药物的鉴别试验2015VIP

第二章

药物的鉴别试验Identificationtestofdrug药物的鉴别试验掌握一般鉴别试验的原理。熟悉一般鉴别试验的基本方法。了解一般鉴别试验的条件

[基本要求]

药物的鉴别试验鉴别试验的内涵鉴别试验的项目鉴别试验的方法鉴别试验的条件

[主要内容]

一、鉴别试验的内涵依据药典进行的药物分析主要有三大项：鉴别、检查和含量测定。药物的鉴别试验（identificationtest）:根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。鉴别在药物分析中属首项工作，只有证实被分析的药物是真的，才有必要接着进行检查、含量测定。药典所收载的药物项下的鉴别试验方法，仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示药物，而非对未知物的鉴别。

鉴别试验方法应专属，每个品种一般2-3条。一、鉴别试验的内涵二、鉴别试验的项目Testitems性状项确认

鉴别项下规定的试验

原料药鉴别鉴别项下规定的试验制剂鉴别外观:指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质(一)性状（Description）：反映特有物理性质二巯基丁二钠“本品为白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭”溶解度:一定程度上反映了药品的纯度.“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”尼莫地平“在丙酮，氯仿和乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在水中不溶”物理常数:反映其纯杂程度。相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。二、鉴别试验的项目二、鉴别试验的项目熔点固体熔化成液体的温度熔融同时分解的温度

自初熔至全熔的一段温度如：雌二醇本品熔点为175-180℃比旋度：一定λ与T，偏振光透过长1dm且旋光性物质浓度为1g/ml的溶液时测得的旋光度。反映手性药物特性及其纯度。

如：维生素C比旋度为+20.5°-+21.5°二、鉴别试验的项目

=[]tD

×C×L×100C×L[]tD

=例维生素C的比旋度测定：“取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释使成每1mL中约含0.10g的溶液，依法测定，比旋度为＋20.5

至＋21.5

”。二、鉴别试验的项目×100C×L[]tD

=注意:溶剂，浓度等对比旋度的影响

吸收系数：给定λ、溶剂和T下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度。两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。中国药典收载是。二、鉴别试验的项目二、鉴别试验的项目比旋度和吸收系数可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。例盐酸甲氧明：“取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含30

g的溶液，照分光光度法，在290nm的波长处测定吸收度，吸收系数为133～141”。1、定义：是依据某一类药物的物理化学性质为依据,通过化学反应来鉴别药物真伪.无机药物:根据阴、阳离子（钠盐、钙盐、硫酸盐、氯化物）的特殊反应有机药物:多采用典型的官能团反应（芳香第一胺、水杨酸盐）二、鉴别试验的项目（二）、一般鉴别试验（generalidentificationtest）2、中国药典附录收载一般鉴别试验：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐无机酸盐二、鉴别试验的项目二、鉴别试验的项目FeCl3反应碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游离白色通过一般鉴别试验只能证实是某一类药物,而不能证实是哪一种药物.

如:钠盐的焰色试验,不能辨认是氯化钠、苯钾酸钠或者是其它某一种钠盐药物.必须在一般鉴别试验的基础上,再进行专属鉴别试验,方可确认.二、鉴别试验的项目Notice:证实某一种药物的依据二、鉴别试验的项目(三)、专属鉴别试验(specificidentificationtest）药物化学结构的差异物理化学性质不同灵敏的定性反应鉴别药物真伪苯巴比妥司可巴比妥钠巴比妥二、鉴别试验的项目鉴别试验原理用途一般一类药物共同化学结构区别不同类别的药物专属在一般鉴别试验的基础上,利用各种药物的化学结构差异区别同类药物的各个单体二、鉴别试验的项目Notice:专属性强再现性好灵敏度高简便快速鉴别方法要求三、鉴别试验的方法三、鉴别试验的方法鉴别方法HPLC、GC鉴别法

薄层色谱鉴别法

纸色谱鉴别法

呈色反应鉴别法

沉淀生成反应鉴别法

气体生成反应鉴别法

测定生成物的熔点荧光反应鉴别法

化学鉴别法光谱鉴别法生物学法

色谱鉴别法

紫外光谱鉴别法

红外光谱鉴别法

(一)化学鉴别法(1)呈色反应鉴别法(2)沉淀生成反应鉴别法(3)荧光反应鉴别法(4)气体生成鉴别法三、鉴别方法(5)测定生成物的熔点(一)化学鉴别法(1)呈色反应鉴别法①三氯化铁呈色反应对乙酰氨基酚②异羟肟酸铁反应氯贝丁酯

Cl三、鉴别方法(一)化学鉴别法(1)呈色反应鉴别法③茚三酮呈色反应④重氮化-偶合呈色反应左旋多巴

对乙酰氨基酚三、鉴别方法(一)化学鉴别法(1)呈色反应鉴别法⑤氧化还原呈色反应盐酸氯丙嗪

三、鉴别方法(一)化学鉴别法三、鉴别方法

(2)沉淀生成反应鉴别法①与金属离子的沉淀反应②与碘化铋钾的沉淀反应③其它沉淀反应(3)气体生成反应鉴别法(一)化学鉴别法①大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰胺类药物,可经强碱处理后加热产生氨气.②化学结构含硫药物,可经强酸处理后加热产生硫化氢气体.硫鸟嘌呤

