细胞库检定中美双报策略及差异分析

细胞库检定中美双报策略及差异分析StrategyAnalysisofCellLineCharacterizationtoGetChinaNMPAandU.S.FDAApproval

北京义翘神州科技股份有限公司CONTENT细胞库检定国内外法规解读1细胞库检定中美双报策略2细胞库检定中美双报检项方法差异分析3细胞库检定完整解决方案：双检测中心介绍4义翘神州细胞库检定国内外法规解读01义翘神州造成生物制品的污染，直接影响产品的安全性；污染后给企业带来巨大的经济损失。生物制品的安全性国内外法规要求中国、美国、欧洲等药典明确规定必须对细胞库进行充分检定后才可用于生物制品的生产；CDE、FDA审查必查项目。细胞库检定的必要性义翘神州细胞库检定阶段PrimaryCellBank原始细胞库（PCB）MasterCellBank主细胞库（MCB）WorkingCellBank工作细胞库（WCB）UnprocessedBulk收获液（UPB）EndofproductionCell生产终末细胞（EOPC）原则上各级细胞库建好库后要及时进行检定，确保细胞库没有污染后，才能用于下级细胞库的建立或产品的生产。细胞库建立后应至少对MCB细胞及生产终末细胞（EOPC）进行一次全面检定。当生产工艺发生改变时，应重新对EOPC进行检定。每次从MCB建立一个新的WCB，均应按规定项目进行检定。IND或BLA阶段对细胞库的检定要求是相同的，但需满足现行药典法规的要求。义翘神州国内相关法规-中国药典序号发布时间文件名称适用范围12020《中国药典》2020年版三部生物制品通则-生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制单克隆抗体/重组DNA蛋白制品22020《中国药典》2020年版三部生物制品通则-生物制品生产用原材料及辅料质量控制生物制品32020《中国药典》2020年版三部生物制品通则-生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制菌毒种42020《中国药典》2020年版三部生物制品通则-生物制品病毒安全性控制生物制品52020《中国药典》2020年版三部总论-人用疫苗总论人用疫苗62020《中国药典》2020年版三部总论-人用重组DNA蛋白制品总论人用重组DNA蛋白制品72020《中国药典》2020年版三部总论-人用重组单克隆抗体制品总论人用重组单克隆抗体制品82020《中国药典》2020年版三部总论-人用基因治疗制品总论人用基因治疗制品义翘神州国内相关法规-中国药典序号发布时间文件名称适用范围92020《中国药典》2020年版三部（通则1101）无菌检查法生物制品102020《中国药典》2020年版三部（通则3301）支原体检查法生物制品112020《中国药典》2020年版三部（通则3302）外源病毒因子检查法生物制品122020《中国药典》2020年版三部（通则3303）鼠源性病毒检查法生物制品132020《中国药典》2020年版三部（通则3604）新生牛血清生物制品义翘神州序号发布时间文件名称适用范围12002关于进一步加强牛源性及其他相关药品监督管理的公告生物制品22003人用单克隆抗体质量控制技术指导原则单克隆抗体32003人用重组DNA制品质量控制技术指导原则重组DNA制品42003细胞培养用牛血清生产和质量控制技术指导原则生物制品52005生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则单克隆抗体/重组DNA制品/生物组织提取制品62005疫苗生产用细胞基质的技术审评一般原则疫苗72017细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）细胞治疗产品82018细胞治疗产品申请临床试验药学研究和申报资料的考虑要点细胞治疗产品国内相关法规-指导原则义翘神州国内相关法规-指导原则序号发布时间文件名称适用范围92022《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）》生物制品102022《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》生物制品112022《免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》生物制品122015《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》干细胞制剂132021《国家干细胞转化资源库标准干细胞制剂放行检验规范（试行）》干细胞制剂142021《人源性干细胞产品药学研究与评价技术指导原则》（征求意见稿）干细胞制剂义翘神州发布时间发布者文件名称适用范围1999ICHICHQ5A（R1/R2）：ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigen

