(高清版)GB∕T 37492-2019 粮油检验 谷物及其制品 水溶性膳食纤维的测定 酶重量法

ICS67.040GB/T37492—2019粮油检验谷物及其制品水溶性膳食纤维的测定酶重量法Inspectionofgrainandoils—Determinationofsolubledietaryfibrein国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会IGB/T37492—2019本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由全国粮油标准化技术委员会(SAC/TC270)归口。1GB/T37492—2019粮油检验谷物及其制品水溶性膳食纤维的测定酶重量法本标准适用于谷物及其制品中水溶性膳食纤维的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文GB/T5490粮油检验一般规则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理4试剂和材料4.1无水乙酸钠(CH₃CO₂Na)。4.2无水磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)。4.3磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·H₂O)。4.4乙酸(CH₃CO₂H₂)。4.5无水乙醇(CH₃CH₂OH)。4.6丙酮(CH₃COCH₃)。4.8盐酸(HCl)。4.11淀粉葡萄糖苷酶。4.12玻璃棉。4.132.0mol/L缓冲液。4.13.2乙酸钠溶液(2.0mol/L):称取164.00g无水乙酸钠(4.1),溶于水，移入1L容量瓶中，稀释至2GB/T37492—20194.14.30.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH≈7):将61mL0.1mol/L磷酸氢二钠溶液(4.14.1)与39mL心10min,然后用含有玻璃棉(4.12)的玻璃坩埚过滤。每日制备并冷藏，于0℃~5℃冰箱保存。酶的活性及判定标准见附录A。10min,然后用含有玻璃棉(4.12)的玻璃坩埚过滤。每日制备并冷藏，于0℃~5℃冰箱保存。酶的活性及判定标准见附录A。1500×g离心10min,然后用含有玻璃棉(4.12)的玻璃坩埚过滤。每日制备并冷藏，于0℃~5℃冰箱4.1880%乙醇溶液：5.3烘箱：105℃±2℃。5.5水浴锅：100℃±1℃。3GB/T37492—20195.12抽滤装置：由抽滤瓶、抽滤垫及水泵组成。6分析步骤6.1试样制备取适量试样磨粉，全部过孔径为1mm(20目)的筛，混匀。置于样品盒中室温保存。6.2.1称样准确称取试样0.5g(精确至0.0001g),置50mL具塞磨口试管中。如果试样的脂肪含量超过10%,则需要先脱脂再进行测定。6.2.2水解加入2mL缓冲溶液(4.13.3),混匀，置于120℃1.3×10⁵Pa高压灭菌器中水解60min。6.2.3淀粉酶酶解加入100μLα-淀粉酶溶液(4.16),加塞，置于60℃±1℃水浴锅中酶解消化30min。然后将经过酶处理的试样倒入玻璃滤器中，抽滤，用50mL试管收集滤液，用10mL热水冲洗滤器，将所有残留颗粒无损失地转移至滤器中，再用5mL热水冲洗坩埚，洗液并入上述滤液。在滤液中加入4mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液(4.13.3),用氢氧化钠溶液(4.19)或盐酸溶液(4.20),调滤液pH至5.2。6.2.5淀粉葡萄糖苷酶酶解加入50μL淀粉葡萄糖苷酶(4.17),搅拌均匀，加塞，置于60℃±1℃水浴锅中酶解消化30min。6.2.6蛋白酶解加入20μL蛋白酶溶液(4.15),搅拌均匀，加塞，置于60℃±1℃水浴锅中酶解消化30min。6.2.7沉淀将滤液转移至250mL三角瓶中，加入无水乙醇(4.5),使乙醇与试样液的体积比为4:1。混匀，加塞，静置60min,促使沉淀生成。6.2.8洗涤将经过沉淀处理的试液倒入处理后玻璃滤器中，抽滤，用80%的乙醇溶液(4.18)清洗三角瓶，将所有残留颗粒无损失地转移至滤器中，用20mL80%的乙醇溶液清洗滤渣2次，20mL的丙酮清洗2次，弃去滤液。6.2.9烘干将玻璃滤器置于105℃±2℃烘箱内烘干3h,取出，置于干燥器中，冷至室温，称量m₁(精确至0.0001g)。4GB/T37492—20196.2.10灼烧把烘干后称重的玻璃滤器置于马弗炉中，525℃±5℃下灼烧1h,冷至200℃以下后，取出，置于干燥器中，冷至室温，称量m₂(精确至0.0001g)。6.2.11空白测定按6.2.1～6.2.10测定空白，但不加试样。7结果计算结果计算见式(1):式中：…X——试样中水溶性膳食纤维的含量，单位为克每百克(g/100g);m₁——滤器和试样残渣的质量，单位为克(g);m₂——滤器和试样灰分的质量，单位为克(g);m₃——试剂空白滤器和试样残渣的质量，单位为克(g);m₀——试剂空白滤器和灰分的质量，单位为克(g);m——试样的质量，单位为克(g);S——预干燥时失重的质量分数，%,未经预干燥时，S=0。取两次测定结果的平均值，计算结果保留到小数点后两位。测定结果不符合重复性要求时，应按GB/T5490的规定重新测定，计算结果。8精密度在重复性条件下，两次平行测定结果的绝对差值不得大于这两个测定值的算术平均值的10%。5GB/T37492—2019A.1活性要求及测定方法淀粉为底物，以Nelson/Somogyi还原糖测试淀粉酶活性：10000U/mL+1000钟从可溶性酪蛋白中水解出(并溶于三氯乙酸)1pmol酪氨酸所需要的酶量];或7U/mg～15U/mg酪氨酸在显色反应中所引起的颜色变化，显色用Folin-Ciocalteau)试剂时所需要的酶量]。A.1.3淀粉葡萄糖苷酶活性测定淀粉/葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测试淀粉葡萄糖苷酶活性：2000U/mL～3300U/mL(1个酶牙糖苷释放1pmol对-硝基苯所需要的A.2判定标准当酶的生产批次改变或更厂使用间隔超过6个月时，应按表A