e.coli bl21(de3)对乙酸或氨的耐受性及其重组蛋白表达碱性ph转换策略

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1/1e.colibl21(de3)对乙酸或氨的耐受性及其重组蛋白表达碱性ph转换策略上海交通大学博士后学位论文E.coliBL21(DE3)对乙酸或氨的耐受性及其重组蛋白表达：

碱性pH转换策略姓名：

王恒伟申请学位级别：

博士后专业：

生物学指导教师：

邓子新201005上海交通大学博士后出站报告碱性�转换策略背景简介：

摇瓶培养与发酵罐培养的一个重要差别实际上体现在碳、氮源的供应和菌体产乙酸程度上，这也是的放大过程经常出现问题的地方。

乙酸和氨是大肠杆菌培养过程中产生的两类可解离的小分子产物。

许多报道认为乙酸积累通常会抑制菌体生长和外源蛋白表达，这种问题在发酵罐上高密度培养菌体时最易出现。

另有报道认为，发酵液中较高浓度的铵离子对某些重组蛋白的表达有利。

理论基础：

乙酸和铵离子发挥作用同其未解离的分子即��肿雍蚇�分子的浓度紧密相的乙酸根和铵离子的浓度。

实验主要结果及其讨论：

��生产重组蛋白方面。

是指在发酵过程�以内的乙酸钠所造成的培养基渗透压不会明显地抑制��纳�ぃ�幸种谱饔玫氖荋�分子；�乙酸钠会严重地抑制菌体细胞膜还原性电子产生的强度。

�的乙酸钠可以使该活性降低约�．�％，尤其是低�会加重这种副作用。

这种乙酸钠的副作用可以通过提高培养基�来缓解。

上海交通大学博士后出站报告乙酸抑制大肠杆菌的生长的机理主要有两种解释，一种即未解离形式的弱酸即��肿邮且恢纸馀剂lt;粒�梢宰杂衫┥⒔�赴�ぃ�佣�斐煽缒��的崩溃；另一种是胞内�一阴离子的高度积累所造成的后果。

我们的数据显示，在实验室常见的大��高，但远远低于根据铵离子电离平衡和自由扩散进出细胞膜所得到的理论值。

子也可能参与其中。

提高培养基的�，可以缓解高浓度的��騈��訣��细胞膜的电子产生活性的抑制作用。

上海交通大学博士后出站报告��表达系统目前广泛用于多种蛋白的生产。

、如用于各类蛋白的实验室规模的纯化和研究，某些药用蛋白和工具酶工业规模的生产，例如干扰素、集落刺激因子、人血清白蛋白以及尿激酶、脂肪酶等等。

它是直接表达外源蛋白极为有效的模式微生物之一。

��表达外源蛋白的过程中会出现许多工程上的问题，尤其是在进外源蛋白表达所带来的菌体代谢负荷主要表现在：

�菌体呼吸活性或菌体平板菌落发酵液的溶氧��在诱导时会急剧上升。

这种情形在表达某些蛋白时经常遇到；�菌体的重要生理代谢指标改变。

例如电子传递效率降低，胞内能荷降低以及某些代谢中间物合成功能障碍，菌体的胁迫响应基因被激活和相应的蛋白表达；�菌体形态发生改变，例如由快速增殖时的串珠状菌体连丝变成单个或二

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