注射用抗乙型肝炎转移因子制造及检定规程

注射用抗乙型肝炎转移因子制造及检定规程

RequirementsforAnti-HBVTransferFactorforInjection

本品用经乙型肝炎疫苗免疫的健康猪的脾脏和淋巴结，以冻融法破碎细胞，通过离心、超滤、巴氏消毒法等方法精制后制成的冻干制剂。1基本要求

1.1设施与生产质量管理

按中国《药品生产质量管理规范》的要求实施。

1.2原料及辅料

应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅材料质控标准》的要求，未纳入上述标准的化学试剂，应不低于化学纯。

1.3生产用水

生产用水源水应符合国家饮用水标准；纯化水及注射用水应符合现行《中国药典》标准。

1.4生产用器具

直接用于生产的金属或玻璃等器具，应经过严格清洗、去热原质处理或灭菌处理。2制造

2.1供体猪要求

2.1.1供体猪检疫

供体猪应检测无猪瘟病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒、口蹄疫病毒和乙型脑炎病毒污染。如系经疫苗免疫过的猪，应进行抗体检测，结果应为阳性。

2.1.2对脾脏、淋巴结的要求

经乙型肝炎疫苗免疫后抽血检查HBsAg抗体滴度达1∶40以上或皮试阳性者可摘取脾脏或淋巴结，并在24小时内放入-30℃中保存。有炎症、化脓或坏死变质的脾脏或淋巴结不得使用。2.2原液制备

2.2.1将新鲜或冷冻的脾脏及淋巴结在25℃左右去脂肪及结缔组织，然后用纯化水洗净。

2.2.2细胞破碎

将洗净的组织切成小块，加入适量注射用水，用组织捣碎机破碎细胞，制成匀浆，加适量注射用水，混匀，置-20℃反复冻融5～8次，融化温度不得超过37℃。

2.2.3离心分离

将冻融的匀浆离心（离心温度4℃），去沉淀，留上清液备用。

2.2.4澄清过滤与超滤

上清液用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，然后用截留分子量为5000道尔顿超滤膜进行超滤。

2.2.5污染病毒的灭活或去除

采用经国家药品监督管理部门批准的方法灭活或去除病毒，即为原液。冻存于-20℃或以下，保存期为2个月。2.3原液检定

按3.1项进行。2.4半成品制备

2.4.1配制与除菌

配制时加入适量甘露醇作为稳定剂，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，即为半成品。

2.4.2分批

应符合本版规程通则《生物制品分批规程》的有关规定。2.5半成品检定

按3.2项进行。2.6成品制备

2.6.1分装及冻干

应符合本版规程通则《生物制品分装规程》的有关规定。

2.6.2规格

每支含多肽2mg。

2.6.3包装

应符合本版规程通则《生物制品包装规程》的有关规定。3检定

3.1原液检定

3.1.1无菌试验

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。

3.1.2pH值

在20℃±2℃测定，pH值应为6.5～7.5。

3.1.3蛋白质反应

取制品2ml，加20%磺基水杨酸2ml应呈阴性反应。

3.1.4细菌内毒素

按本版规程通则《生物制品细菌内毒素试验规程》进行。应小于10EU/支。

3.1.5多肽含量

应不低于1.0mg/ml。

3.1.6核糖含量

应不低于70μg/ml。

3.1.7特异活性试验

方法见附录。未粘附细胞抑制指数（NAI）应不低于30%。3.2半成品检定

3.2.1细菌内毒素

按本版规程通则《生物制品细菌内毒素试验规程》进行，应小于10EU/支。

3.2.2无菌检查

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。

3.2.3pH值

在20℃±2℃测定，pH值应为6.5～7.5。3.3成品检定

除水分外，其余项目按制品标示量（2.0ml）加入灭菌注射用水溶解后进行检定。

3.3.1鉴别试验

用SEC-HPLC法：色谱柱以适合分离多肽的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/LPB-0.1mol/L硫酸钠-0.05%叠氮钠，pH7.0；上样量20μl，用波长260nm检测，本品色谱峰应与对照品一致。

3.3.2外观

应为白色或微黄色疏松体，加入灭菌注射用水后应迅速溶解为澄明液体，不得含有肉眼可见异物或摇不散沉淀。

3.3.3pH值

在20℃±2℃测定，pH值应为6.5～7.5。

3.3.4水分

应不高于3.0%（W/W）。

3.3.5多肽含量

应不低于1.0mg/ml。

3.3.6核糖含量

应不低于70μg/ml。

3.3.7分子量及组分测定

用SEC-HPLC法：色谱柱以适合分离多肽的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/LPB-0.1mol/L硫酸钠-0.05%叠氮钠，pH7.0；上样量20μl，用波长260nm检测，同时做低分子量标准多肽，不得检出分子量为10KD以上的组分。

3.3.8特异活性试验

未粘附细胞抑制指数（NAI）应不低于30%。

3.3.9蛋白质反应

取制品2ml加20%磺基水杨酸2ml，应呈阴性反应。

3.3.10无菌检查

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。

3.3.11细菌内毒素

按本版规程通则《生物制品细菌内毒素试验规程》进行，应小于10EU/支。

3.3.12异常毒性检查

按本版规程通则《生物制品异常毒性试验规程》中小鼠试验项进行。

3.3.13外源病毒污染检查

用动物病毒敏感的细胞（如BHK21），盲传3代，结果应呈阴