实验室标准操作规程SOP

实验室标准操作程序XH2-019-01第30页共30页烟台新海水产食品有限公司2007年08实验室标准操作程序（SOP）版号：第一版编制：审核：批准：受控状态：发放编号：持有人：发布日期:2007年08月更改一览表序号更改时间更改章节号更改单号备注00.目录章节标题页数01细菌总数的检验402大肠菌群、大肠杆菌的检验503金黄色葡萄球菌的检验504沙门氏菌的检验605副溶血性弧菌的检验706霍乱弧菌的检验807单核细胞增生李斯特氏菌的检验908志贺氏菌的检验1009霉菌的检验1110表面样品的检验1211水的检验1301.出口食品细菌总数的检验方法1.仪器和设备1．1恒温培养箱：36±11．2恒温水浴箱：45±11．3高压灭菌锅1．4均质器1.5冰箱：0-4℃和-15～1．6试管:18×150mm1．7锥形瓶:500ml250ml1．8平皿：直径为90mm1．9灭菌吸管 1．10灭菌均质杯 1．11酒精棉1．12天平:感量0.1g2．培养基的制备2.1生理盐水:称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中,分装锥形瓶和试管内,每管吸9ml，121℃2.2平板计数琼脂称平板计数琼脂23.5g加入1000.0ml蒸馏水中，煮沸溶解，分装锥形瓶内，121℃3.操作程序3.1样品稀释以无菌操作取25g样品放入装有225ml生理盐水的灭菌均质杯内，均质1分30秒，制成1：10的样品匀液用灭菌吸管吸取1ml样液放入9ml生理盐水中，摇匀。从试管中吸取1ml样液分别注入两个平皿内，制成10倍的样品稀释液，依次类推（10-2、10-3）平板计数琼脂（恒温45±1℃）分别倒12-15ml平板计数琼脂入各平皿待琼脂凝固后将平皿翻转立即将平皿内的样液和琼脂充分混合将平皿旋转，注意倾注时间不宜太长立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h3.2培养4.计算如下表（备注：25-250个菌落为合适范围，菌落成链状明显的计为一个菌落，不明显的不计数，平皿边缘和琼脂表面成水膜样菌落或生长过量的，即报告为蔓延菌落。）样品号菌落数平皿菌落数1：101：1001：100012381602121802.3×103个/g22362602272802.5×103个/g3180014401.6×102个/g4多不可计24523多不可计278202.6×104个/g5000000＜10个/g6多不可计25521多不可计225402.7×104个/g7多不可计21018多不可计240282.3×104个/g8多不可计26030多不可计230282.7×104个/g9多不可计多不可计523多不可计多不可计4875.1×105个/g10多不可计24535多不可计230蔓延菌落2.9×104个/g02.出口食品大肠菌群和大肠杆菌的检验方法仪器和设备1．1恒温培养箱：36±11．2恒温水浴箱：44.5±11．3高压灭菌锅1．4均质器1．5试管:18×150mm、18×180mm1．6锥形瓶:500ml250ml1．7平皿：直径为90mm1．8灭菌均质杯 1．9灭菌吸管1．10酒精棉1．11天平：感量0.1g1.12冰箱：0-4℃和-15～1.13显微镜2．培养基的制备2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤称35.6g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的18×180mm试管中，每管10ml，于1212.2煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）称40g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的18×180mm试管中，每管10ml，1212.3EC肉汤称37g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的18×180mm试管中，每管吸8ml，1212.4伊红美蓝琼脂（EMB）称37.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于三角烧瓶，121℃高压灭菌15min。摇匀冷却至2.5营养琼脂称33g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，1212.6生理盐水称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和18×150mm试管内，1212.7成品生化管2.7.1色氨酸肉汤2.7.2MR-VP2.7.3Koser氏枸橼酸盐琼脂2.7.4革兰氏染色试剂盒2.7.5Kovacs氏靛基质试剂2.7.6甲基红指示剂2.7.7V-P试剂甲液和乙液3.