高考生物总复习现代生物科技专题专题2细胞工程选修全国公开课一等奖百校联赛示范课赛课特等奖课件

专题2细胞工程第1页考纲内容能力要求命题分析1.植物组织培养2.动物细胞培养与体细胞克隆3.细胞融合与单克隆抗体ⅡⅡⅡ1.细胞工程部分内容在新课标卷中主要以非选择题形式出现。内容包含：植物组织培养主要操作过程及应用，植物体细胞杂交过程及应用；动物细胞培养、细胞融合和单克隆抗体制备及应用。结合实例考查植物组织培养技术操作和应用，或结合基因工程考查转基因生物培养过程。结合制备单克隆抗体过程考查原理应用，还与基因工程和胚胎工程综合考查。年考查了细胞工程中动物细胞培养及接触抑制等知识点。2.命题趋势：以农业生产为背景综合考查植物组织培养及其应用；以人类健康为背景考查动物细胞工程应用。[考纲导读]第2页一、植物细胞工程1.对细胞工程概念了解分子生物细胞器(1)应用原理：细胞生物学和____________学。(2)操作水平：细胞水平或____________水平。(3)操作目标：按照人意愿改变细胞内__________或获得细胞产品。遗传物质第3页2.植物组织培养无菌离体

(1)概念：在___________和人工控制条件下，将________植物器官、组织、细胞，培养在人工配制培养基上，给予适宜培养条件，诱导其产生____________、丛芽，最终形成完整植株。愈伤组织植物细胞全能性(2)理论基础：________________________。①全能性含义：含有某种生物全部遗传信息任何一个细胞，都含有发育成______________潜能。完整生物体第4页②植物细胞全能性实现条件：____________、提供适宜培养条件。离体

③影响全能性表示原因：在特定时间和空间条件下，细胞中基因会有________地表示出各种蛋白质，从而组成生物体不一样组织和器官。选择性(3)过程：离体植物器官、组织、细胞愈伤组织根、芽→植物体。脱分化再分化第5页

3.植物体细胞杂交

(1)概念：将不一样种植物体细胞，在一定条件下融合成____________，并培育成新植物体技术。(2)过程：杂种细胞纤维素酶、果胶酶两种植物细胞原生质体融合后原生质体 植物体。

杂种细胞

愈伤组织(3)诱导方法：人工诱导融合物理法包含______________聚乙二醇等；化学法普通用____________(PEG)作为诱导剂

(4)意义：克服____________________障碍。脱分化离心、振动、电激远缘杂交不亲和第6页4.应用(1)植物繁殖新路径：微型繁殖(快速繁殖)、作物脱毒、____________。人工种子(2)作物新品种培育：__________育种、突变体利用。(3)细胞产物工厂化生产。单倍体第7页

二、动物细胞工程

1.动物细胞工程惯用技术伎俩：________________、动物细胞核移植、______________、生产单克隆抗体等。其中______________技术是其它动物细胞工程技术基础。动物细胞培养动物细胞融合动物细胞培养第8页2.动物细胞培养单个细胞

(1)概念：从动物机体中取出相关组织，将它分散成____________，然后放在适宜培养基中，让这些细胞生长和增殖。

(2)过程：动物组织块→分散成单个细胞→细胞悬液→原代培养→传代培养。(3)条件抗生素

①无菌、无毒环境：对培养液和全部培养用具进行无菌处理，添加一定量____________，定时更换培养液以去除代谢产物。第9页

②营养：除正常有机和无机营养外，通常还需加入______________等一些天然成份。 ③温度和pH：温度为____________℃(哺乳动物)，pH为____________。36.5±0.57.2～7.4④气体环境：含95%空气加5%CO2混合气体，其中后者作用是____________________。维持培养液pH(4)应用单克隆抗体受体细胞生理、病理、药理

①生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、____________等。 ②应用于基因工程：动物细胞是基因工程技术中惯用____________，所以，基因工程离不开动物细胞培养。 ③检测有毒物质，判断某种物质毒性。 ④用于_______________等方面研究，如筛选抗癌药品等。血清、血浆第10页3.动物体细胞核移植——克隆卵母细胞动物细胞核

(1)概念：将动物一个细胞细胞核，移入一个已经去掉细胞核____________中，使其重组并发育成一个新胚胎，这个新胚胎最终发育为动物个体。体细胞核移植(2)理论基础：________________含有全能性。(3)分类：包含胚胎细胞核移植和______________，其中胚胎细胞核移植__________________较易成功。

