3.1.2重组DNA技术的基本工具（运载体运载体筛选）高二下学期生物人教版选择性必修3

第三章基因工程重组DNA技术的基本工具（运载体+运载体筛选）运载体≠质粒（最常用）导P72倒7行：质粒作用标记基因：eg+显色基因利用抗生素筛选出含质粒的大肠杆菌方法：用含青霉素的培养基培养大肠杆菌。+重组质粒(含目的基因)空/普通质粒目的基因能否插入c位置用于重组质粒的筛选？若插入b位置,则筛选时可在培养基中加入？影印接种(不改变菌落位置）看书范围：P72—P7373思考与讨论导P72P73①②有复制原点③重组质粒空质粒思判断1.被用作载体的质粒都是天然质粒2.所有质粒均可以作为基因工程的载体3.DNA连接酶和DNA聚合酶作用的底物相同4.载体的化学本质与载体蛋白相同5.质粒常采用抗生素合成基因作为筛选的标记基因6.目的基因与运载体结合的过程发生在细胞外7.常使用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等8.不同的质粒DNA,(A+G)/(T+C)的值一定相同9.用EcoRI、BamHI两种限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒，构建重组质粒并导入到大肠杆菌中，所得结果如图所示。图2表示运用影印培养法（指在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法）检测表达载体是否导入大肠杆菌。（1）培养基A中添加的是(青霉素/四环素)，菌落1-6表示？①未导入质粒的大肠杆菌②导入空质粒的大肠杆菌③导入重组质粒的大肠杆菌（2）培养基B中添加的是(青霉素/四环素)，菌落1/2/3/5类型是【①/②/③】？含有目的基因的菌落序号是？议自由展判断1.被用作载体的质粒都是天然质粒×需要经过人工改造2.所有质粒均可以作为基因工程的载体×载体需要条件，如不含标记基因的质粒不能用3.DNA连接酶和DNA聚合酶作用的底物相同×DNA连接酶底物：DNA片段，DNA聚合酶底物：脱氧核苷酸4.载体的化学本质与载体蛋白相同×载体本质：脱氧核苷酸链，载体蛋白：蛋白质

展15.质粒常采用抗生素合成基因作为筛选的标记基因×抗生素抗性基因6.目的基因与运载体结合的过程发生在细胞外√7.常使用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等×大肠杆菌不是8.不同的质粒DNA,(A+G)/(T+C)的值一定相同√双链DNA：A=TC=GT4.

AP为青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因,用PvuⅠ限制酶切质粒。质粒A不能作为运载体的原因？

质粒A缺少标记基因质粒C不能作为运载体的原因？PvuⅠ切割时，复制原点会被破坏T3（1）运载体具备的条件（板）a.有复制原点

便于外源基因复制。b.有一个至多个限制酶切割位点。便于插入c.有标记基因

d.对受体细胞无害展2（2氨苄青霉素抗性基因称为？

标记基因作用是？

便于重组DNA的筛选议9.用EcoRI、BamHI两种限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒（1）培养基A中添加的是(青霉素)，菌落1-6表示？

②导入空质粒的大肠杆菌

③导入重组质粒的大肠杆菌（2）培养基B中添加的是(四环素)，菌落1/2/3/5类型是？②导入空质粒的含有目的基因的菌落序号是？4、6总结：①区分未导入与导入，加入？

②区分导入空质粒与重组质粒。加入？【拓】为筛选含重组质粒的大肠杆菌，需要在培养基中添加青霉素。评1重组质粒空质粒一、双重筛选④将连接产物导入大肠杆菌未导入质粒导入重组质粒导入空质粒①区分导入和未导入：培养基中加入？【拓】Why导入空质粒和导入重组质粒的大肠杆菌都能在含青霉素的培养基中生长？二者均含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长②区分导入空质粒和重组质粒，培养基中加入？③T5蓝白斑筛选评2注:LacZ基因编码产生的β–半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色;否则菌落为白色。1.若菌落为蓝色【有

LacZ基因】，说明导入

空质粒

。

2.若菌落为白色，原因是LacZ基因被破坏（1分），不能产生β–半乳糖苷酶（1分），不能分解X-gal产生蓝色物质（1分）说明导入了重组质粒。3.实验前，需要选择对青霉素敏感的受体菌？所选择的受体菌不含有AmpR基因？

结果分析质粒上有0个游离磷酸。有一个切割位点，则切割后产生？？个Pi；？？个DNA片段。运载体：质粒、动植物病毒、噬菌体评3【拓1】对质粒进行改造,插入SmaⅠ酶(识别序列CCCGGG)切位点越多,质粒的热稳定性越(高/低)。【拓2】用MseI和PstI切割获得目的基因；若要用下图质粒和外源DNA构建重组质粒,则需要对质粒进行改造加入MseI的酶切序列，构建新的限制酶切位点。方法：①合成MseI的酶切序列：用__DNA聚合_酶②切开质粒：用限制酶_EcoRI__③将MseI的酶切序列连接到原质粒切口处：用__DNA连接__酶T1若用家蚕作为受体，不选用噬菌体作为载体，原因是噬菌体的宿主细胞是细菌，不是家蚕。检1.运载体最常用的是质粒,此外还有噬菌体、动植物病毒.质粒本质是双链、环状DNA,基本单位是：脱氧核苷酸。质粒上有0个游离磷酸。若质粒上只有1个酶切位点，切割后形成1个DNA片段.；2个游离磷酸2.运载体所具备的条件有：a.质粒DNA上有复制原点,目的：保证质粒在受体中能稳定复制;b.有一至多个限制酶切位点，目的：便于外源DNA插入；

c.有标记基因,作用:便于重组DNA的筛选.3.限制酶特点（即限制酶专一性的体现）是？

①识别双链DNA的特定核苷酸序列

②使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。4.人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，是因为？①都由四种脱氧核苷酸组成；②都是双螺旋结构；③符合碱基互补配对原则。5目的基因能够在受体细胞表达的基础：生物界共用一套遗传密码。6含某限制酶的细菌可利用其限制酶切割外源DNA，但不破坏自身DNA的原因为