操作步骤3.1样品的稀释和培养以无菌操作取以无菌操作取25g样品放入装有225ml生理盐水的无菌均质杯内，均质1分30秒，制成1：10的样品匀液用灭菌吸管吸取1ml均质好的样液放入9ml生理盐水中，摇匀放入9ml生理盐水中，摇匀前3支LST中分别注入1ml均质好的样液前3支LST中分别注入1ml均质好的样液作为十倍的连续稀释度的样品稀释液从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液，从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液，先注入另一支9ml生理盐水中摇匀接着吸取1ml样品稀释液分别注入中间3支LST中，作为百倍的连续稀释度的稀释液作为百倍的连续稀释度的稀释液再从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液分别注入后三支LST中作为千倍的连续稀释度的稀释液将LST放入36将LST放入36±1℃培养箱培养48±培养后观察导管内是否有气泡产生未产气报告为阴性,产气者进一步实验3.2大肠菌群的测定将所有产气管用接种环接到BGLB中将所有产气管用接种环接到BGLB中放入36±1℃培养箱培养48±查MPN表报告大肠菌群的MPN值3.3大肠杆菌的测定同时将所有LST培养物接种到EC肉汤中同时将所有LST培养物接种到EC肉汤中放入44.5±1℃的水浴箱内培养48±注意水浴箱的水面应高于肉汤管液面如产气将培养物接种于EMB平板放入36放入36±1℃培养箱培养48±未产气报告阴性查MPN表观察平板有无黑色中心、有无光泽菌落如有菌落挑两个典型的接种营养斜面3636±1℃3.4将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化实验。3.4.1色氨酸肉汤36色氨酸肉汤36±1℃培养24±加kovacs氏靛基质两滴上层出现红色为阳性反应MR-VP培养基36±MR-VP培养基36±1℃培养48±无菌操作移取培养物1ml至灭菌试管中加5％ａ-萘酚乙醇溶液0.6ml，40％KOH溶液0.2ml和少许肌酸结晶振摇试管后静置2振摇试管后静置2h出现红色为阳性剩余MR-VP再培养48h滴加5d甲基红如变红为阳性，变黄为阴性3.4.336±36±1℃Koser氏枸橼酸盐琼脂3.4.4革兰氏染色革兰氏染色取18h斜面培养物作革兰氏染色大肠杆菌为革兰氏阴性靛基质MRVP枸橼酸盐鉴定（型别）＋－＋＋－－－－典型大肠杆菌非典型大肠杆菌3.4.5大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下：3.5结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气，IMViC试验为＋＋－－或－＋－－，再根据LST肉汤阳性管数查MPN表，报告每克样品中大肠杆菌MPN值。1g样品中最近似值(MPN)表使用三管法,接种量分别为0.1g,0.01g,0.001g阳性管数MPN阳性管数MPN0.10.010.0010.10.010.001000＜32009.10013201140026202200039203260103210150116.1211200129.22122701312213340206.2220210219.322128022122223502316223420309.4230290311323136032162324403319233531003.6300231017.230139102113026410315303951107.331043111113117511215312120113193131601201132093121153211501222032221012324323290130163302401312033146013224332110013329333＞1100备注：1.上表采用3个稀释度（0.1g、0.01g和0.001g）每个稀释度3管。2.如检样量改用1g、0.1g和0.01g时，表内数字相应降低10倍；如改位0.01g、0.001g和0.0001g时，表内数字相应增加10倍，其余类推。03.出口食品金黄色葡萄球菌的检验方法仪器和设备1．1恒温培养箱：36±11．2恒温水浴箱：45±11．3高压灭菌锅1．4均质器1．5试管:18×150mm18×180mm1．6锥形瓶:500ml250ml1．7平皿：直径为90mm1．8灭菌吸管 1．9灭菌均质杯1．10酒精棉1．11天平:感量0.1g1．12冰箱：0-4℃和-15～2．培养基的制备2.1生理盐水称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和18×150mm试管内，每管吸9ml,1212.2胰蛋白胨大豆肉汤称大豆肉汤30g和氯化钠95g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管内，每管吸10ml,1212.3Baird-parker培养基称6.3g溶于95ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装锥形瓶内，121℃高压灭菌15min。冷却至502.4普通肉汤培养基称18g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管，每管吸10ml，1212.5冻干血浆（凝固酶试验）每支安瓶中加入0.5ml灭菌生理盐水至完全溶解，然后加入0.3ml待检液，于37℃63.