(4)过程第11页4.动物细胞融合灭活病毒杂交

(1)概念：又称为细胞杂交，指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞过程。

(2)融合方法：诱导方法与植物原生质体融合方法相同，特有方法是惯用______________诱导。

________细胞。远缘杂交(4)意义：克服了______________不亲和障碍。(3)过程：不一样起源两个或多个动物细胞第12页5.单克隆抗体(1)制备过程杂交瘤细胞

产生专一抗体细胞→培养→提取抗体。

(2)单克隆抗体特点：特异性强、纯度及灵敏度高，并可大量制备。(3)单克隆抗体应用诊疗试剂运载药品①作为__________，含有准确、高效、简易、快速优点。②用于治疗疾病和____________。第13页[判断正误]1.在愈伤组织培养中加入细胞融合诱导剂，可取得染色体加倍细胞。()2.在诱导离体菊花茎段形成幼苗过程中，不会发生细胞增殖和分化。()3.培养草莓脱毒苗所采取主要技术是细胞杂交。()答案：1.×2.×3.×第14页考点一植物细胞工程基本技术

[考点梳理]1.植物组织培养技术(1)植物组织培养过程愈伤组织离体植物器官、组织、细胞 胚状体或丛芽→试管苗。第15页名称过程形成体特点培养基光脱分化由离体器官、组织、细胞脱分化为愈伤组织排列疏松、高度液泡化薄壁细胞团生长素与细胞分裂素百分比适中避光再分化由愈伤组织分化为幼苗或胚状结构有根、芽或有生根发芽能力生长素与细胞分裂素百分比高或低需光营养生长、生殖生长发育成完整植物体由根、茎、叶、花、果实、种子组成本身产生各种激素需光(2)脱分化与再分化过程比较第16页2.植物体细胞杂交技术(1)诱导融合方法：物理法包含离心、振动、电激等；化学法普通是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。(2)植物细胞融合完成标志：新细胞壁形成。第17页

(3)植物体细胞杂交终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞。杂种植株特征：具备两种植物遗传特征(原因是杂种植株中含有两种植物遗传物质)。(4)体细胞杂交即两个细胞融合成一个细胞，不论染色体、基因组还是染色体组都采取直接相加方法。(5)该培育新品种过程中，遗传物质传递不遵照孟德尔遗传定律。(6)植物体细胞杂交克服远缘杂交不亲和障碍，大大扩展了可用于杂交亲本组合范围。第18页

(1)植物体细胞杂交取得杂种细胞类型有三种(只考虑两两融合)：AA型、BB型、AB型，符合要求只有AB型，需要进行筛选。

(2)杂种植株遗传物质改变：杂种植株变异类型属于染色体变异，杂种植株染色体数通常是两亲本细胞染色体数目之和，杂种植株属于异源多倍体。第19页[高考探究]考向植物体细胞杂交过程

[典例1](年陕西西安长安一中检测)下列图是植物细胞杂交过程示意图，请据图回答以下问题：

(1)植物体细胞杂交第①步是去掉细胞壁，分离出有活力原生质体。当前此步骤最惯用方法是酶解法，也就是在温和条件下用__________________等分解植物细胞壁。第20页

(2)②过程发生必须经过人工诱导。人工诱导原生质体融合惯用化学方法是用____________试剂作为诱导剂诱导融合。动物细胞融合与植物原生质体融合基本原理相同，诱导融合方法类似，动物细胞融合还惯用到____________作为诱导剂。(3)与过程③亲密相关含有单层膜结构细胞器为_______________。

(4)④过程称为________，⑤过程称为________。若利用此技术生产治疗癌症抗癌药品——紫杉醇，培养将进行到______________(填字母编号)即可。