人体或动物细胞来源的生物技术产品的病毒安全评价生物制品1999ICHQ5DDerivationandCharacterizationofCellSubstratesUsedforProductionofBiotechnological/BiologicalProducts

用于生物技术/生物制品的细胞基质的来源的表征单克隆抗体/重组DNA蛋白制品1993FDACBERFDAPointstoConsiderintheCharacterizationofCellLinesUsedtoProduceBiologicals用于生物制品生产的细胞系鉴定的考虑要点单克隆抗体/重组DNA蛋白制品1997FDACBERFDAPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsForHumanUse

人用单克隆抗体制品制备和检测中的考虑要点单克隆抗体制品2010FDACBERGuidanceforIndustry：CharacterizationandQualificationofCellSubstratesandOtherBiologicalMaterialsUsedintheProductionofViralVaccinesforInfectiousDiseaseIndications病毒疫苗生产用细胞库检定工业指南疫苗产品2020FDACBERChemistry,Manufacturing,andControl(CMC)InformationforHumanGeneTherapyInvestigationalNewDrugApplications(INDs)基因治疗产品IND申报CMC指导文件基因治疗产品/U.S.PharmacopeialConvention《U.S.Pharmacopoeia》美国药典//EMA《EuropeanPharmacopoeia10.0》欧洲药典//FederalgovernmentofU.S.CodeofFederalRegulationsTitle9AnimalsProducts–Part113动物产品国外相关法规文件义翘神州序号来源文件名称1USP<63>MYCOPLASMATESTS支原体检测2USP<71>STERILITYTESTS无菌检测3USP<1024>BOVINESERUM牛血清检测4USP<1043>ANCILLARYMATERIALSFORCELL,GENE,ANDTISSUE-ENGINEEREDPRODUCTS用于细胞、基因和组织工程产品的辅助材料5USP<1046>CELLULARANDTISSUE-BASEDPRODUCTS细胞和组织产品6USP<1047>GENETHERAPYPRODUCTS基因治疗产品7USP<1050>VIRALSAFETYEVALUATIONOFBIOTECHNOLOGYPRODUCTSDERIVEDFROMCELLLINESOFHUMANORANIMALORIGIN源自人类或动物的细胞系生物技术产品的病毒安全评估8USP<1235>VACCINESFORHUMANUSE—GENERALCONSIDERATIONS人用疫苗-基本考量9USP<1237>VIROLOGYTESTMETHODS病毒测试国外相关法规-美国药典USP生物通则义翘神州细胞库检定中美双报策略02义翘神州细胞库检测NMPA&FDA申报要求IND阶段临床ⅠⅡⅢ期BLA阶段FDA:MCBWCBUPBEOPC无强制要求FDA:临床批UPB每批都要做批放行检测（至少1批需要进行适用性试验）NMPA&FDA:MCBWCB3批EOPC3批UPB（其中1批要做体内法检测）NMPA:MCBWCBUPB至少1批EOPCNMPA：未作要求，但一般也要提交每批的有限检定结果义翘神州检测项目MCBWCBEOPC细胞鉴别＋＋（＋）细菌、真菌检查＋＋＋分枝杆菌检查（＋）（＋）（＋）支原体检查＋＋＋内外源病毒污染检查细胞形态观察及血吸附试验＋＋＋体外不同细胞接种培养法＋＋＋动物和鸡胚体内接种法＋－＋逆转录病毒检查＋－＋种属特异性病毒检查（＋）－－牛源性病毒检查（＋）（＋）（＋）猪源性病毒检查（＋）（＋）（＋）其他特定病毒检查（＋）（＋）（＋）染色体检查（＋）（＋）（＋）成瘤性检查（＋）（＋）－致瘤性检查（＋）（＋）－细胞库检定项目要求2020版中国药典三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制义翘神州细胞库检定项目要求ICHQ5A（R1/R2）&Q5DItemsContentsMCBWCBCellsatthelimitTestsofIdentity鉴别IsoenzymeanalysisorDNAanalysiset.al同工酶或DNA分析+++TestsofMicrobial微生物检测Thepresenceofbioburden(bacteriaandfungi)无菌+++Mycoplasma支原体+++TestsforRetrovirusesandOtherEndogenousViruses逆转录病毒及其他内源性病毒Infectivity感染性实验+

