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文档简介
1医学免疫学实验-2-细胞免疫体外检测2E-花环试验、淋巴细胞转化试验(示教)大、小吞噬细胞的吞噬现象(示教)白细胞的吞噬作用(操作)本次实验内容3Developmentanddifferentiationofhematopoieticstemcell场所:骨髓造血干细胞的发育与分化造血干红胞髓样干细胞淋巴样干细胞场所:胸腺4细胞免疫的测定(一)T细胞总数及亚群数量的测定(二)T细胞功能的测定1.淋巴细胞增殖试验
形态学方法、MTT比色法、3H-TdR掺入法等。2.细胞毒试验3.细胞因子测定流式细胞仪:不同类型细胞的计数;亚群:HIV,CD4+;
Th1/Th2:肿瘤/结核,类风/溃结,(丝裂原)CD8+T,鸡红细胞ELISA:Th1/Th2细胞因子5原理:T细胞表面有绵羊红细胞受体(E受体,CD2/LFA-2),形
成花环。计数200个淋巴细胞,结合3个或以上SRBC者
为一个E花环(阳性)。T+TTT1)T细胞E花环形成试验(E-rosettetest)目的:检测T细胞数量,判断机体的细胞免疫状况。总花环(Et):T细胞与SRBC,37℃水浴,5min;4℃,1-2小时;[50-80%]活性花环(Ea):不经4℃处理,低速离心,沉淀的花环;(大)[20-40%]E受体E抗原T细胞的异质性:不同类型T细胞与SRBC结合能力、结合后的稳定性不同。6正常范围:50%-80%玫瑰花环试验E-rosettetest72)T细胞增殖试验(淋巴细胞转化试验)
原理:T细胞在体外受到刺激物(PHA,ConA)作用下,
细胞代谢和形态相继发生变化,细胞变大,浆扩
大,出现空泡、核仁明显,染色质疏松→转化为
具有分裂能力的淋巴母细胞。目的:检测T细胞活性。8计数200个淋巴细胞,算转化率。淋巴母细胞(体积增大,形态不整齐,核大,松散,有核仁,胞浆变宽,出现空泡)93)大、小吞噬细胞吞噬试验大吞噬细胞-单核巨噬细胞小吞噬细胞-中性粒细胞单核巨噬细胞吞噬试验:核呈肾形,1.实验前3天,小鼠腹腔,注射可溶性淀粉肉汤,
6%/1mL.2.再腹腔注射1%/0.5mL鸡红C,30min,轻揉3.处死、取腹腔液,瑞氏染色。瑞氏染色:蓝色A.大吞噬细胞吞噬实验(示教)10B.中性粒细胞的吞噬作用标记加肝素采血加等量菌液,37oC反应30min加沉淀细胞(10ul)*,30-45o快速推片自然干燥加瑞氏染液反应30‘’-1min(马上),后加入等量蒸馏水反应3-5min(1-2)细水流冲洗吸水纸印干后油镜检查混匀操作:分叶核细菌将推玻片向1的方向稍抽回,当血液充满推玻片的宽度后,以一定均匀的速度向2的方向推动。11瑞氏染液:由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复
合染料.嗜酸性粒细胞:?嗜碱性粒细胞:?中性粒细胞:?淋巴细胞:圆单核细胞:肾形结果:12中性粒细胞:分裂/分叶嗜碱性粒细胞:蓝色嗜碱性粒细胞:蓝色嗜酸性
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