(5)植物体细胞杂交在育种工作中含有广泛应用价值，其突出优点是______________________________________。第21页

[解析](1)植物体细胞杂交第①步是去掉细胞壁，分离出有活力原生质体。当前此步骤最惯用方法是酶解法，也就是在温和条件下用纤维素酶和果胶酶等分解植物细胞壁。(2)②过程发生必须经过人工诱导。人工诱导原生质体融合常用化学方法是用聚乙二醇试剂作为诱导剂诱导融合。动物细胞融合还惯用到灭活病毒作为诱导剂。(3)过程③是杂种细胞生成细胞壁，高尔基体与植物细胞壁形成相关。(4)④过程称为脱分化，⑤过程称为再分化，治疗癌症抗癌药品——紫杉醇是从紫杉细胞中提取，只需将植物组织培养到愈伤组织阶段即可。(5)植物体细胞杂交在育种工作中含有广泛应用价值，其突出优点是能够克服远缘杂交不亲和障碍，大大扩展了可用于杂交亲本组合范围。第22页[答案](1)纤维素酶和果胶酶灭活病毒(2)聚乙二醇(3)高尔基体(4)脱分化再分化e

(5)克服远缘杂交不亲和障碍，大大扩展了可用于杂交亲本组合范围第23页[考向预测]

1.花椰菜易受黑腐病菌侵害而患黑腐病。野生黑芥含有黑腐病抗性基因。用一定剂量紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质供体与完整花椰菜原生质体融合，以取得抗黑腐病杂种植株。流程以下列图。第24页据图回答以下问题：(1)过程①所需酶是__________________。

(2)过程②后，在显微镜下观察融合活细胞中有供体________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞标志。

(3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度甘露醇以保持一定渗透压，其作用是________________________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

(4)若分析再生植株染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株根尖，经过__________、__________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体形态和数目。(5)对杂种植株进行________接种试验，可筛选出具有高抗性杂种植株。第25页

解析：(1)据题图分析，①为取得有活力原生质体，惯用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。(2)②过程为诱导原生质体融合，黑芥叶肉细胞中含有叶绿体，融合成功活细胞中必定含有叶绿体。(3)原生质体在培养液浓度过高时会失水皱缩，在培养液浓度过低时则会吸水涨破；在培养液中加入适宜浓度甘露醇以保持与原生质体内相同渗透压，目标是维持原生质体正常形态，保持其完整性。原生质体再生出新细胞壁后，可经脱分化形成愈伤组织。(4)染色体变异在显微镜下可见，为确定再生植株变异类型，可选取再生植株与双亲植株根尖分生区细胞，经解离、漂洗、染色、制片后，观察比较它们之间染色体不一样。(5)为筛选高抗性杂种植株，可对杂种植株接种黑腐病菌，据其接种后表现进行筛选。第26页答案：(1)纤维素酶和果胶酶(2)叶绿体细胞壁 解离漂洗(3)保持原生质体完整性(4)双亲(或花椰菜和黑芥)(5)黑腐病菌第27页

2.人工种子是人们模仿天然种子结构制造出来生命有机体，它能像天然种子一样萌发生长。人工种子关键部分是胚状体，其培育过程以下列图所表示。请回答以下相关问题：

(1)制作人工种子依据原理是______________；制作过程关键是确保无菌操作，其原因是_____________________________________________________________________________。第28页

(2)②表示脱分化过程，其实质是____________________________；③表示再分化过程，其实质是____________________________。培养基中生长素和细胞分裂素浓度、________、____________影响②③过程进行。

(3)从确保人工种子正常生命力以及生态系统物质循环上来看，人造种皮应含有半透性(透水、透气性)和__________________________特点。

(4)某二倍体植物基因型为DdTt，利用花药离体培养方法，可培育成“花粉胚”，也可制成人工种子，这种由种子萌发形成个体称为_________，从生殖方式看属于_______生殖。第29页

解析：(1)培育人工种子原理是细胞全能性。(2)脱分化实质是使不分裂细胞恢复分裂能力；再分化实质是使分裂细胞在形态、结构和功效上再次发生改变，这种改变是基因选择性表示结果。培养基中生长素和细胞分裂素浓度、百分比和使用次序可影响脱分化和再分化过程。(3)种子萌发过程中，需要从外界吸收大量水分和氧气进行有氧呼吸，所以，人工种皮应该含有透水、透气性；从物质循环角度来看，人工种皮应该能被微生物降解。(4)经过花药离体培养取得植株属于单倍体，基因型为DdTt植物能产生基因组成为DT、Dt、dT和dt四种花粉，这种经过有性生殖细胞产生后代生殖方式属于有性生殖。第30页答案：(1)细胞全能性细菌等微生物代谢旺盛，在消耗营养物质同时，产生大量有害产物，毒害组织细胞(2)使不分裂细胞恢复分裂能力基因选择性表示百分比使用次序(3)易被微生物降解(4)单倍体有性第31页项目植物组织培养动物细胞培养理论基础植物细胞全能性细胞增殖培养基类型固体或半固体培养基液体培养基成份水、矿质元素、维生素、蔗糖、氨基酸、琼脂糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子、动物血清等取材植物幼嫩部位或花药等动物胚胎或出生很快幼龄动物器官或组织考点二动物细胞培养和核移植技术

