高考生物总复习 考点1 微生物的实验室培养(515考)新人教版

考点1微生物的实验室培养(5年15考)(新课标全国Ⅱ卷、四川理综、江苏卷，北京卷、浙江、山东，天津)一、培养基1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质2．营养构成eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(1一般都含有水、、无机盐、碳源、氮源,2还需满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及O2的要求))3．培养基的种类及用途划分标准培养基的种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、鉴定固体培养基微生物的分离与鉴定、活菌计数、菌种保藏化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如在培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素；在培养金黄色葡萄球菌时，可在培养基中加入高浓度的食盐等)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基检测饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)特别提醒自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同：①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。②含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。二、无菌技术1．消毒eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(特点：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死,物体表面或内部的部分微生物不包括芽孢和孢子,常用方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法))2．灭菌eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外,所有微生物包括芽孢和孢子,常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌))3．消毒和灭菌比较比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能 三、微生物的纯化培养及菌种的保藏1．原理在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。2．制备固体培养基的流程eq\x(计算)→eq\x(称量)→eq\x(溶化)→eq\x(灭菌)→eq\x(倒平板)3．纯化大肠杆菌的方法常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(1)平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(如下图示)(2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(如下图所示)①系列稀释操作(如下图所示)②涂布平板操作(如下图所示)(3)两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌4.培养接种后的培养皿放入恒温箱内培养5．菌种保藏(1)临时保藏eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(操作：采用固体斜面培养基，菌落长成后，放入4℃冰箱中保藏，以后每3～6个月，,转移一次新的培养基,缺点：保存时间不长，菌种易被污染或,产生变异))(2)长期保存法：甘油管藏法，放在－20_℃下保存特别提醒(1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项①倒平板的适宜温度是50℃②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(2)平板划线操作的注意事项①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。②灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区不要与第一区相连。④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。微生物培养与分离的考查1．(·江苏)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()。A．培养基分装到培养皿后进行灭菌B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D．培养过程中每隔一周观察一次解析本题考查微生物的分离和培养过程中的操作要求和培养条件等相关知识，意在考查考生的知识运用能力和实验处理能力。培养微生物的过程中应先灭菌再倒平板，A错误；每一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌，B正确；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件；培养过程中观察间隔的时间一般不超过24h。答案B微生物实验室培养的拓展应用2．(·新课标全国Ⅱ理综)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用____________法或____________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用__________法接种于固体培养基表面，在37℃(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A____________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B____________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明____________________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的____________________________________________________。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好选用抗生素__________。解析(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布平板法或平板划线法。(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用稀释涂布平板法将微生物接种在培养基上。(3)在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明圈，说明此种抗生素可抑制该细菌；透明圈的大小表示此种抗生素抗菌效果的强弱。据此可判断抗菌效果强弱依次是A、C、B；D的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。答案(1)平板划线稀释涂布(或涂布)平板(2)稀释涂布平板(涂布)(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A归纳比较1．培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。2．培养基的营养构成(1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；(2)不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质