巴比妥类药物三、鉴别方法(3)气体生成反应鉴别法(一)化学鉴别法③含碘有机药物直火加热可成紫色碘蒸气.碘苷④含醋酸酯和乙酰胺类药物经硫酸水解后,加乙醇可产生醋酸乙酯的香味.对乙酰氨基酚三、鉴别方法(一)化学鉴别法

(4)荧光反应鉴别法①药物本身在可见光下发射荧光②药物经其它反应后发射荧光三、鉴别方法

1紫外光谱鉴别法①测定最大吸收波长,或同时测定最小吸收波长.乙胺嘧啶供试品在0.1mol/L盐酸介质中的紫外吸收在272nm处为峰,216nm处为谷.(二)光谱鉴别法三、鉴别方法

1紫外光谱鉴别法②规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度值、吸收系数。(二)光谱鉴别法三、鉴别方法供试品在0.01mol/L盐酸介质中溶解并稀释制成每1ml中约含0.40mg的溶液，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸光度分别为0.53-0.58与0.43-0.48.盐酸布比卡因

(二)光谱鉴别法③

规定吸收波长、不同波位吸收度的比值法。两性霉素在362nm、381nm、405nm波长处有最大吸收.规定362nm与381nm处吸收度比值不大于0.6、381nm与405nm波长比值不大于0.9.三、鉴别方法

(二)光谱鉴别法己稀雌酚注射液用供试品溶液250~450nm波长吸收光谱与对照品是否一致鉴别.④

与对照品比较,对比吸收光谱的一致性三、鉴别方法

2红外光谱法(二)光谱鉴别法中国药典采用标准图谱对照法BP采用标准图谱对照法USP采用对照品法JP采用标准图谱对照，对照品对照及规定条件下测定一定波长处特征吸收峰.三、鉴别方法(三)色谱谱鉴别法适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别,具有分离、分析同时进行的特点.3色谱法（HPLC、GC、TLC)三、鉴别方法(三)色谱谱鉴别法（1）高效液相色谱法(HPLC)

供试品和对照品色谱峰保留时间一致.（2）气相色谱法

(GC)

同HPLC要求三、鉴别方法(三)色谱谱鉴别法

（3）薄层色谱法(TLC)对照品比较法：供试品斑点与对照品的Rf值及斑点的颜色应一致.三、鉴别方法(四)生物学法

利用微生物、实验动物及分子生物学进行药物鉴别的方法。三、鉴别方法(五)显微鉴别法

主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的切片、粉末等进行组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的方法三、鉴别方法(六)指纹或特征图谱

通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，能够比较全面的控制中药质量的方法。三、鉴别方法特征图谱：主要指有效成分的特征峰图谱指纹图谱：除主要有效成分的特征峰外，还包括未知峰，专一性更强。②化学法和仪器法相结合,每种药品一般选用2-4种方法进行鉴别试验,相互取长补短.(七)鉴别法小结Notice①方法要有一定的专属性、灵敏性、且便于推广.③尽可能采用药典中收载的方法.三、鉴别方法(八)药物鉴别新动向

1、仪器方法大大增加，尤其是红外光谱和高效液相色谱。2、制剂广泛采用红外法鉴别。3、鉴别条目简练，选择专属的方法进行鉴别，平均每个品种收载2条左右。三、鉴别方法(九)鉴别法举例（2）在维生素C的分子中具有烯二醇的结构，这个结构具有很强的还原性,可以和一些氧化剂作用.例1.维生素C的鉴别：维生素C分子中具有2个手性C原子,所以具有旋光性,可以通过测定旋光度来进行鉴别.（1）药典中规定：维生素C的比旋度应为+20.5

+21.5

（3）红外光谱与对照图谱一致.三、鉴别方法鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响因素被测物浓度；试剂的用量；溶液的温度;溶液pH；反应时间；四、鉴别试验条件

四、鉴别试验条件药物的浓度会直接影响沉淀、颜色或各种光学参数（入max、入min,A,等）的观测，从而影响判定结果，必须严格规定溶液的浓度。主要指被鉴别药物的浓度（试剂过量）。1、溶液的浓度

2、溶液的温度:每升高10℃,反应速度升高2～4倍，亦不可过高。3、溶液的酸碱度一定酸碱度能使各反应物有足够的浓度处于反应活化状态，使反应生成物处于稳定和易于观测的状态。四、鉴别试验条件

应选择专属性更高的鉴别反应将干扰物消除或将其分离,消除干扰成分的存在。4、干扰成分的存在四、鉴别试验条件5、试验时间有机化合物:反应速度慢,加入催化剂。无机化合物:反应速度快。

五、鉴别试验的灵敏度（一）反应灵敏度和空白试验在一定条件下能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品.反应对这一要求所能满足的程度称为反应的灵敏度(sensitivity)。以两个相互有关的量来表示:最低检出量，最低检出浓度。最低检出量(minimumdetectalbequantity，又称检出限量)(以m表示)单位通常用μg表示。1μg=10-6g最低检出量愈小，反应愈灵敏。但最低检出量不能充分表示反应的灵敏度，因为没有说明溶液的浓度。

最低检出浓度(minimumdetectableconcentration，又称界限浓度)应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，常以1∶G(1∶V)来表示。G和V表示含有1g重某供试品的溶液的克(ml)数。最低检出量和最低检出浓度之间的关系用下式表示