[考点梳理]1.动物细胞培养与植物组织培养异同第32页项目植物组织培养动物细胞培养过程(续表)第33页项目植物组织培养动物细胞培养结果新组织或植株个体，可以表示全能性新细胞系或细胞株，不形成个体，不表示全能性应用①植株快速繁殖；②脱毒植株培育；③人工种子；④生产药品、杀虫剂等；⑤转基因植物培育等①蛋白质生物制品生产；②皮肤移植材料培育；③检测有毒物质；④生理、病理、药理学研究等相同点①两技术伎俩培养过程中细胞都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称为克隆，都不包括减数分裂；②均为无菌操作，需要适宜温度、pH等条件(续表)第34页2.概念辨析(1)细胞贴壁和接触抑制①细胞贴壁：悬液中分散细胞很快就贴附在瓶壁上。②接触抑制：细胞数目不停增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停顿分裂增殖现象。(2)原代培养和传代培养①原代培养：动物组织消化后首次培养。

②传代培养：原代培养过程中，贴满瓶壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶培养，让细胞继续增殖。第35页(3)细胞株和细胞系①细胞株：传代培养细胞能传到10～50代，这么传代细胞称为细胞株。

②细胞系：传代培养细胞在传到50代后，有部分细胞遗传物质发生了改变，取得不死性，这种含有癌变特点细胞称为细胞系。第36页3.动物核移植技术和克隆动物(1)原理：动物细胞核全能性。(2)核移植种类：胚胎细胞核移植和体细胞核移植。(3)动物克隆普通过程第37页

(4)选卵母细胞作为受体细胞原因：卵母细胞大，易于操作；卵黄多，营养丰富，为发育提供充分营养；能激发重组细胞分裂分化。

(5)体细胞核移植技术应用：①加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育；②保护濒危物种，增大存活数量；③生产宝贵医用蛋白；④作为异种移植供体；⑤用于组织器官移植等。第38页[高考探究]考向1动物细胞培养技术

[典例2]下列图所表示为动物细胞培养过程中，动物细胞增殖情况改变曲线(图中B、D两点表示经筛选后继续培养)，请据图回答下面问题：第39页

(1)OA段培养称为____________培养，AB段可能发生了_______________现象，需要用______酶处理，以使组织细胞分散开来。

(2)动物细胞培养和植物组织培养过程中，就细胞增殖、分化来说，动植物细胞都要进行____________，不一样是植物细胞还要进行________________。

(3)为制备单克隆抗体，需将______注射到小鼠体内，以此获取________细胞，同时可选取图中______点细胞与该细胞融合形成杂交细胞，所选取细胞细胞膜上______比正常细胞显著降低。为筛选出能够产生单克隆抗体杂交细胞，可用______培养基到达目标。第40页

[解析]据图中不一样阶段细胞增殖代数可知，AB段细胞停止增殖，但此时细胞仍有增殖能力，所以此时可能发生了接触抑制，故OA段为原代培养；D点细胞增殖代数到达了60次以上，故此时细胞发生了癌变，取得了无限增殖能力。[答案](1)原代接触抑制胰蛋白(2)增殖或分裂脱分化和再分化(3)抗原浆D糖蛋白选择第41页考向2动物核移植技术和克隆动物

[典例3](年天津河东区二模)年

2月

3日，英国议会下院经过一项历史性法案，允许以医学伎俩培育“三亲婴儿”，三亲婴儿培育过程可选取以下技术路线。据图回答下列问题：

(1)图中①是________过程，②是________卵母细胞，③是________受精。第42页(2)三亲婴儿染色体来自于___________________________________________________。(3)这种生殖方式属于__________(填“有性”或“无性”)生殖。(4)捐献者在取卵前通常需要注射促性腺激素，以到达____________目标。

(5)“三亲婴儿”培育技术___________(填“能”或“不能”)防止母亲线粒体遗传病基因传递给后代，而_______(填“能”或“不能”)防止母亲红绿色盲基因传递给后代。第43页