+Electronmicroscopy电镜+

+Reversetranscriptase逆转录酶活+

+TestsforAdventitiousViruses外源性病毒InvitroAssays体外法或NGS+(+)+InvivoAssays体内法或NGS+(+)+Antibodyproductiontests抗体产生实验HAP/MAP/RAP或分子实验+

Virus-specifictests特异性病毒Bovinevirusesassay牛源(+)(+)(+)Porcinevirusesassay猪源(+)(+)(+)MVM鼠细小(+)

(+)Vesivirus/Calicivirus杯状病毒(+)

(+)Othervirus-specifictests其他(+)

(+)TestsforKaryologyandTumorigenicity细胞核型和致瘤性Karyology细胞核型(+)

Tumorigenicity致瘤性(+)

Cellsatthelimit:达到体外细胞传代限次的生产用细胞，也可以理解为生产终末细胞义翘神州细胞库检定项目要求FDAPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsForHumanUse检测MCBWCBEPCCellLineQualification细胞系鉴定Sterility无菌+++Mycoplasma支原体+++Virus病毒TestforAdventitiousViruses外源性病毒+-+Virus-specifictests

特异性病毒*+--Retrovirus逆转录酶病毒+-+Authenticity细胞鉴定+++注：*视情况而定检测啮齿动物、灵长类或人类病毒(逆转录病毒除外)。小鼠杂交瘤不需要逆转录病毒检测。1.用于生产生物治疗用单抗的细胞系检定应至少检测一次主细胞库(MCB)和工作细胞库(WCB)2.无菌及支原体检测确认细胞系是否有细菌、真菌和支原体污染3.对外源病毒(逆转录病毒除外)的检测应包括常规的体内和体外试验4.特异性病毒检测(逆转录病毒除外)：啮齿动物细胞系，如仓鼠、小鼠、大鼠抗体产生实验；对来源于人类、非人灵长类动物或其他动物的细胞系也需进行特异性病毒检测义翘神州细胞库检定项目要求FDAPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsForHumanUse检测UPB纯化产品终产品Lot-to-lotproductsafetytests批次间产品安全检测Sterility无菌+*++Mycoplasma支原体+--Virus病毒TestforAdventitiousViruses外源性病毒+--Virus-specifictests特异性病毒+--Retrovirus逆转录病毒+--Polynucleotide多聚核苷酸-+-Endotoxin内毒素--+注：1.*在此阶段，具有可接受限度的生物负载试验就可以。2.对于非腹水来源的生物制品，基于三种指示细胞系的体外检测实验需进行常规检测。动物体内检测法一般只进行一次，但当生产工艺发生改变时需重测。仅对腹水来源生物制品要求进行大鼠/仓鼠/小鼠抗体产生实验。3.在鼠源细胞制品的UPB中用电镜方法定量内源性逆转录病毒样颗粒。对于非鼠源杂交瘤细胞，若MCB或者EOPC检测逆转录病毒呈阳性，则需结合电镜和其他共培养的方法来确证收获液中逆转录病毒风险。义翘神州中美双报检测方案-CHO细胞检测项目检测方法NMPA&FDAMCBWCBEOPCUPB细胞鉴别同工酶法/分子法+++

