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微生物的培育与应用一、对点练小题,落实主干学问1.做“微生物的分别与培育”试验时,下列叙述正确的是()A.高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖B.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培育基溅到皿盖上C.为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培育皿中菌落时,应标记在皿底上解析:选D在高压灭菌的操作过程中,加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降,待压力表的指针指到零时,打开放气阀,旋松螺栓,打开盖子。倒平板时,用左手将培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后,再用其挑取菌落。在微生物的培育中,一般将培育皿倒置,在皿底上用记号笔做标记。2.有关微生物的培育与应用,下列说法正确的是()A.通常运用液体培育基分别获得细菌单菌落B.大肠杆菌的纯化培育过程包括培育基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段C.接种前需对培育基、培育皿、接种环、试验操作者的双手等进行严格灭菌处理D.某一稀释度的3个平板的菌落数依次为M1、M2、M3,以M2作为该样品菌落估计值解析:选B通常运用固体培育基分别获得细菌单菌落,A错误;大肠杆菌的纯化培育过程包括培育基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段,B正确;培育基、培育皿、接种环都须要运用恰当方式进行灭菌处理,而试验操作者的双手只能进行消毒而不能进行灭菌处理,C错误;某一稀释度的3个平板的菌落数依次为M1、M2、M3,为了保证结果精确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数,以它们的平均值作为该样品菌落数的估计值,D错误。3.(2024年1月新高考8省联考·江苏卷)平板涂布是分别菌种常用的方法,下列相关叙述不恰当的是()A.固体培育基灭菌后,应冷却至50℃左右时倒平板B.倒好的平板需马上运用,以免表面干燥,影响菌的生长C.平板涂布分别到的单菌落需进一步划线纯化D.平板涂布法既可用于微生物的分别,也可用于微生物的计数解析:选B固体培育基灭菌后,应冷却至50℃左右时倒平板,温度过低易导致污染,温度过高无法操作,A正确;倒好的平板须要冷却后运用,且不宜久存,以免表面干燥,影响接种后微生物的生长,B错误;平板涂布分别到的单菌落仍需进一步划线纯化,以利于菌种保藏,C正确;平板涂布法既可用于微生物的分别,也可用于微生物的计数,D正确。4.(2024·江苏高考)为纯化菌种,在鉴别培育基上划线接种纤维素降解细菌,培育结果如图所示。下列叙述正确的是()A.倒平板后需间歇晃动,以保证表面平整B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多,应从Ⅲ区挑取单菌落C.该试验结果因单菌落太多,不能达到菌种纯化的目的D.菌落四周的纤维素被降解后,可被刚果红染成红色解析:选B倒平板后无需间歇晃动,A错误;图中Ⅰ区、Ⅱ区的细菌数量太多,Ⅲ区的细菌数量较少,可从Ⅲ区挑取单菌落,B正确;Ⅲ区中存在单菌落,该试验结果能达到菌种纯化的目的,C错误;刚果红能与纤维素形成红色复合物,但不能和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖形成红色复合物,因此菌落四周的纤维素被降解后,不能被刚果红染成红色,D错误。5.筛选淀粉分解菌需运用以淀粉为唯一碳源的培育基。接种培育后,若细菌能分解淀粉,培育平板经稀碘液处理,会出现以菌落为中心的透亮圈(如图),试验结果见下表。菌种菌落直径:C(mm)透亮圈直径:H(mm)H/C细菌Ⅰ5.111.22.2细菌Ⅱ8.113.01.6有关本试验的叙述,错误的是()A.培育基除淀粉外还含有氮源等其他养分物质B.筛选分解淀粉的细菌时,菌液应稀释后涂布C.