[解析](1)依据以上分析已知，①是核移植过程，②是处于减数第二次分裂中期卵母细胞，③是体外受精。(2)捐献者只是为婴儿提供了细胞质，所以三亲婴儿染色体来自于母亲卵母细胞和父亲精子。[答案](1)核移植次级体外(2)母亲卵母细胞和精子(3)有性(4)超数排卵(促进多个卵泡发育)(5)能不能第44页[考向预测]3.(年江苏高考冲刺)下列图表示经过核移植等技术取得某种克隆哺乳动物(二倍体)流程。回答以下问题：

(1)图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体组成可为________。过程①表示去除细胞核，该过程普通要在卵母细胞培养至适当初期再进行，去核时常采取________方法。②代表过程是________。第45页(2)经过屡次传代后，供体细胞中________稳定性会降低。所以，选材时必须关注传代次数。

(3)若取得克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质角度分析其原因可能是_________________________________________________________________________________。

(4)与克隆羊多利培养成功一样，其它克隆动物成功取得也证实了___________________________________________。第46页

解析：图示为核移植技术流程，A从供体细胞中取出细胞核，移入去核卵母细胞内，形成重组细胞，经过早期胚胎培育至桑椹胚或者囊胚，经②过程胚胎移植到代孕母体子宫内完成胚胎后期发育，直至分娩出克隆动物。(1)正常哺乳动物性染色体组成为XX或XY。普通在卵母细胞培养到适当初期后，会经过显微操作去除卵母细胞中核。过程②是将胚胎移入受体(代孕)个体体内。(2)用于核移植供体细胞普通都选用传代10代以内细胞，原因是该种细胞代谢旺盛、分裂能力强，且遗传物质能够保持相正确稳定性，所以选材时必须关注传代次数。(3)遗传物质大量存在于细胞核中，少许存在于细胞质中，所以若克隆动物与供体动物性状不完全相同，说明去核卵母细胞质中少许遗传物质被表示。(4)动物核移植和克隆技术证实了已经分化动物体细胞细胞核含有全能性。第47页答案：(1)XX或XY显微操作(去核法)胚胎移植

(2)遗传物质

(3)卵母细胞质中遗传物质会对克隆动物性状产生影响

(4)已经分化动物体细胞核含有全能性第48页

4.(年山东烟台模拟)人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌发生亲密相关，抗HPV单克隆抗体能够准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体过程，请据图回答以下问题：第49页(1)单克隆抗体制备过程中包括细胞工程技术有____________________。

(2)若要分析杂交瘤细胞中染色体，可经过__________________________________等过程制成装片，然后在显微镜下观察。杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比含有特点是___________________，在HAT培养基上存活细胞可能包含______(填以下序号)。 ①无抗体分泌细胞②抗HPV抗体分泌细胞③其它无关抗体分泌细胞第50页

(3)对于抗体检测呈______性杂交细胞应尽早进行克隆化，克隆化方法最惯用是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液______mL(填“0.1”“1”或“10”)，使每个孔内不多于一个细胞，到达单克隆培养目标。

(4)由上述过程生产出单克隆抗体不能直接用于人体，理由是_______________________________________________。

(5)科学家从一些无限增殖细胞细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体制备提供了更多思绪。除本题描述一种制备单克隆抗体技术外，请再简明写出一个制备单克隆抗体思绪：______________________。第51页

解析：利用显微镜观察有丝分裂过程中染色体，需先制作暂时装片；杂交瘤细胞中含有浆细胞和骨髓瘤细胞染色体，所以比普通淋巴细胞染色体数目多一倍；在HAT培养基上生存细胞均为杂交细胞，这些杂交细胞中有分泌HPV抗体细胞，有分泌其它抗体细胞，也有不能分泌抗体细胞。抗体检验呈阳性，说明该杂交瘤细胞可产生所需抗体；为确保每个小孔不多于一个细胞，依据浓度可推断加入细胞稀释液量：设加入细胞稀释液最大量是x，则10个/mL×x＝1个，x＝0.1mL。小鼠形成抗体与人体抗体不一样，故在人体内可引发免疫反应，所以上述过程生产出单克隆抗体不能直接用于人体。依据所给信息可知，还可经过转基因技术或核移植技术取得既能大量增殖，又能产生特定抗体杂交细胞。第52页答案：(1)动物细胞培养、动物细胞融合染色体数目加倍①②③(2)解离、漂洗、染色和制片(3)阳 0.1

