真菌感染实验室检测

真菌感染的实验室

诊断主要内容侵袭性真菌感染现状真菌感染检测方法非培养方法诊断真菌感染真菌的药敏试验及临床价值讨论真菌

Fungi需氧、有真正细胞核、不含叶绿素寄生或腐生有性或无性繁殖真核生物生态系统的“秃鹫”据估计自然界中真菌约有150万种约有300余种可导致人类疾病真菌酵母丝状真菌念珠菌隐球菌球拟酵母菌微型丝状真菌（霉菌）巨型丝状真菌（如香菇）创伤、战伤及烧伤抗生素的滥用糖尿病、AIDS病人群的增长免疫抑制剂的广泛使用体内人工植入物的推广免疫缺陷、免疫力低下等易感人群不断增多各种原因导致重要深部真菌感染患者增加临床希望能鉴别念珠菌或丝状真菌白色念珠菌或非白念曲霉菌或毛霉菌是否卡氏肺囊虫不同病原用的药物不同念珠菌或丝状真菌:

白色念珠菌:氟康唑;

非白念:伏立康唑或卡泊芬净;

丝状真菌:对氟康唑天然耐药曲霉菌或毛霉菌:

曲霉菌:伊曲康唑,伏立康唑,卡泊芬净,两性霉素-B等毛霉菌:目前只有两性霉素-B卡氏肺囊虫:

复方新诺明美国8124例尸检结果IFI发病率P<0.01GroolA,etal.Trendsinthepostmorternepidemlologyofinvasivefungalinfectionsatauniversityhospital.[J].JInfect,1996,33(1):23．中国3347例尸检结果IFI发病率北京协和医院对1953-1993年共计3447例尸检进行回顾性调查分析P<0.01人类最常见的深部真菌病念珠菌病（监护中心、白血病、烧伤、肿瘤、AIDS、SARS）隐球菌病（AIDS、移植、SLE）曲霉病（白血病、移植、AIDS、SARS）接合菌病（白血病、糖尿病、烧伤）马内菲青霉病（自然疫源）

念珠菌病念珠菌分离鉴定无菌标本:

区别污染菌?非无菌标本:

区别定植菌?侵袭性念珠菌感染：流行病学

最常见的致病菌白念珠菌已发现的其他致病菌热带念珠菌光滑念珠菌（球拟酵母）近平滑念珠菌高里念珠菌克柔念珠菌葡萄牙念珠菌解脂念珠菌PfallerMA，DiekemaDJ．Epidemiologyofinvasivecandidiasis：apersistentpublichealthproblemE[J].ClinMicrobiolRev,2007,20(1):133-163.吴绍熙，廖万清,等.1986年、1996年、2006年我国念珠菌属变迁.中国感染与化疗杂志,2009,9:6美国侵袭性念珠菌感染发病率DatafromtheNationalHospitalDischargeSurvey(NHDS),1996–2003(/nchs/).2012年度临床分离细菌数量2012年临床送检培养标本39503份分离7101株细菌，其中：革兰阳性菌2156株，占30%革兰阴性菌4513株，占65%念珠菌313株,占5%丝状真菌26株念珠菌分布

菌名

株数%白色念珠菌11944热带念珠菌5621光滑念珠菌4616近平滑念珠菌207葡萄牙念珠菌114其它念珠菌2282006~2012年念珠菌分布念珠菌药敏试验结果抗生素名称R(%)I(%)S(%)5-氟胞嘧啶0.3198.6伏立康唑1.40.398.3氟康唑3.117.279.7两性霉素B00100伊曲康唑2.820.376.9针对光滑念珠菌的检测，建议将其对氟康唑和/或伊曲康唑敏感的结果改为中介，因为该菌对这两个药存在固有敏感性低的现象克柔念珠菌对氟康唑天然耐药侵袭性念珠菌感染:易感因素持续性中性粒细胞减少器官移植白血病实体肿瘤烧伤糖尿病广谱抗生素或激素或免疫抑制剂治疗免疫缺陷症体外抗真菌药物敏感试验应用疾病孤立的粘膜念珠菌病复发的粘膜念珠菌病高危患者中念珠菌定植念珠菌血症及深部感染深部感染需延长治疗时建议经验性治疗不做药敏菌种鉴定如果治疗失败菌种鉴定依据当地耐药监测鉴定应用唑类药物时对所有菌株都做药敏体外药物敏感试验液体稀释法：致病性酵母菌产孢丝状真菌琼脂扩散法：氟康唑、伏立康唑、制霉菌素

EtestATBFungus3微量液基稀释法-MIC判读念珠菌体外药敏折点（液基稀释法）MIC（ug/ml）SSDDIR氟康唑＜＝816-32-＞＝64伊曲康唑*＜0.1250.25-0.5-＞1氟胞嘧啶＜＝4-8-16＞32伏立康唑*＜＝12-＞＝4侵袭性念珠菌病总结免疫受损患者最易受累的致命性真菌感染镜检、培养、组织病理学等传统检查方法仍是诊断的金标准，但也有其局限性，如血培养阳性率仅50%左右近来，Realtime-PCR等技术在侵袭性念珠菌病早期诊断方面很有发展潜力氟康唑、卡泊芬净及两性霉素Ｂ及治疗侵袭性念珠菌病较有优势

曲霉病侵袭性曲霉病免疫功能低下患者易受累的致命性感染，死亡率最高可达90%伏立康唑被美国感染病学会2008年推荐作为绝大多数侵袭性曲霉病患者初始治疗的首选药物目前，迫切需要在侵袭性曲霉病的早期诊断、联合抗真菌治疗方案的评估及预防等方面取得更大突破曲霉感染：流行病学最常见致病菌烟曲霉黄曲霉黑曲霉其它土曲霉构巢曲霉聚多曲霉灰绿曲霉…..曲霉感染：流行病学2012年度26株丝状真菌曲霉22例毛霉1例烟曲霉

曲霉侵袭性曲霉病的诊断实验室真菌学检查主要以形态学检查方法为基础，镜检、培养及组织病理学检查等形态学检查方法仍是金标准目前的诊断水平不能满足临床需求非培养诊断方法如GM试验、G试验及PCR技术的联合使用可提高侵袭性曲霉病的早期诊断水平真菌性角膜炎镰刀菌和曲霉常见实验室检查方法角膜刮片：涂片：染色、不染色培养隐球菌病

可见圆形厚壁孢子，外围有一透光的厚荚膜，荚膜内的菌体可出芽，孢内有一较大的反光颗粒（脂质颗粒，不是孢核），需与白细胞或淋巴细胞相鉴别

隐球菌墨汁染色镜检肺隐球菌病痰悬浮颗粒墨汁涂片实验室检查方法涂片墨汁染色分离培养胶乳凝集试验毛霉菌病肺毛霉病患者，女，68岁因咳嗽，并咯血就诊胸片见浸润白细胞计数：7.2×109肺肿瘤标志物（-）GM（-）G试验（-）气管镜刷片？支气管刷片染色HE六胺银革兰马尔尼菲青霉病地方性真菌病是东南亚地区的流行病，中间宿主为竹鼠。播散性常见于HIV患者。

马尔尼菲青霉菌卡氏肺孢子菌

检查方法：直接镜检六胺银染色诺卡菌病吸入或有外伤进入体内，可