江西省赣州市十五县2025届高三下第一次测试生物试题含解析

江西省赣州市十五县2025届高三下第一次测试生物试题注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列关于人类与环境的叙述错误的是（）A．温室效应会引起永冻土融化 B．植树造林是防治酸雨最有效的方法C．工业用水封闭化属于水体污染治理的措施 D．大气中臭氧层减少会使人体免疫功能减退2．下列有关神经系统结构和功能的叙述，错误的是（）A．神经系统是由神经元构成的 B．神经纤维接受适宜的刺激会产生负电波C．跨步反射属于复杂反射 D．膝反射的反射弧属于二元反射弧3．先天性甲状腺功能减退症（甲减）可对哺乳动物生长发育造成严重影响。以大鼠为实验材料，检测甲减仔鼠及补充甲状腺激素的甲减仔鼠的各项指标，结果见下表。指标正常仔鼠甲减仔鼠补充甲状腺激素的甲减仔鼠甲状腺激素总量（pmol/L）1．622．5012．52促甲状腺激素（TSH，mIU/L）6．125．256．57心肌重量（mg）7．2761．2562．66结合上表分析甲状腺激素分泌的调节及其与心肌生长的关系，错误的是（）A．TSH的增加抑制了甲状腺激素的分泌B．补充甲状腺激素后TSH的分泌减少C．甲状腺激素可促进心肌的生长D．补充甲状腺激素可用于治疗甲减4．可以用多种方法验证细胞的活性，下列叙述错误的是（）A．不能被红墨水染色的细胞具有活性 B．能被苏丹Ⅲ染色的细胞是死细胞C．能发生质壁分离的植物细胞具有活性 D．能发生胞质环流的细胞具有活性5．下列关于变异应用的叙述，错误的是（）A．单倍体育种目的是得到具有优良性状的单倍体B．人工诱变处理可大幅度改良生物的性状C．通过杂交、筛选，可定向集合亲本的优良基因D．DNA重组技术可克服物种间远缘杂交的不亲和性6．果蝇的红眼和白眼由一对等位基因（W/w）控制。让一只纯合的红眼雌果蝇与一只白眼雄果蝇交配得到F1，F1全为红眼；F1雌雄个体随机交配得到F2。为了确定W/w是位于常染色体上，还是位于X染色体上，下列数据中不需要统计的是（）A．F2中雌性个体的性状分离比B．F2中雄性个体的性状分离比C．F2中白眼果蝇的性别比例D．F2中红眼果蝇与白眼果蝇的比例二、综合题：本大题共4小题7．（9分）下图是光合作用影响因素示意图，请根据图形回答问题：（1）CO2浓度影响光合作用的___________过程，此过程中碳元素的转移途径是_____________________。（2）图甲中________点时光合作用速率达到最大值，此时限制光合作用速率的主要环境因素是____________________。（3）植物叶肉细胞产生ATP的场所有_________________________，叶绿体中CO2的来源有_______________________________________。（4）陆生植物光合作用所需要的碳来源于空气，其主要以__________形式，通过叶面的___________进入细胞。（5）乙图中光饱和点是_____点对应的光照强度，此时100cm2叶片1小时生产葡萄糖的总量______________。乙图试验b点时，此时叶肉细胞中光合速率_________（填“＞”“＝”“＜”）植株呼吸速率。8．（10分）杂交水稻生产技术是我国现代农业研究的一项重要成果，使我国的水稻产量得到大幅度提高，为我国和世界粮食安全作出了重要贡献。（1）具有相对性状的水稻纯合子杂交，研究者根据F1、F2的表现型及比例可作出的判断包括___________，以及通过比较正、反交结果可推断控制该性状的基因是否位于细胞核中。（2）1970年袁隆平团队在水稻（野生型）中发现了一株雄性不育植株（雄蕊异常，不能产生有功能的花粉；雌蕊正常，接受外来的正常花粉能受精结实）。通过分析下图所示的杂交实验，研究者发现该雄性不育性状是由细胞质基因和细胞核基因共同控制的。上述杂交中子代的细胞质基因均由母本提供。用S表示细胞质不育基因，N表示细胞质可育基因。用R（R1、R2）表示细胞核中可恢复育性的基因，其等位基因r（r1、r2）无此功能。只有当细胞质中含有S基因，细胞核中r基因纯合时，植株才表现出雄性不育性状。其他类型的基因组合均为雄性可育。通过杂交一可生产杂交种子（利用雄性不育株生产可育的F1种子，供生产使用)；通过杂交二可用来繁殖不育系（每年繁殖出基因型相同且雄性不育的植株）。请以遗传图解的形式写出杂交一和杂交二的亲本及F1的基因型（不要求写配子基因型）。__________________（3）研究发现细胞质S基因（在线粒体DNA上）编码的蛋白质阻碍水稻花粉发育而导致雄性不育，而R基因能够消除S基因对花粉发育的不利影响。