(4)小鼠形成抗体对人体来说是抗原，可引发免疫反应

(5)经过基因工程向浆细胞中导入prG；利用核移植技术将浆细胞细胞核移植到去核无限增殖细胞中(答对其一即可)第53页

5.我国当前临床使用乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成份是一个叫作乙肝表面抗原蛋白质(S蛋白，对应基因为S基因)，请回答以下问题：(1)在这项技术中，S基因属于__________。

(2)用______________________处理S基因和运载体，并用________________使之结合，这里DNA片段两两结合产物有__________种，除了S基因，构建好表示载体还应含有__________________________等结构。第54页

(3)将表示载体导入到哺乳动物细胞，筛选得到工程细胞。使用合成培养基培养工程细胞时，通常需要加入_____________等天然成份。工程细胞在生长过程中有____________________现象，需要定时使用________酶处理，方便于分瓶继续培养，在培养过程中，定时搜集培养液，分离纯化即可得到所需产品。

(4)因为哺乳动物细胞娇嫩挑剔，培养较难，成本较高，近些年科学家们又创造了“乳腺生物发生器”，从喂养转基因动物分泌乳汁中提取所需产品。在这种技术中，构建表示载体时需要将S基因与____________________等调控组件重组在一起，并将表示载体经过__________方式，导入到哺乳动物________(填细胞名称)中。第55页

(5)人肠道含有独立黏膜免疫系统，这使得口服疫苗成为可能，但有效口服疫苗必须要在抵达肠道过程中躲避胃酸和蛋白酶降解，不然就会失效。假如要生产口服乙肝疫苗，理想受体是植物细胞，理由是____________________________________________________________________。可食转基因植物疫苗优点有(最少答出两点)_______________________________________________________________________。第56页

解析：(1)题中S基因为目标基因。(2)用同一个限制酶切割S基因和运载体会使其产生相同黏性末端，用DNA连接酶连接时会出现目标基因—运载体、目标基因—目标基因、运载体—运载体3种两两连接产物；基因表示载体应含有目标基因、标识基因、开启子和终止子等结构。(3)动物细胞培养液中需加入动物血清等，动物细胞培养时，会出现贴壁生长和接触抑制现象，需要用胰蛋白酶定时处理。(4)为确保目标基因表示，需将目标基因和开启子、终止子调控组件重组在一起，惯用显微注射法把基因表示载体注射到动物受精卵中。(5)因植物细胞有细胞壁，能够使疫苗成份避开胃酸和蛋白酶降解；转基因植物疫苗具备能够直接口服、使用简便、便于推广；运输方便、贮存简单等优点。第57页答案：(1)目标基因(2)同一个限制酶DNA连接酶3开启子、终止子、标记基因(3)动物血清贴壁生长和接触抑制胰蛋白(4)乳腺蛋白基因开启子显微注射受精卵(5)植物细胞有细胞壁，能够使细胞中疫苗成份避开胃酸和蛋白酶降解生产简单、成本低廉，轻易大量生产制造；直接口服，使用简便、便于推广；运输方便，贮存简单(答出两点即可，其它答案合理亦可)第58页项目植物体细胞杂交 动物细胞融合(单克隆抗体制备)原理细胞膜流动性、细胞全能性细胞膜流动性、细胞增殖考点三动物细胞融合与单克隆抗体制备[考点梳理]1.动物细胞融合(单克隆抗体制备)与植物体细胞杂交比较第59页项目植物体细胞杂交 动物细胞融合(单克隆抗体制备)过程(续表)第60页项目植物体细胞杂交动物细胞融合(单克隆抗体制备)融合前处理酶解法(纤维素酶、果胶酶)去除细胞壁注射特定抗原，免疫处理正常小鼠促融方法①物理法：离心、振动、电激等；②化学法：聚乙二醇(PEG)①物理法、化学法：与植物细胞融合相同；②生物法：灭活病毒意义和用途克服远缘杂交不亲和障碍，大大扩展杂交亲本组合范围①制备单克隆抗体；②诊疗、治疗、预防疾病(续表)第61页项目第一次筛选第二次筛选原因诱导融合后得到各种杂交细胞，另外还有未融合细胞因为小鼠在生活中还受到其他抗原刺激，所以经选择性培养取得杂交瘤细胞中有能产生其它抗体细胞方法用特定选择培养基筛选：未融合细胞和同种细胞融合后形成细胞(“BB”细胞、“瘤瘤”细胞)都会死亡，只有融合杂交瘤细胞(“B瘤”细胞)才能生长用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞情况下开始克隆化培养和抗体检测，经屡次筛选得到能产生特异性抗体细胞群目标得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体杂交瘤细胞2.制备单克隆抗体过程中两次筛选方法及目标第62页[高考探究]考向动物细胞融合与单克隆抗体制备

