il-10在子宫腺肌病种植窗期在位内膜的表达与子宫腺肌病内膜容受性的关系

1/1il-10在子宫腺肌病种植窗期在位内膜的表达与子宫腺肌病内膜容受性的关系IL-10在子宫腺肌病种植窗期在位内膜的表达与子宫腺肌病内膜容受性的关系【摘要】目的：

分析IL-10在子宫腺肌病患者在位内膜种植窗期的表达，探讨子宫腺肌病患者内膜容受性下降的免疫学因素。

方法：

分别取子宫腺肌病、非腺肌病患者在自然周期种植窗期的内膜组织。

子宫腺肌病患者18例，对照组16例，采用免疫组化SP法检测内膜组织中IL-10的表达。

结果：

IL-10在腺肌病患者内膜腺体和间质的表达较非腺肌病患者减弱（P0.05），差异有统计学意义。

结论：

子宫腺肌病患者在位内膜中具有妊娠保护作用的IL-10表达减低，推测IL-10的表达降低是导致子宫腺肌病患者内膜容受性下降的免疫学因素。

【关键词】子宫腺肌病；在位内膜；IL-10；内膜容受性RelationshipbetweenexpressionofIL-10duringthewindowofimplationineutopicendometriumofadenomyosisonendometrialreceptivityofadenomyosis[Abstract]Obejective：

ToanalyzetheexpressionofIL-10duringthewindowofimplationineutopicendometriumofadenomyosis，Tryingtoinvestigatethemechanismofdecreasingendometrialreceptivityofadenomyosisintheimmunologicalview.Methods：

Theeutopicendometriumwasobtainedfromtwogroupsofadenomyosisandnon-adenomyosisduringthewindowofimplationinnaturalcycleinvolving18patientsofadenomyosisand16patientsofnon-adenomosis.IL-10weredetectedbyimmunohistochemistriySPmethod.Results：

theexpressionofIL-10wasexpressedweaklyontheendometriumofadenomyosisthannon-adenomyosis（P0.05）.Conclusion：

TherearedecreasingexpressionofIL-10intheeutopicendometriumofadenomyosis，whichpromotingthepregnancy.TheweakerexpressionofIL-10mayplayanimportantroleonthedecreasingendometriumreceptivityofadenomyosis.[Keywords]Adenomyosis；eutopicendometrium；IL-10；endometrialreceptivity子宫腺肌病（Adenomyosis，AM）指子宫内膜腺体及间质侵入子宫肌层。

AM好发于30～50岁的育龄妇女，发病率从8.8%～31%不等[1]。

传统观点认为AM好发于经产妇、并有多次刮宫史的30～50岁之间的妇女。

随着现代社会的发展，更多的女性选择在她们35～45岁之间生育，生育年龄的推后使得不孕妇女中AM在育龄妇女中的发病率明显增加，已经成为影响生育以及助孕治疗结果的重要因素。

有文献认为1/3因AM不孕女性因症状不明显而未能得到及时诊断[2]。

AM主要影响子宫内膜容受性从而导致胚胎种植失败，其涉及的机制目前不十分清楚，有学者提出可能与子宫内膜干细胞功能紊乱、内膜-肌层界面破坏及内膜局部免疫环境的改变有关。

本文通过检测子IL-10在子宫腺肌病患者种植窗期在位内膜的表达特征，寻找子宫腺肌病患者内膜容受性下降的免疫学因素。

1研究方法1.1研究对象2012年2月至2012年12月在上海交通大学医学院附属苏州九龙医院就诊的因子宫腺肌病不孕患者18例为研究组，同期因输卵管因素或男方因素不孕的16例为对照组，患者年龄在21～38岁，月经规律，取内膜前3月未用过激素治疗，排除标准：

女方合并有子宫肌瘤、多囊卵巢综合症、输卵管积水、子宫内膜息肉、子宫畸形、既往有盆腔结核史、复发性流产病史者、染色体异常及自身免疫性疾病。

1.1.2子宫腺肌病诊断AM患者诊断标准：

a.痛经；b.血清CA12535IU/L；c.经阴道彩色超声下，子宫增大呈球形，肌层增厚，回声增强粗糙不均，病灶与周围组织界限欠清，病灶内有散在分布的小液性暗区，CDFI可检出短条状或稀疏点状血流信号，伴或不伴内膜线移位。