为研究其中的机制，分析了不同基因型水稻的线粒体不育基因表达情况，结果见下表：根据表中结果，从R基因影响线粒体不育基因S表达的角度，解释R基因恢复育性可能的机制。____________________________9．（10分）CRISPR/Cas9系统基因编辑是一种对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，其原理是由一个向导RNA（sgRNA）分子引导Cas9蛋白到一个特定的基因位点进行切割。受此机制启发，科学家们通过设计sgRNA中碱基的识别序列，即可人为选择DNA上的任一目标位点进行切割（见下图）。（1）从CRISPR/Cas9系统作用示意图看，能够行使特异性识别DNA序列并切割特定位点功能的分子是___________，其类似于基因工程中__________的作用。（2）CCR5基因是人体的正常基因，其编码的细胞膜通道蛋白CCR5是HIV入侵T淋巴细胞的主要辅助受体之一。科研人员依据_____________的部分序列设计sgRNA序列，导入骨髓_________细胞中，构建sgRNA-Cas9复合体，以实现对CCR5基因的定向切割，变异的CCR5蛋白无法装配到细胞膜上，即可有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞。试分析与上述过程最接近的现代生物科技是________________。（3）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，实验发现sgRNA的序列越短脱靶率越高。试分析脱靶最可能的原因是____________________________。（4）通过上述介绍，CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术在______________等方面有广阔的应用前景。（至少答出两点）10．（10分）PRSV是单链RNA病毒，由蚜虫传播危害木瓜，华南农业大学通过农杆菌转化法成功培育出中国首例抗PRSV转基因木瓜。通过转基因技术培育植物抗病毒品种是目前常用的方法，请回答：（1）基因与染色体的关系是：一条染色体上有多个基因，基因在___________________。（2）转基因技术的核心步骤是基因表达载体的构建，该步骤必须用到的工具酶包括限制酶和_______________，基因表达载体中含有启动子和终止子，这两者是___________(填“复制”或“转录”)过程所必须的。此步骤中一般用两种___________处理，目的是防止Ti质粒或______________自身环化、防止目的基因和Ti质粒反向连接。（3）农杆菌转化法的原理是当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的_________化合物，吸引农杆菌移向这些细胞；如果将目的基因插入到Ti质粒的_____________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞的染色体DNA上。11．（15分）玉米（2N=20）是重要的粮食作物之一．请分析回答下列有关遗传学问题：（1）某玉米品种2号染色体上的基因S、s控制一对相对性状，基因S在编码蛋白质时，控制最前端几个氨基酸的DNA序列如图1所示．已知起始密码子为AUG或GUG。①如果进行玉米的基因组测序，需要检测__________条染色体的DNA序列。②基因S发生转录时，作为模板链的是图1中的__________链．若基因S的b链中箭头所指碱基对G/C缺失，则该处对应的密码子将改变为___________。（2）玉米的高杆易倒伏（H）对矮秆抗倒伏（h）为显性，抗病（R）对易感病（r）为显性，两对基因分别位于两对同源染色体上．上图2表示利用品种甲（HHRR）和乙（hhrr）通过三种育种方法（Ⅰ～Ⅲ）培育优良品种（hhRR）的过程。①利用方法Ⅰ培育优良品种时，获得hR植株常用的方法为__________，这种植株由于__________，须经诱导染色体加倍后才能用于生产实践．图2所示的三种方法（Ⅰ～Ⅲ）中，最难获得优良品种（hhRR）的是方法__________，其原因是______________________________。②用方法Ⅱ培育优良品种时，先将基因型为HhRr的植株自交获得子代（F2），F2代植株中自交会发生性状分离的基因型共有_____种，这些植株在全部