[典例4](年新课标Ⅰ卷)某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体效价(能检测出抗原抗体反应血清最大稀释倍数)，结果以下列图所表示。第63页

若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠B淋巴细胞(染色体数目为40条)，将该细胞与体外培养小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目为60条)按一定百分比加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不停分泌抗A抗体杂交瘤细胞。回答以下问题：

(1)制备融合所需B淋巴细胞时，所用免疫小鼠血清抗体效价需到达16000以上，则小鼠最少需要经过________次免疫后才能有符合要求。到达要求后X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适适用于制备B淋巴细胞是______小鼠，理由是________________________。第64页

(2)细胞融合试验完成后，融合体系中除含有未融合细胞和杂交瘤细胞外，可能还有______________________________，体系中出现各种类型细胞原因是_______________________。

(3)杂交瘤细胞中有______个细胞核，染色体数目最多是______条。(4)未融合B淋巴细胞经屡次传代培养后都不能存活，原因是______________________________。第65页

[解析](1)据图分析，第四次免疫后X、Y、Z小鼠血清抗体效价均到达16000以上，小鼠Y

B淋巴细胞产生抗体效价最高，最适合用于制备单克隆抗体。(2)融合体系中除了未融合细胞和杂交瘤细胞外，还有骨髓瘤细胞和B淋巴细胞本身融合产物，因为细胞融合含有随机性，故体系中会出现各种类型细胞。(3)杂交瘤细胞形成后，小鼠免疫B淋巴细胞核与其骨髓瘤细胞核会融合形成一个细胞核。小鼠B淋巴细胞(染色体数目为40条)和骨髓瘤细胞(染色体数目为60条)融合后，染色体可达100条。(4)未融合B淋巴细胞经屡次传代培养后，依然不是能恶性增殖细胞，同时正常细胞分裂次数是有限。第66页[答案](1)四YY小鼠抗体效价最高(2)B淋巴细胞相互融合形成细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成细胞细胞融合是随机，且融合率达不到100%(3)1100(4)不能无限增殖第67页[考向预测]6.利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体流程如下列图所表示。请依据下列图回答下列问题：(1)经过过程①得到B淋巴细胞在从小鼠体内分离出之前，需对小鼠______________。

(2)过程②诱导融合利用原理是____________，该过程中区分于原生质体融合方法是用____________处理。第68页

(3)过程③最少需要经过2次筛选和克隆培养，其中第一次筛选目标是取得__________。图中X细胞含有_________________________特点。单克隆抗体特点是___________________________。

(4)经过筛选和克隆化培养得到杂交瘤细胞后，普通采取体内培养和体外培养两种方式进行培养，动物细胞体外培养对环境条件要求比较高，如培养液需适宜温度、_________________________等。(答出两项即可)(5)从图中能够看出，单克隆抗体制备过程利用了____________和______________等动物细胞工程技术。第69页

解析：诱导细胞融合利用了细胞膜流动性原理，该过程中区分于原生质体融合方法是用灭活病毒处理。杂交瘤细胞含有骨髓瘤细胞和浆细胞特点，即既能无限增殖，又能产生特异性抗体。单克隆抗体含有特异性强、纯度及灵敏度高、可大量制备特点。

答案：(1)注射特异性抗原(2)细胞膜含有流动性灭活病毒(3)杂交瘤细胞既能产生特异性抗体，又能无限增殖特异性强、纯度及灵敏度高、可大量制备

(4)pH、动物血浆、气体环境、无菌、无毒环境(答出两项即可)(5)动物细胞融合动物细胞培养第70页

7.(年河北衡水九调)下列图是某试验室做经过动物纤维母细胞取得单抗试验研究，据图回答相关问题：(1)图中Y细胞名称是____________。(2)①过程类似于植物组织培养技术中____________过程。②过程实质是______________________。(3)③过程中需用到化学诱导剂是________________。第71页(4)④过程