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转基因成分检测棉花PCR-DHPLC检测方法I1棉花PCR-DHPLC检测方法本标准规定了进出境棉花中转基因成分和品系的PCR-DHPGB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法方法针对转基因棉花含有的转基因成分同时进行扩增,扩增产物用DHPLC进行分析。通过DHPLC得到的洗脱峰与marker比较确定相对腈(0.025%),DHPLC缓冲液B:TEAA(0.1mol/L,pH7.0)、乙腈(25%),DHPLC缓冲液D:乙腈26.1.1CTAB方法a)称取300mg磨碎的样品(包括植株、种子和叶片等),迅速转入2mL离心的CTAB提取液700p,混匀,放入65℃水浴锅中水浴30min;6.1.2试剂盒法公式如下:DNA浓度-50×OD₂gmg/mLDNA的纯度比值应在1.7~1.9之间,浓度不低于10ng/μL。37.1.3NOS引物7.1.5CryIA(b)/Cry(b)/CryIA(c),第二组检测转基因棉花的内源基因sadI和品系特异性基因MON531、MON1445、4d)运行一个marker;5存查样品应视

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