同时符合以上三项中的两项者诊断为AM。

1.2标本收集及方法1.2.1入组患者均于月经D2-4天抽静脉血测基础性激素（FSH、LH、E2、P），CA125。

1.2.2内膜收集：

两组患者分别于月经周期排卵后6～7天种植窗期行内膜活检。

患者均签署知情同意，且经过上海交通大学医学院附属苏州九龙医院医学伦理委员会同意认证许可。

取内膜用S型宫腔组织吸引管（购自上海计划生育研究所）吸取少许内膜，每份内膜以无菌生理盐水洗净后分2管，置于4%多聚甲醛固定。

1.3研究方法1.3.1抗体来源：

IL-10（武汉博士德公司）一抗兔抗人IL-10多克隆抗体，二抗羊抗兔IgG抗体。

1.3.2标本制作：

手术取出子宫内膜组织标本，直接置于4%多聚甲醛（PFA）、4℃固定16h，经磷酸盐缓冲液（PBS）洗3次，每次5min，乙醇脱水，石蜡包埋，经石蜡切片机切片，切片厚度为5um。

1.3.3免疫组化分析：

参照试剂盒提供的方法，分别进行免疫组织化学实验，脱蜡、抗原修复、染色、显色、封片，由2人进行双盲观察，全面观察每张切片，以细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。

随机选择5个具有代表性的高倍视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数，取平均数作为该病例的最终结果。

以阳性细胞数所占比例分为：

阳性细胞数50%（+++）；根据阳性细胞所占比例及相应染色强度进行评分pi（i：

细胞浆染色强度），i为0、1、2、3时分别表示阴性（无着色细胞）、弱阳性（浅棕黄色）、阳性（棕黄色）、强阳性（深棕黄色）；p代表同一染色强度细胞所占计数细胞百分比，1、2、3、4、5分别表示染色细胞所占计数细胞总数的0%～15%、16%～50%、（上接至第6页）3.3ER、PR与子宫腺肌病内膜容受性的关系目前国内外统一的观点认为雌激素在AM的发病中起重要作用，AM患者子宫内膜局部雌激素水平较高。

本实验检测在位内膜ER和PR，ER在内膜腺体中表达AM组较非AM组增强，P0.05。

子宫腺肌病患者内膜容受性主要受到卵巢分泌的雌激素（E2）和孕酮（P）的调控。

有研究者报道，在兔子和人中，雌激素并不是胚胎着床必须的，P单独作用就能启动着床过程[7]。

但有研究表明，对于那些不依赖于卵巢分泌的E2的动物中，其子宫和胚胎可以从头合成E2，提示E2对哺乳动物的胚胎着床都是必须的[8]。

而雌激素水平过高，内膜腺体与间质脱膜化发育不同步，胚胎不能正常着床，推测可能引起AM患者内膜容受性下降，在本实验中ER与IL-10的在内膜的表达具一致性，提示IL-10可能也受E2的调控。

本研究通过比较IL-10在内膜中的表达，发现子宫腺肌病患者在位内膜中具有妊娠保护作用的IL-10的表达减弱，改变局部免疫环境，可能是致子宫内膜容受性下降，胚胎不能成功着床的原因之一。

对子宫腺肌病患者在位内膜中IL-10的研究，有助于进一步明确子宫腺肌病患者内膜容受性下降的原因，同时采取针对相应的处理方针，为子宫腺肌病患者内膜容受性改善提供免疫治疗方法。

51～85%、86～95%、96%～100%。

1.3.4统计学方法：

采用SPSS19.0统计软件进行分析，剂量资料组间比较用t检验，率的比较用卡方检验。

检验水准a=0.05.2结果2.1两组患者基本情况两组比较年龄、BMI、基础性激素、取内膜日内膜厚度等无显著性差异（P0.05）。

痛经、CA125升高比率，AM组较对照组明显升高，P0.05（见表1）。

2.2IL-10在两组患者内膜表达情况IL-10在AM组内膜腺体和间质的表达较非AM组减弱，P0.05，IL-10表达于内膜腺体和间质细胞胞浆；（见表2、图1及图2）。

2.3雌孕激素受体（ER、PR）表达的分布ER主要表达于内膜腺体，PR主要表达于内膜间质中，ER在AM组内膜腺体中的表达较非AM组增强，P0.05。

（见表2）3讨论3.1IL-10在子宫腺肌病在位内膜的表达白细胞介素-10（IL-10）是一种公认的介导免疫抑制的细胞因子，产生于Th2辅助细胞，抑制Th1细胞应答及其细胞因子合成，同时抑制M的抗原提呈功能及其细胞因子合成，促进B细胞增殖分化及抗体产生。