F2代中的比例为___________________．若将F2代的全部高秆抗病植株去除雄蕊，用F2代矮秆抗病植株的花粉随机授粉，则杂交所得子代中的纯合矮秆抗病植株占_________。

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、B【解析】

（1）臭氧层破坏原因：空气中的氟利昂等物质的大量排放；危害：臭氧层破坏后，到达地球表面的紫外线将增加，给人类健康和生态环境带来危害（2）酸雨形成原因：主要是硫和氮的氧化物溶于雨水而降落至土壤或水体中，酸雨的pH＜5.6（3）水污染表现：富营养化；结果：若表现在海洋中称为赤潮，若表现在湖泊等淡水流域称为水华。【详解】A、温室效应会引起全球气候变暖，永冻土将会融化，造成广大区域内冻土公路、铁路和民用建筑的破坏，A正确；B、植树造林是防治温室效应最有效的措施；防治酸雨最有效的办法是限制二氧化硫和一氧化氮的排放量，或者从燃料中把这些物质去掉，B错误；C、严格控制污染源、发展生产工艺无害化、工业用水封闭化、采用无水造纸法、无水印染法和建立污水处理厂等措施均属于水体污染治理的措施，C正确；D、臭氧能吸收对人体和生物有致癌和杀伤作用的紫外线、X射线和γ射线，从而保护人类和其他生物免受短波辐射的伤害，大气中臭氧层减少会使人体免疫功能减退，D正确。故选B。【点睛】本题考查全球性生态环境问题，要求考生识记全球性生态环境问题的类型、产生原因、危害及缓解措施等基础知识，能结合所学的知识准确答题。2、A【解析】

1.神经系统由神经元和神经胶质细胞（支持细胞）组成，神经元的数量远少于支持细胞的数量。2.静息状态时，细胞膜电位外正内负（原因：K+外流）→受到刺激，兴奋状态时，细胞膜电位为外负内正（原因：Na+内流）→兴奋部位与未兴奋部位间由于电位差的存在形成局部电流（膜外：未兴奋部位→兴奋部位；膜内：兴奋部位→未兴奋部位）→兴奋向未兴奋部位传导。【详解】A、神经系统是由神经细胞和支持细胞即神经胶质细胞构成，A错误；B、神经纤维接受适宜的刺激会导致细胞膜上的离子通道开放，引起离子流动产生负电波，即神经冲动，并沿着神经纤维传导，B正确；C、跨步反射需要多种神经元的参与，属于复杂反射活动，C正确；D、膝跳反射的反射弧由传入神经元和传出神经元组成，属于二元反射弧，D正确。故选A。3、A【解析】

1.促甲状腺激素释放激素（TRH）是由下丘脑分泌的；促甲状腺激素（TSH）是由垂体分泌的，甲状腺激素是由甲状腺分泌的。甲状腺激素的分泌存在分级调节和反馈调节机制。正常人的下丘脑可以分泌促甲状腺激素释放激素作用于垂体，促进垂体分泌促甲状腺激素作用于甲状腺，促进甲状腺分泌甲状腺激素，甲状腺激素作用于全身细胞，可以促进细胞代谢，同时，血液中甲状腺激素含量升高可以反馈抑制下丘脑和垂体的分泌活动，反之，则促进其分泌。2.分析表格中的数据可知，正常仔鼠是对照组，甲减仔鼠及补充甲状腺激素的甲减仔鼠是实验组，根据数据情况分析可知，甲减仔鼠由于甲状腺功能减退，分泌的甲状腺激素明显少于对照组和补充甲状腺激素的甲减仔鼠组，由于甲状腺激素较少，因此甲减仔鼠组的促甲状腺激素分泌增多，意图促进甲状腺的分泌功能，且甲减仔鼠组心肌重量明显低于对照组和补充甲状腺激素的甲减仔鼠组。综上所述，可见补充甲状腺激素可以用于治疗甲减。【详解】A、TSH（促甲状腺激素）的作用是促进甲状腺分泌甲状腺激素，A错误；B、由表可知，补充甲状腺激素后，TSH的分泌减少，B正确；C、由表可知，正常仔鼠和补充甲状腺激素的甲减仔鼠心肌重量都比甲减仔鼠的重，所以甲状腺激素可促进心肌的生长，C正确；D、由表可知，补充甲状腺激素可用于治疗甲减，D正确。故选A。4、B【解析】

细胞膜的功能特点是具有选择透过性；苏丹Ⅲ能将脂肪染成橘黄色；当细胞外液浓度高于细胞液时，细胞失水而发生质壁分离；细胞质具有一定的流动性。【详解】A、红墨水不能进入活细胞，不能被红墨水染色的细胞是活细胞，A正确；B、苏丹III染液可将花生子叶细胞中的脂肪颗粒染成橙黄色，而该实验中的花生子叶细胞是活细胞，B错误；C、若植物细胞死亡，失去选择透过性，则不能发生质壁分离与复原现象，C正确；D、能发生胞质环流的细胞是活细胞，D正确。故选B。【点睛】生物学实验中，有些实验需要保持细胞活性，如观察细胞质环流、观察细胞中的线粒体和叶绿体、观察植物细胞质壁分离及复原等实验，而观察洋葱根尖分生区细胞的有丝分裂时，经解离后细胞已经死亡；观察细胞中DNA和RNA的分布时，经过盐酸处理后，细胞已经死亡。5、A【解析】