以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外D.H/C值反映了两种细菌分解淀粉实力的差异解析:选C微生物的培育基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等,A正确;筛选分解淀粉的细菌时,试验流程为取样→梯度稀释→样品涂布到鉴别分解淀粉的细菌的培育基上→选择产生透亮圈的菌落,B正确;由题意可知,淀粉被分解后经稀碘液处理才能出现透亮圈,淀粉分解须要淀粉酶的催化,图中两种细菌都出现了以菌落为中心的透亮圈,说明以上两种细菌均能将淀粉酶分泌到细胞外来发挥作用,C错误;透亮圈是细菌分解淀粉得到的,H表示透亮圈直径,C表示菌落直径,因此H/C值可以反映两种细菌分解淀粉实力的差异,即H/C值越大,细菌分解淀粉的实力越强,D正确。6.聚羟基脂肪酸酯(PHA)是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯,它具有类似于合成塑料的理化特性,且废弃后易被生物降解,可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中找寻生产PHA菌种的流程图如下。下列说法正确的是()①取湖水→②接种在培育基上→③培育→④挑取单菌落,分别扩大培育→⑤检测菌体的数目和PHA的产量→⑥获得目标菌株A.步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培育基上B.扩大培育时,接种后须要将培育基放入恒温箱倒置培育,以防杂菌污染C.④所用到的培育基应加入琼脂,以便挑取单菌落获得纯化菌株D.挑取菌落时,应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量解析:选D步骤②可用稀释涂布平板法接种到含盐量较高的选择培育基上,A错误;扩大培育应选用液体培育基,液体培育基中不应加入琼脂,B、C错误;挑取菌落时,应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量,D正确。二、系统练大题,强化科学思维7.(2024·全国卷Ⅲ)回答下列与细菌培育相关的问题。(1)在细菌培育时,培育基中能同时供应碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培育基时要依据所培育细菌的不同来调整培育基的pH,其缘由是____________________________。硝化细菌在没有碳源的培育基上________(填“能够”或“不能”)生长,缘由是________________________________。(2)用平板培育细菌时一般须要将平板________(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落,探讨人员通常可依据菌落的形态、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物,缘由是_______________________________________________________________________________________________________________。(4)有些运用后的培育基在丢弃前须要经过________处理,这种处理可以杀死丢弃物中全部的微生物。解析:(1)蛋白胨中含有碳元素和氮元素,可为细菌生长供应碳源和氮源,葡萄糖只能供应碳源,NaNO3只能供应氮源。不同细菌生长繁殖所须要的最适pH不同,制备培育基时要依据所培育细菌种类的不同来调整pH。硝化细菌是自养生物,可通过化能合成作用利用空气中的CO2合成有机物,所以在没有碳源的培育基上也能生长。(2)用平板培育细菌时,一般将平板倒置,防止皿盖上的水珠落入培育基中造成污染。(3)在肯定的培育条件下,不同微生物表现出各自稳定的菌落特征,因此探讨人员可依据菌落的这些特征初步区分微生物的种类。(4)消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物,灭菌可杀死物体内外全部的微生物,包括芽孢和孢子。运用后的培育基丢弃前要进行灭菌处理,防止其中的微生物感染操作者或污染环境。答案:(1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在肯定的培育条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌8.某校生物探讨性学习小组的同学欲调查某冷饮店的冰块中大肠杆菌的含量。