DB34T-小麦赤霉病菌抗药性监测技术规程

Q/LB.□XXXXX-XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽农业大学提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽农业大学、安徽省植物保护总站、宿州市埇桥区大店镇闵亚东种植家庭农场、宿州市植检植保站、砀山县植保植检服务中心、安徽疆禾航空植保有限公司。本文件主要起草人：潘月敏、鞠玉亮、闵亚东、何振辉、朱德慧、马书芳、王学良、高隆岩。小麦赤霉病菌抗药性监测技术规程范围本文件规定了小麦赤霉病菌抗药性监测对象、样品采样与病原菌分离、敏感性基线建立、敏感性测定、抗药性评价、抗药性菌株及样本处理。本文件适用于小麦赤霉病菌对常用杀菌剂的抗药性监测。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1156.1农药室内生物测定试验准则杀菌剂第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法NY/T1156.2农药室内生物测定试验准则杀菌剂第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平皿法NY/T1859.1农药抗性风险评估第1部分：总则NY/T1859.6农药抗性风险评估第6部分：灰霉病菌抗药性风险术语和定义下列术语和定义适用于本文件。区分剂量criticalconcentration能够鉴别抗药性菌株和敏感性菌株的药剂浓度。最小抑制浓度minimuminhibitoryconcentration(MIC)完全抑制病原菌孢子萌发或菌丝生长的最低药剂浓度。抗药性频率resistancefrequency供试靶标病原菌群体中抗药性菌株所占的百分比。抗性指数resistancefactor抗药性菌株对某种药剂的敏感性（以EC50或MIC表示）与其亲本菌株敏感性或与敏感基线的平均EC50或MIC的比值。监测对象苯并咪唑类杀菌剂：多菌灵、甲基硫菌灵 ；麦角甾醇生物合成抑制剂：戊唑醇、丙硫菌唑、叶菌唑、丙环唑、三唑酮、咪鲜胺、己唑醇、氟环唑，苯醚甲环唑；甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂：嘧菌酯、吡唑醚菌酯、醚菌酯、烯肟菌酯、肟菌酯；琥珀酸脱氢酶抑制剂：氟唑菌酰羟胺、萎锈灵；肌球蛋白抑制剂，氢烯菌酯；多作用位点杀菌剂：福美双、百菌清。样品采集与病原菌分离样品采集小麦收获前在多个代表性监测点采集小麦赤霉病病穗，每个样本分别存放于纸质样品袋，记录采样人及联系方式、采样的小麦品种、用药情况及地点。病穗样品干燥保存防止霉变。病原菌分离无菌条件下，挑取具有典型赤霉病症状的病穗粒，置于含50μg/mL五氯硝基苯和100μg/mL硫酸链霉素的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，分离小麦赤霉病病原菌。敏感性基线建立小麦赤霉病菌对杀菌剂敏感性基线建立参照NY/1859.6的规定执行。敏感性测定药剂配制将有效含量90%以上的杀菌剂原药溶解在合适的溶剂中，制成10mg/mL的母液，现配现用。菌丝生长速率测定法适用于监测小麦赤霉病菌对所有登记药剂的抗药性。将分离的小麦赤霉病菌接种至含区分剂量药剂培养基上，25℃黑暗培养3天，观察菌株生长情况，能生长的即为抗性菌株，不生长的即为敏感菌株。具体流程可参照NY/1156.2。孢子萌发测定法适用于监测小麦赤霉病菌对甲氧基丙烯酸脂类和琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂的抗药性。制备菌株的分生孢子或子囊孢子，用无菌水稀释至约104-5个/mL孢子液，吸取100μL孢子液均匀涂布在含有不同药剂浓度的水琼脂平板上，在25℃下黑暗培养6至8小时。显微镜下检查孢子的萌发情况，芽管长度达孢子宽度的1/2即为萌发，统计孢子萌发率，计算各菌株的EC50值和抗药性指数。其体流程可参照NY/T1156.1。抗药性评价抗药性频率抗药性频率5%以下，为低等风险；抗药性频率为5%~10%为中等风险；抗药性频率10%以上为高等风险。抗药性指数抗药性指数5～20，为低等抗性水平；抗药性指数为20～100为中等抗性水平；抗药性指数大于10