1、四种育种方法的比较如下表：杂交育种诱变育种单倍体育种多倍体育种方法杂交→自交→选优辐射诱变、激光诱变、化学药剂处理花药离体培养、秋水仙素诱导加倍秋水仙素处理萌发的种子或幼苗原理基因重组基因突变染色体变异（染色体组先成倍减少，再加倍，得到纯种）染色体变异（染色体组成倍增加）2、基因工程：是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。【详解】A、单倍体育种的主要目的是可以在明显缩短育种年限，A错误；B、自然条件下基因突变的频率是很低的，用紫外线、X射线诱变处理能提高基因突变的频率，大幅度改良生物的性状，B正确；C、杂交育种是指通过杂交、筛选，定向集合亲本的优良基因，可将多个优良性状组合在同一个新品种中，C正确；D、基因工程技术可对目的基因进行定向操作，克服物种间远缘杂交障碍，D正确。故选A。【点睛】本题考查生物变异及其应用，要求考生识记生物变异的类型，掌握生物变异在育种工作中的应用；识记几种常见育种方法的原理、方法及优缺点等知识，能结合所学的知识准确判断各项。6、D【解析】

基因位置的判断方法。在常染色体上还是X染色体上的判断方法：1.已知性状的显隐关系，通常采用隐性的雌性和显性的雄性的个体进行杂交，若后代中雌雄个体表现型一致，则位于常染色体上；若后代中雌性表现为显性，雄性表现为隐性，则相关基因位于X染色体上。2.未知性状的显隐关系，通常采用正反交实验，若正反交结果相同，则位于常染色上；若正反交结果不同，则位于X染色体上。【详解】为了确定W/w是位于常染色体上，还是位于X染色体上应统计F2中雌性个体的性状分离比、F2中雄性个体的性状分离比，再进行比较，若雌雄两性的性状分离比一致则基因位于常染色体上，若不一致说明性状的传递与性别有关，基因位于X染色体上；也可统计F2中白眼果蝇的性别比例，根据白眼果蝇的性别比例是否为1∶1进行判断；若只统计红眼果蝇与白眼果蝇的比例，无法判断与性别的关系，即D错误。故选D。二、综合题：本大题共4小题7、暗反应CO2→2C3→（CH2O）G光照强度和温度细胞质基质和线粒体、叶绿体类囊体薄膜线粒体和外界环境二氧化碳叶片气孔c1．27mg＜【解析】

由图甲可知，F点为CO2的补偿点，此时光合作用等于呼吸作用，G点为CO2饱和点，此时光合速率达到最大；由图乙可知a点表示呼吸作用强度，b点表示光补偿点，c点表示光饱和点。【详解】（1）CO2参与光合作用暗反应，其转移过程是CO2→2C3→（CH2O）。（2）分析曲线可知，甲图G点为二氧化碳饱和点，此时光合速率最大，影响光合作用的因素光照强度和温度。（3）叶肉细胞含叶绿体、线粒体，所以产生ATP的场所有细胞质基质和线粒体、叶绿体类囊体薄膜；而细胞内CO2的来源有细胞自身产生与外界环境中进入的。（4）陆生植物光合作用所需二氧化碳来源于空气，通过叶片气孔进入细胞。（5）乙图光饱和点是c点对应的光照强度，此时光合作用产生葡萄糖的总量是光合作用产生量加上呼吸作用消耗量，吸收CO2的量是18mg，计算式为(180×18)/(6×44)＝1．27mg，乙图试验b点时，由于植株只有部分细胞进行光合作用，所以此时叶肉细胞中光合速率小于植株呼吸速率。【点睛】本题目主要考察影响光合作用的因素，以及光合作用和呼吸作用相关计算，难度一般。8、通过F1的性状表现可以判断性状的显隐性，通过F2的性状分离比，初步推测性状受几对基因控制R1不影响线粒体不育基因的转录,但抑制不育蛋白的产生或积累；R2抑制不育基因的转录，或在转录后降解不育基因的mRNA；R1、R2基因的共同作用抑制了不育基因的表达，使育性恢复正常。【解析】