详细试验步骤如下:第一步:配置培育基(成分:蛋白胨、氯化钠、乳糖、水、琼脂和X);其次步:制作无菌平板;第三步:设置空白比照组和试验组,比照组接种①,试验组接种②;第四步:将各组平板置于37℃恒温箱中培育一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题:(1)培育基中的蛋白胨可以为大肠杆菌供应______________________。(2)完善步骤三,①是____________,②是____________。(3)将1mL冰块水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液;经适当培育后,3个平板上的菌落数分别为39、38和37,据此可得出每升水样中的活菌数为________。(4)若该小组在空白比照组的平板上检测到少许菌落,请分析可能的缘由:________________________________________________________________________。解析:(1)培育基中的蛋白胨可以为大肠杆菌供应碳源、氮源和维生素。(2)步骤三中比照组应为空白比照,用来检验培育基是否合格,故比照组①接种适量无菌水,试验组②接种等量冰块水。(3)据题意可得出每升水样中的活菌数为(39+38+37)÷3×100÷0.1×1000=3.8×107。(4)若该小组在空白比照组的平板上检测到少许菌落,可能的缘由:培育基灭菌不合格或倒平板(接种)过程被污染。答案:(1)碳源、氮源和维生素(2)适量无菌水等量冰块水(3)3.8×107(4)培育基灭菌不合格或倒平板(接种)过程被污染9.(2024·东莞模拟)Ag/TiO2作为一种常见的半导体光催化剂,在可见光照耀下不仅可杀灭饮用水中的细菌等微生物,降解水中的有机化合物,还能循环利用,因此被广泛运用。某探讨小组制备了Ag/TiO2空心微球,现欲探究不同载银量的Ag/TiO2空心微球的杀菌性能。回答下列问题:(1)培育大肠杆菌:制备相宜大肠杆菌生长的培育基,将培育基等置于__________________中灭菌20min;在无菌环境中倒平板,待平板冷凝后,将平板倒置,是为了________________________________________________________________________________________________________________________________________________和防止培育基水分过度蒸发。将大肠杆菌制备成菌悬液,分别纯化。(2)杀菌性能检测:挑取菌落制成菌悬液,用__________(工具)接种于无菌平板表面,使其匀称生长,布满平板;用浸透了__________________________________的小滤纸片(试验组)和浸透了________的小滤纸片(空白比照),分别放在涂好菌的平板的不同位置;将平板置于恒温箱中培育一段时间,视察记录滤纸片四周的________________________________________________________________________。(3)测定饮用水所含的大肠杆菌数目,还有一种特殊的方法:将已知体积的饮用水过滤后,将___________放在加入____________的培育基上(大肠杆菌菌落呈黑色),依据黑色菌落的数目,可计算出水样中大肠杆菌的数量。解析:(1)制备相宜大肠杆菌生长的培育基,将所需培育皿、培育基等置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌20min,以避开杂菌污染培育基。在无菌环境中倒平板,待平板冷凝后,将平板倒置,是为了防止皿盖上的冷凝水滴落,污染培育基和防止培育基水分过度蒸发。(2)杀菌性能检测时应当在固体培育基上视察菌落的数量,因此须要用稀释涂布平板法分别大肠杆菌,操作时用涂布器将大肠杆菌悬液接种于无菌平板表面,使其匀称生长,布满平板。由于本试验是探究不同载银量的Ag/TiO2空心微球的杀菌性能,因此须要在培育基中加入不同载银量的Ag/TiO2空心微球悬浊液,同时再做一个空白比照试验,即用浸透了不同载银量的Ag/TiO2空心微球悬浊液的小滤纸片(试验组)和浸透了无菌水的小滤纸片(空白比照),分别放在涂好菌的平板的不同位置;将平板置于恒温箱中培育一段时间,视察记录滤纸片四周抑菌圈(透亮圈)大小(直径)。(3)测定饮用水所含的大肠杆菌数还可以用滤膜法。滤膜法的大致流程:用滤膜过滤待测水样,这样水样中的细菌留在滤膜上,将滤膜放在加入伊红美蓝的培育基上培育,统计黑色菌落数目。答案:(1)高压蒸汽灭菌锅防止皿盖上的冷凝水滴落,污染培育基(2)涂布器不同载银量的Ag/TiO2空心微球悬浊液无菌水抑菌圈(透亮圈)大小(直径)(3)滤膜伊红美蓝10.