无菌直接接种法/薄膜过滤法+++

微限薄膜过滤法

+分枝杆菌培养法/分子法++

+

支原体培养法++++指示细胞（VERO）培养法++++体外法细胞形态观察（细胞培养直接观察法）+++

体外不同传代细胞培养（vero、MRC-5、CHO-K1）++++体内法动物体内接种法（乳鼠、小鼠、豚鼠）+

++（只测1批）鸡胚接种检查+

++（只测1批）逆转录病毒检测PERT（TM-PERT）定性+

+

TEM+

++PG4S+L-（感染性）+

+

种属特异性病毒因子检查HAP、MAP或qPCR+

其他特定病毒检查鼠细小病毒检查（qPCR法、细胞感染试验法）+

++牛源病毒检测（细胞培养法、荧光抗体检测）（+）

猪源病毒检测（细胞培养法、qPCR法）（+）

牛多瘤病毒（qPCR法）（+）

杯状病毒（qPCR法）（+）猪戊型肝炎病毒（qPCR法）（+）

义翘神州中美双报检测方案-293细胞检测项目检测方法NMPA&FDAMCBWCBEOPCUPB细胞鉴别

STR法及其他+++

无菌直接接种法/薄膜过滤法+++

微限薄膜过滤法

+分枝杆菌培养法/分子法+

+

支原体培养法++++指示细胞（VERO）培养法++++体外法细胞形态观察（细胞培养直接观察法）+++

体外不同传代细胞培养（vero、MRC-5、HEK293）++++体内法动物体内接种法（乳鼠、小鼠、豚鼠）+

++（只测1批）鸡胚接种检查+

++（只测1批）逆转录病毒检测PERT（TM-PERT）定性+

+

TEM+

++培养法（感染性）+

+

种属特异性病毒因子检查人源病毒检测（qPCR法）+

其他特定病毒检查牛源病毒检测（细胞培养法、荧光抗体检测）（+）

猪源病毒检测（细胞培养法、qPCR法）（+）

复制型腺病毒检测（培养法）（+）义翘神州细胞库检定中美双报检项方法差异分析03义翘神州检项差异中国美国总体原则法规ChP、CDE等USP、FDA、9CFR等微生物检测细菌、真菌检查菌株来源CMCC/ATCCATCC菌株种类大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌和黑曲霉金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌和巴西曲霉培养基&温度生物制品FTM：TSB支数=2:1

