药学毕业答辩课件-HPLC-MSMS法测定人血浆中伏立康唑的浓度

HPLC-MS/MS法测定人血浆中伏立康唑的浓度指导教师：班级：学生：学号：目录背景和意义仪器和试剂研究方法结果结论致谢背景和意义背景

有关伏立康唑的测定方法,国内外已有很多报道,常用HPLC法。但HPLC法通常需要10min以上的分析时间，选择性不强，应用于临床患者血样分析时通常易受干扰。液质联用（HPLC-MS）具有根据物质的质荷比进行定量，灵敏度高且干扰小，是生物样本分析的首选方法。

背景和意义意义伏立康唑是一种新型的三唑类抗真菌药,临床使用存在个体差异大、不良反应多、易发生药物相互作用、人体内代谢呈非线性药代动力学特征等问题。建立一种新型快速的测定伏立康唑血药浓度的方法有助于临床药师为患者提供更好的药学服务。仪器和试剂

仪器：API5500Q高效液相色谱-质谱联用仪；电子天平；移液枪（200L、1000L）；涡旋混合器；纯水仪等。

试剂：伏立康唑标准品（纯度：100%），购于中国药品生物检定所；格列吡嗪（内标），购于中国药品生物检定所。甲醇、甲酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯，空白血浆为北京大学人民医院提供。研究方法

以格列吡嗪为内标，血浆样品经与甲醇和内标物混合离心提取分离，以甲醇-0.2%甲酸水溶液（60:40，v/v）为流动相，以液相色谱分离、电喷雾离子化串联质谱进行检测，测定伏立康唑（m/z350.3→127.1）的浓度。研究结果1.特异性试验2.标准曲线和定量下限3.精密度和准确度4.回收率和基质效应5.稳定性1.特异性试验结果图1空白血浆色谱图图2空白血浆加内标色谱图图3伏立康唑LLOQ（10ng·ml-1）色谱图图4伏立康唑QCL（30ng·ml-1）色谱图1.特异性试验结果图5伏立康唑QCM（800ng·ml-1）色谱图图6伏立康唑QCH（2400ng·ml-1）色谱图

从图1到图6，我们可以发现伏立康唑、内标溶液、六个不同来源的空白血浆、以及伏立康唑+六个不同来源的空白血浆（最低定量限点）进样后内标和伏立康唑峰与杂峰分离完全，峰形对称，同时最低定量限样的信噪比，其信号大小与其自身空白血浆样在相同保留时间处的噪音相比在5以上。2.标准曲线和定量下限表：伏立康唑的标准曲线线性方程相关系数（r）y=0.00266x+0.01060.9985y=0.00274x+0.005380.9990y=0.00263x+0.0060.9991

y=0.00248x+0.03760.9991

测得线性范围内伏立康唑的回归系数均在0.998以上，自身浓度计算值与其理论值的偏差均在15%以内。2.标准曲线和定量下限表：伏立康唑LLOQ日内测定时的测得值和准确度序号测得值(ng·ml-1)(%)120.90104219.9099.5320.60103420.10101520.50103619.6097.9mean20.27101.40SD0.482.36%CV2.392.33

在最低定量限浓度时，信噪比可以达到5倍以上，平均准确度为101.4%，精密度为2.39%。因此本试验确定的伏立康唑的最低定量限为20ng·ml-1。3.精密度和准确度

批内精密度和准确度：在一日内对一批质控样品按照样品处理方法进行处理，测定后用同日随行的标准曲线进行浓度计算，结果显示，伏立康唑的所有测试样品精密度(2.19%)，准确度(95.1%-103.5%)均在要求的范围内。

批间精密度和准确度：在三天的时间内所测得的质控样品，其变异系数在3.6%以内，准确度的结果符合要求。4.回收率和基质效应回收率：本样品处理方法，伏立康唑低浓度质控、中浓度质控、高浓度质控质控样品的提取回收率分别为102.0%、101.9%、100.8%，变异系数分别为2.59%，0.70%和3.20%；内标样的提取回收率为99.4%，变异系数为3.92%。

基质效应：本样品处理方法，伏立康唑低浓度质控、中浓度度质控、高浓度质控样品的基质效应分别为95.6%、100.7%、98.6%，变异系数分别为6.57%、0.98%和2.99%。5.稳定性

样品室温放置稳定性：伏立康唑的含药浆在室温放置6h后，QCL、QCM、QCH三个质控浓度与理论值的偏差均和变异系数在允许的范围内，说明样品在室温放置6h时仍然稳定。

样品处理后2-8℃放置稳定性：伏立康唑处理后样品2-8C放置24h后，QCL、QCM、QCH三个质控浓度与标定值的偏差和变异系数均在允许的范围内，说明样品后于28C放置24h仍然稳定。5.稳定性

基质中药物-80℃长期稳定性：伏立康唑在人血浆中-80C放置12天（20140802-20140814）稳定。

储备液2-8℃保存稳定性：伏立康唑储备液28℃保存12天（20140802-20140814）是稳定的。结论

本试验从实际需要出发，建立了一个快速、特异、稳定的LC-MS/MS方法，通过采用APCI源的离子化方式，降低了复杂样本基质的干扰，使得分析速度比现有文献报道的方法提高了3倍以上，极大地缩短了分析时间，能及时地为临床医师和临床药师提供相应的信息，以优化临床给药剂量，提高伏立康唑应用的安全性和有效性。致谢大学本科的学习生活即将结束。在