莜麦水溶性蛋白的提取及SDS-PAGE分析

莜麦水溶性蛋白的提取及SDS分析摘要：以莜麦为实验材料，通过脱脂、水提、盐析和SephadexG25凝胶排阻层析等步骤提取莜麦水溶性总蛋白。通过SDS初步分析莜麦的蛋白组成，与黑麦、高粱、薏米水溶性蛋白进行比较，结果表明莜麦蛋白含量较高，具有较高的营养价值。关键词：莜麦水溶性蛋白黑麦高粱薏米 TheExtractionandSDSAnalysisofWater-solubleProteinofNakedoatsAbstract:Usingnakedoatsastheexperimentalmaterial,extracttotalwatersolubleproteinofnakedoatsbydegreasing,extraction,saltingandSephadexG25size-exclusionchromatography.AnalysethecompositionofthenakedoatsproteinpreliminarybySDSandcomparewiththewatersolubleproteinofryechinesessorghumandbarley.Theresultsshowthatcontentofnakedoatsproteinishigherandhasthehighnutritionalvalue.Keywords:NakedoatsWater-solubleProteinRyeCchinesesSorghumBarley莜麦为禾谷类作物，学名裸燕麦。莜麦原产中国，喜寒凉，耐干旱，抗盐碱，生长期短。莜麦营养丰富，耐饥抗寒，糖分少，是糖尿病患者较好的食品，脂肪中含有较多的亚油酸，是老年人常用的疗效食品。此外，维生素和磷、铁等物质也比较丰富。山西省莜麦种植面积约为17万公顷，总产量14～15万吨，占到全国的10%。莜麦在山西省农业经济中占有重要地位，因此，对莜麦的深入研究有利于提高莜麦食品的深加工，产生一定的经济效益。1材料与方法1.1仪器与材料莜麦、黑麦、高粱、薏米购自当地市场实验所用试剂均为分析纯SephadexG25层析柱、蛋白质纯化系统为GEHealthcare产品电泳槽及电泳仪为北京六一产品1.2实验方法1.2.1莜麦水溶性蛋白的提取莜麦经过低温干燥后粉碎，过0.2mm孔径筛网，以3:1（V/m）的比例加入丙酮，4℃条件下搅拌脱脂3小时后减压抽滤，向所得滤饼中加入乙醚，低温搅拌3小时，减压抽滤，滤饼低温干燥后即为莜麦脱脂粉。取莜麦脱脂粉20g，加入200mL浸提缓冲液（20mmol/LTris-HCl，pH8.0），在4℃条件下搅拌浸提6小时，12000×g离心，取上清，加入硫酸铵至80%饱和度，4℃条件下搅拌盐析6小时，12000×g离心，沉淀用少量浸提缓冲液溶解。所得溶液含有大量硫酸铵，影响进一步电泳及活性测定。因此，选用SephadexG25层析柱进行脱盐处理，缓冲液为20mmol/LTris-HCl，100mmol/LNaClpH8.0，控制流速为0.5mL/min。收集蛋白洗脱峰，进行SDS分析。同样方法制备黑麦、高粱、薏米水溶性总蛋白。1.2.2莜麦水溶性蛋白的SDS分析对提取的莜麦、黑麦、高粱、薏米水溶性总蛋白进行SDS[]分析。浓缩胶浓度为4%，分离胶浓度为12.5%，浓缩胶电压80V，分离胶电压100V，使用考马斯亮蓝R-250染色。2结果与讨论2.1莜麦水溶性蛋白的提取由图可知，随着洗脱体积的增加，吸光度值增加，当洗脱体积达到一定值时，吸光度值出现第一个峰值，此后吸光度值随着洗脱体积的增加而减小，当减小到最小值时，吸光度值随着洗脱体积的增加而增加，当洗脱体积达到一定值时，吸光度值出现第二个峰值，且第一个峰值大于第二个峰值。此后吸光度值随着洗脱体积的增加而减小。由图可知，随着洗脱体积的增加，电导率增加，当洗脱体积达到一定值时，电导率出现第一个峰值，此后电导率随着洗脱体积的增加而减小，当减小到最小值时，电导率随着洗脱体积的增加而增加，当洗脱体积达到一定值时，电导率出现第二个峰值，此后电导率随着洗脱体积的增加而减小。2.2莜麦水溶性蛋白的SDS分析蛋白条带蛋白条带12345图中1，2，3，4，5均为水溶性蛋白条带，从上到下蛋白的分子量依次减小。前四个蛋白条带与5相比较宽，且个别蛋白不是很明显，是脱盐前样品对应的电泳图，条带5较窄，蛋白种类较多，且明显，是脱盐后样品对应的电泳图。2.3讨论水溶性植物功能蛋白因其具有“三高一强”的功能特性，在面制品应用中不但能提高蛋白质含量，增加营养，而且明显改善组织结构，增加馒头、面包、面条的弹性、韧性及表面光泽度，且因其是来源于小麦蛋白，使用后无需增加任何标识，卫生安全。在沙拉酱的生产过程中，由于使用蛋黄，其质量环节较难控制，使用该产品生产无蛋沙拉酱不仅生产过程易于操作，保质期延长，而且由于是植物蛋白，不含胆固醇，更利于健康。植脂末产品一直是以酪蛋白钠或酪蛋白作为乳化剂，该乳化剂的成本较高，影响植脂末的市场竞争力。水溶性植物功能蛋白由于具有高水溶性和强乳化能力，可以全部替代酪蛋白钠或酪蛋白而应用于植脂末中，从而在不影响其品质的前提下大大降低了生产成本。水溶性植物功能蛋白还可与植物油、淀粉和麦芽糊精配合使用，可部分代替奶粉应用于冰淇淋、甜奶等乳制品中。还可广泛应用于其他需要添加植