FTM，一份置20-25℃；一份置30-35℃培养生物制品未作要求，FTM：TSB=1:1FTM置30-35℃培养阳性对照要求未作要求分枝杆菌检查检测项目推荐推荐分枝杆菌检查未作要求支原体检查检测试验无阳性对照实验要求有阳性对照支原体要求供试品适用性未作要求需做干扰试验培养法培养基液体培养基&半流体培养基（琼脂培养基）液体培养基&琼脂培养基中美检项差异—微生物检测义翘神州检项差异中国美国内、外源病毒因子检查细胞形态观察及血吸附试验检测项目推荐要求做未作要求体外不同指示细胞接种培养法检测培养时间14天（若已知待检细胞可支持人或猴巨细胞病毒（CMV）的生长，则应在接种人二倍体细胞后至少观察28天）28天红细胞悬液成分使用0.5%鸡血、豚鼠血红细胞混合液分别使用0.5%鸡红细胞、豚鼠红细胞、恒河猴红细胞或人O型血动物和鸡胚体内接种法是否需要盲传不需要需要盲传接种途径鸡胚（2种）：尿囊腔、卵黄囊乳鼠/成年小鼠（2种）脑内、腹腔鸡胚（3种）：尿囊腔、卵黄囊、绒毛膜尿囊腔乳鼠/成年小鼠（3种）脑内、腹腔、口服逆转录病毒检查检项选择优先逆转录酶活检测，若检测结果为阳性，则需进行透射电镜检查或PCR法及感染性试验优先检测感染性试验和电镜观察，若检测结果阴性，则进行逆转录酶活检测中美检项差异—内外源病毒检测义翘神州中美检项差异—特异性病毒检查分类差异中国美国鼠源病毒方法qPCR或细胞法&鸡胚法&抗体产生实验抗体产生实验、NAT病毒种类HRSV、LCMV、Reo-3、SV、ECTV、MAV、PVM、MuLV、MVMMAP—16种：ECTV、HRSV、KVirus、LDM、LCMV、MMV、MAV、MCMV、TMEV、MHV、EDIM、PVM、MPyV、Reo-3、SV、MTVHAP—5种：LCMV、PVM、Reo-3、SV、SV5RAP—9种：HRSV、KRV、TMEV、PVM、RCV、Reo-3、SV、SDAV、ToolV人源病毒病毒种类人EB病毒、人巨细胞病毒HCMV、人逆转录病毒(HIV-1/2、HTLV-1/2)、人肝炎病毒（HAV、HBV、HCV）、人细小病毒B19、人乳头瘤病毒HPV、人多瘤病毒HPyV、人腺病毒HAdV、人疱疹病毒HHV-6/7/8EBV、HCMV、HIV-1、HIV-2、HTLV-1、HTLV-2、HAV、HBV、HCV、B19、HPV、HPyV-JC、HPyV-BK、HAdV、HHV6、HHV7、HHV8猴源病毒病毒种类猴多瘤病毒（如SV40）、猴免疫缺陷病毒（SIV）等SV40,SIV,SFV,SRV,STLV义翘神州中美检项差异—牛源病毒检测中国(ChP、CDE等)美国(USP、FDA、9CFR等)传染性牛鼻气管炎病毒（Infectiousbovinerhinotracheitisvirus,IBRV）牛呼吸道合胞体病毒（Bovinerespiratorysyncytial,BRSV）蓝舌病毒（Bluetonguevirus,BTV）牛多瘤病毒（Bovinepolyomavirus，BPyV）牛副流感病毒Ⅲ（Bovineparainfluenzavirustype3,BPI-3）牛腺病毒Ⅲ（Bovinetype3,BAV-3）牛呼肠孤病毒（Reovirustype3,REO-3）牛细小病毒（Bovineparvovirus,BPV）牛腹泻病毒（Bovineviraldiarrheavirus,BVDV）狂犬病毒(Rabiesvirus,RV)中美检项差异—猪源病毒检测猪细小病毒（Porcineparvovirus,PPV）猪圆环病毒（Porcinecircovirus,PCV1，PCV2）猪细环病毒（Torquetenosusviruses,TTSuV1，TTSuV2）猪腺病毒（Porcineadenovirus,PAV）传染性肠胃炎病毒（Transmissiblegastroenteritisvirus,TGEV）猪凝血型脑炎病毒（PorcinehemagglutinatingEncephalitisVirus,PHEV）呼肠孤病毒3型（Reovirustype3,REO-3）牛病毒性腹泻病毒（Bovineviraldiarrheavirus,BVDV）狂犬病毒(Rabiesvirus,RV)中国(ChP、CDE等)美国(USP、FDA、9CFR等)细胞库检定完整解决方案：双检测中心介绍04义翘神州北京苏州北京生物安全检测中心•

体系认证：已获得CNAS

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管理：GMP、GLP、CNAS

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实验室：生物二级+负压条件拥有一支专业的技术团队，从2018年开始对外承接项目，有着极其丰富的检测经验和专业的技术能力。团队人员深刻了解并能够随时跟踪中外（如NMPA、FDA、ICH、EMA等）最新法规及要求，为企业药品申报保驾护航。苏州分析检测中心苏州分析测试中心是一个专门提供细胞库检测及病毒清除验证服务的检测中心，占地面积广，通量大，可以解决更多客户需求。同时实验室严格遵循GLP和GMP规范进行管理。•

体系认证：已通过CMA现场评审，CNAS（预计23年下半年）

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管理：GMP、GLP、CNAS

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实验室：生物二级+负压条件北京&苏州双检测中心义翘神州检测中心环境检测室冰箱间厂区走廊样品处理间显微成像室义翘神州配套设施完善B+A环境共聚焦显微镜透射电镜GXP、CNAS管理体系B+A环境、病毒负压实验室、生物安全二级实验室配套透