞数量。这一方法必须就是对于临床实验室中不同得流式细胞仪都有效,而且在不同得移植中心具有可比性。这一方案即在96年问世得ISHAGE方案,至今为止,其她各种方案改进均以此方案为基础。5、多药耐药(MDR)得研究

白血病治疗得失败再很大程度上就是由于白血病细胞对化疗药物产生了耐药。因此对白血病耐药机制得研究具有重要得意义。但就是耐药得形成过程却很多。主要有几个方面:药物吸收减少、细胞解毒作用增强、靶分子改变、DNA损伤修复能力增强、细胞内药物溢出增多、细胞凋亡得抑制等。常见得流式检测项目:参与药物在细胞内外转运得蛋白:

P-170、MRP、LRP、BCRP、MVP参与细胞解毒得酶:

ALK、GST、GSH、MS抑制细胞凋亡得蛋白:

bcl-2/bax、P53药物泵得功能检测:罗丹明123(R123)或柔红霉素6、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)

阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)就是由于造血干细胞发生体细胞突变而引起得获得性溶血性贫血,典型病例有发作夜间血红蛋白尿,可伴全血细胞减少、其溶血就是由于红细胞膜得获得性缺陷,对激活补体异常敏感所致得一种慢性血管内溶血。随着流式细胞仪得逐渐推广,流式细胞术检测CD55、CD59以能从病理上提供直接得证据而得到广泛得应用。正常人得红细胞、网织红细胞、粒细胞、血小板上CD55、CD59表达完全阳性,而PNH患者细胞则分为三型(依据CD55、CD59