塑料的生物降解,是一个世界性的难题。北京航空航天高校赵军教授带领的团队所进行的探讨,引人瞩目。他们从一种吃塑料(聚乙烯)的蜡虫肠道内容物中分别出8个菌株,步骤如下,并对其中的2个菌株进行了深化探讨。(1)塑料的生物降解,主要是利用某些生物分泌特定的________的作用。(2)步骤中的“培育”是为了______________,其培育基应以聚乙烯为________,并加入水和________等制作而成。培育肯定时间后,依据________________________________________________________________________对菌种进行初步分别。(3)探讨人员将其中两个菌株YT1、YP1分别接种到含有聚乙烯膜的培育基中连续培育,部分结果如图1、2所示。①图1显示,两个菌株在试验条件下,增殖实力更强的是________。图中缺少比照组的数据,依据试验设计的意图,比照组的细胞密度应当为________。②图2是对两个菌株进行聚乙烯减重分析的试验结果,可以得出的主要结论是________________________________________________________________________。解析:(1)塑料的生物降解主要是利用某些生物分泌特定的酶的作用。(2)步骤中的“培育”是为了增加目的菌株数量,其培育基应以聚乙烯为唯一碳源,并加入水和无机盐等制作而成。培育肯定时间后,依据菌落特征对菌种进行初步分别。(3)①由于在同一时间范围内,YT1菌株的细胞密度较YP1更大,说明增殖实力更强的是YT1。图中缺少比照组的数据,空白比照的细胞密度应当为0。②由图2曲线改变可以得出的主要结论是YT1和YP1都能降解聚乙烯,其中YP1的降解实力更强。答案:(1)酶(2)增加目的菌株数量唯一碳源无机盐(和氮源)菌落特征(或菌落的形态、菌落的颜色)(3)①YT10②YT1和YP1都能降解聚乙烯,其中YP1的降解实力更强11.(2024·南宁模拟)如图所示为从土壤中分别、纯化和扩大培育某种微生物的流程图。回答下列问题:(1)称量土样时,土壤________(填“须要”或“不须要”)进行消毒和灭菌。(2)进行梯度稀释操作时,若取待稀释菌液1mL,注入9mL的无菌水,则该1mL待稀释菌液被稀释了______倍。(3)平板浇注法分别指的是将1mL稀释的样品放于空白的无菌培育皿之后,将冷却到45~50℃的培育基倒入,轻摇混匀、凝固,然后放于恒温箱中培育。从土壤中分别酵母菌和醋酸菌时,可以运用平板浇注法的是______,理由是________________________________________________________________________。(4)划线纯化阶段,对图示培育皿进行划线时接种环取菌液________次,该培育皿划线完成时接种环共需进行灼烧灭菌________次。(5)扩大培育阶段,所用培育基是________(填“液体”或“固体”)培育基。解析:(1)因为要从土壤中分别相关的微生物,所以不须要对土壤进行消毒和灭菌。(2)若取待稀释菌液1mL,注入9mL的无菌水,则菌液相当于被稀释了10倍。(3)平板浇注会使部分菌体埋入培育基中,酵母菌是兼性厌氧型生物,可以在低氧甚至无氧环境下生存繁殖,而醋酸菌是需氧生物,不能在无氧条件下生存,故从土壤中分别酵母菌和醋酸菌时,只有酵母菌可以运用平板浇注法。(4)划线纯化阶段,图中只有一个培育皿,接种环取1次菌液即可,每次接种前后都需对接种环进行一次灼烧灭菌处理,图中共划了5个区,故共灼烧6次。(5)扩大培育常用液体培育基进行培育,以增加微生物的数量。答案:(1)不须要(2)10(3)酵母菌平板浇注会使部分菌体埋入培育基中,酵母菌是兼性厌氧型生物,可以在低氧甚至无氧环境下生存繁殖(4)16(5)液体12.漆酶是真菌、细菌中的氧化酶,可用于有毒化合物的生物消退。为提高产漆酶菌株(C1)的产酶量,对其培育条件进行优化探讨。Ⅰ.培育基成分的优化探讨:为确定最佳的养分成分组合,科研人员配制了9组以A、B为主要养分成分的培育基,并添加0.04%的愈创木酚(被氧化后形成红褐色)。接种C1培育后,结果如表所示。试验组养分成分培育结果(mm)A(20g/L)B(2.84g/L)显色圈直径1葡萄糖蛋白胨372葡萄糖(NH4)2SO4493葡萄糖KNO3234蔗糖蛋白胨255蔗糖(NH4)2SO4526??327麦芽糖蛋白胨588麦芽糖(NH4)2SO4569麦芽糖KNO355(1)试验组6中的成分A、B

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