1、自由组合定律的实质：位于非同源染色体上的非等位基因的分离或组合是互不干扰的；在减数分裂过程中，同源染色体上的等位基因彼此分离的同时，非同源染色体上的非等位基因自由组合。2、基因分离定律和基因自由组合定律适用于细胞核遗传。【详解】（1）具有相对性状的水稻纯合子杂交，可以通过F1的性状表现判断性状的显隐性，并通过F2的性状分离比，初步推测性状受几对基因控制，以及通过比较正、反交结果可推断控制该性状的基因是否位于细胞核中。（2）分析题中信息：用S表示细胞质不育基因，N表示细胞质可育基因。用R（R1、R2）表示细胞核中可恢复育性的基因，其等位基因r（r1、r2）无此功能。只有当细胞质中含有S基因，细胞核中r基因纯合时，植株才表现出雄性不育性状。综上可知，基因型为S(r1r1r2r2)的个体表现为雄性不育性状（雄蕊异常，不能产生有功能的花粉；雌蕊正常，接受外来的正常花粉能受精结实），在杂交中可用作母本；其他类型的基因组合，如：N(R1-R2-)、N(r1r1r2r2)、S(R1-R2-)等均为雄性可育。想要通过杂交一得到可生产的杂交种子，即利用雄性不育株S(r1r1r2r2)生产可育的F1种子，供生产使用，则应选用的杂交组合为S(r1r1r2r2)♀×N(R1R1R2R2)♂；通过杂交二用来繁殖不育系，每年繁殖出基因型相同且雄性不育的植株，即纯合的雄性不育植株S(r1r1r2r2)，应选用的杂交组合为S(r1r1r2r2)♀×N(r1r1r2r2)♂，可知杂交过程如下：（3）分析表格中的数据可知，S(R1R1r2r2)与S(r1r1r2r2)相比，不育基因转录的mRNA含量相同，但不育基因编码的蛋白质减少，说明R1不影响线粒体不育基因的转录,但抑制不育蛋白的产生或积累；S(r1r1R2R2)与S(r1r1r2r2)相比，不育基因转录的mRNA含量和不育基因编码的蛋白质均减少，说明R2抑制不育基因的转录，或在转录后降解不育基因的mRNA；S(R1R1R2R2)与S(r1r1r2r2)相比，水稻育性恢复正常，说明R1、R2基因的共同作用抑制了不育基因的表达，使育性恢复正常。【点睛】本题难度较大，通过杂交水稻育性的内容，考查考生从题干中获取信息、设计遗传实验的能力，解决本题的关键是要对自由组合定律的内容掌握全面，且对细胞质遗传和细胞核遗传有一定了解，能够进行知识迁移，用所学遗传学知识，解决实际问题。9、向导RNA（sgRNA）分子和Cas9蛋白限制酶CCR5基因造血干蛋白质工程其他DNA序列也含有与向导RNA（sgRNA）互补配对的序列，造成向导RNA（sgRNA）错误结合而脱靶基因治疗、动植物育种（基因水平）、研究基因功能【解析】

根据题意分析可知，CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是利用该基因表达系统中的引导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。由于其他DNA序列也含有与引导RNA互补配对的序列，造成引导RNA错误结合而出现脱靶现象。【详解】（1）由题干信息“向导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA”，说明能够行使特异性识别DNA序列并切割特定位点功能的分子是向导RNA（sgRNA）分子和Cas9蛋白，功能类似于基因工程中限制酶的作用。（2）根据题意，可利用Cas9酶对CCR5基因进行编辑，因此sgRNA序列需要与CCR5基因上部分碱基互补配对，从而精准定位到CCR5基因进行编辑，故设计SgRNA序列时需要根据CCR5基因的核苷酸序列，导入骨髓造血干细胞中，构建sgRNA-Cas9复合体，以实现对CCR5基因的定向切割。CRISPR/Cas9基因编辑技术是一种精准改变目标DNA序列的技术，与其比较接近的是蛋白质工程。（3）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”，其原因是其它DNA序列也含有与向导RNA互补的序列，造成向导RNA错误结合而出现脱靶现象。（4）通过上述介绍，基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术在基因治疗、基因水平进行动植物的育种、研究基因的功能等等方面有广阔的应用前景。【点睛】本题考查了基因工程的有关知识，要求考生能够掌握基因工程的操作步骤，识记基因工程的操作工具，能够结合图示以及所学知识准确答题。10、染色体上呈线性排列DNA连接酶转录限制酶目的基因酚类T-DNA【解析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。【详解】（1）基因在染色体上，且一条染色体含有多个基因，基因在染色体上呈线性排列。（2）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建。构建基因表达载体时，首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA。基因表达载体中的启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过转录合成mRNA，终止子是转录的结束部位，因此启动子和终止子是转录过程所必须的。为了防止Ti质粒或目的基因自身环化、防止目的基因和Ti质粒反向连接，在基因表达载体构建中一般用两种限制酶处理。（3）将目的基因导入植物细胞采用