2009年FeiWang[3]选取34例因子宫腺肌病切除子宫的在位及异位内膜和30例已生育者的正常内膜，通过免疫组化检测IL-10，发现IL-10在腺肌病患者在位内膜及异位内膜表达显著升高，并在分泌期升高明显，与郎景和教授的子宫内膜异位症的发病机理一致，认为IL-10通过免疫抑制机制使在位内膜通过薄弱的基底层侵入肌层，异位内膜逃避机体免疫攻击，使得异位病灶不能及时清除，从而持续生长。

2012年XiaoyanQin[4]通过免疫组化检测，发现子宫腺肌病患者在位内膜腺上皮细胞IL-10R1表达增高，而无IL-10R2表达，子宫腺肌病患者异位病灶处腺上皮细胞IL-10R1和IL-10R2表达均显著升高，进一步论证了IL-10和IL-10R相互作用，在子宫局部产生的免疫耐受，使得异位病灶逃避宿主免疫监视，并在肌层生长，与子宫腺肌病发病密切相关。

该论点认为IL-10在子宫的表达并维持的免疫抑制作用，使得异位病灶在腹腔或子宫肌层不能被机体宿主及时清除，从而形成了子宫内膜异位症或子宫腺肌病。

而成功的妊娠是一个免疫矛盾，一方面胎儿抗原不能作为半同种移植物被母体识别，另一方面为了在母体中生存，胎儿抗原又必须呈递给母体，被母体接受。

因此，胎儿抗原的免疫识别对于维持妊娠极为重要，识别不足将可能导致种植失败和复发性流产[5]。

IL-10在子宫内膜表达不足引起免疫耐受抑制，胚胎不能成功着床，导致种植失败及早期流产。

本实验证实子宫腺肌病患者和非腺肌病患者种在位内膜均表达IL-10，子宫腺肌病患者表达减弱，推测IL-10在子宫腺肌病患者内膜的表达缺陷是其不孕的原因之一。

3.2IL-10与子宫腺肌病内膜容受性的关系大量的研究认为IL-10是主要的抗炎症因子之一，在很多的慢性疾病及肿瘤相关性疾病中充当重要角色。

而来自于子宫的IL-10，在人类的HLA抗原识别上具有两个作用，在胚胎滋养层细胞诱导人类HLA抗原产生，下调经典的I类和II类抗原形成，从而诱导免疫耐受使胎儿免于母体排斥。

2002年Vigano[6]等通过选择性人工流产的脱膜细胞和非孕期子宫内膜体外培养，发现人类子宫内膜表达IL-10和IL-10受体，妊娠早期脱膜组织较非妊娠期内膜组织中IL-10明显上升，认为IL-10是成功妊娠的标志。

而子宫内膜容受性是指子宫具有接受并容纳活性胚胎，并成功建立妊娠的能力。

子宫内膜进入接受态是胚胎在子宫内膜中定位、黏附、侵入并成功着床的关键。

种植窗期是指子宫内膜只在特定的一段时期内对胚胎具有接受性。

此时期是子宫内膜接受性达到最高的时期，胚胎能够成功着床。

在人类，种植窗期发生于正常月经周期排卵后6～8天，子宫内膜受到激素、细胞因子、黏附分子、microRNA等多种因素调节，发生一系列变化，从而具备接受胚泡着床的能力。

本实验选取子宫腺肌病和非腺肌病患者种植窗期内膜组织，结果证实IL-10在腺肌病患者在位内膜腺体和间质的表达较对照组明显下降，提示子宫内膜局部免疫耐受下降，这可能是导致胚胎不能成功着床，妊娠率下降的原因之一。

参考文献[1]冷金花，郎景和，子宫腺肌病的手术治疗.实用妇产科杂志2006年1月第22卷第1期。

[2]Peric，H.，Fraser，I.S.，2006.Thesymptomatologyofadenomyosis.BestPract.Res.Clin.Obstet.Gynaecol.20，54-555.[3]FeiWang，M.D，Ph.D，HuiLi，Ph.D.，ZhongliYang，M.D.etal.Expressionofinterleukin-10inpatientswithadenomyosis.FertilSteril2009；91：

1681-5.PMID：

18439592[PubMed-indexedforMEDLINE.[4]XiaoyanQin，HualingZhang，FeiWang，etal.Expressionandpossibleroleofinterleukin-10receptorsinpatientswithadenomyosis.EuropeanJournalofObstetricsGynecologyandReproductiveBiology161（2012）194-198。