操作步骤3.1样品的稀释和培养以无菌操作取以无菌操作取25g样品放入装有225ml生理盐水的无菌均质杯内，均质1分30秒，制成1：10的样品匀液用灭菌吸管吸取1ml均质好的样液 先放入9ml生理盐水中，摇匀先放入9ml生理盐水中，摇匀前3支大豆肉汤分别吸1ml均质好的样液作为十倍的连续稀释度的样品稀释液从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液，从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液，先注入另一支9ml生理盐水中摇匀接着吸取1ml样品稀释液分别注入中间3支大豆肉汤中，作为百倍的连续稀释度的稀释液再从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液分别注入后三支大豆肉汤中作为千倍的连续稀释度的稀释液作为百倍的连续稀释度的稀释液再从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液分别注入后三支大豆肉汤中作为千倍的连续稀释度的稀释液放入36放入36±1℃培养箱培养48±从各管接1环划线于Baird-parker平板放入36±1℃培养箱培养48±再从每一平板上挑取1个可疑菌落移种到肉汤培养基中，移种到肉汤培养基中，36℃取肉汤培养物0.3ml和0.5ml凝固酶试验于灭菌试管内充分混合，36℃观察6h是否有凝块，完全凝固为阳性备注：金黄色葡萄球菌的单个菌落在Baird-Parker琼脂平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，直径2～3mm。灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围饶以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同，从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。3.2报告结果查MPN表，报告金黄色葡萄球菌MPN/g。04.出口食品沙门氏菌属的检验方法1．仪器和设备1．1恒温培养箱：36±11．2恒温水浴箱：45±11．3高压灭菌锅1．4均质器1.5冰箱：0-4℃和-15～1．6试管:18×150mm12mm1．7锥形瓶:500ml250ml1．8平皿：直径为90mm1．9灭菌吸管 1．10灭菌均质杯1．11酒精棉1．12天平:感量0.1g2．培养基的制备2．1亚硒酸胱氨酸增菌液（SC）称取23g于1升蒸馏水中在无菌容器中溶解，定量分装备用。2．2亚硫酸铋琼脂（BS）称取49.6g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷却至55℃2．3胆硫乳琼脂称取64.3g于1升蒸馏水中，浸泡15分钟，煮沸至完全溶解，冷却至55℃2．4三糖铁（TSI）称取65g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×100mm，每管约2．5尿素酶琼脂基础（U）称取2.21g于95ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15分钟高压灭菌，冷却至55℃灭菌加入40％尿素溶液5ml，混匀，分装灭菌试管12实验与判断：大量接种于37℃培养24±2．6赖氨酸脱羧酶培养基（LD）称取1.9g于100ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×100试验与判断：大量接种于37℃培养24±2．7吲哚培养基（I）称取1.6g于100ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×1002．7．1试验接种于37℃培养24±2．7．2判断阳性反应出现红色环；阴性为黄棕色环。2．8V-P半固体琼脂（VP）生化管试验：接种后于37℃培养24±判断：阳性反应立即或在15min内呈现红色，阴性为铜色。阴性结果在1h后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失，此仍作阳性反应。2．9丙二酸钠生化管（M）试验与判断：接种大量幼嫩试菌，于37℃培养24±2．10卫矛醇半固体（D）试验与判断：穿刺接种待试菌，于37℃培养24±2h3．操作程序3.1分离培养再加入再加入25g样品（无菌操作）在装有225ml无菌水中加上5.2gSC于37℃培养24±划线接种BS和DHL琼脂平板各一个于于37℃培养24～每个平板至少挑取2个典型或可疑菌落分别接种LD和U管，接种后不须灭菌接种针，直接接种TSI于于37℃培养24±挑取菌落后的琼脂平板,应置于4～8℃至少保留24h，以备必要时复查。沙门氏菌落特征琼脂平板沙门氏菌落特征BS琼脂棕褐色或灰色至黑色，有时有金属光泽，周围培养基呈棕色或黑色，有些菌株呈灰绿色，周围培养基不变或微变暗DHL琼脂无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色，有些菌株无色半透明3．2按下表进行试验与判断：TSI和LD培养基筛选TSI琼脂LD培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA＋（－）＋（－）＋可疑沙门氏菌属KA＋（－）＋（－）－可疑沙门氏菌属AA＋（－）＋（－）－非沙门氏菌属KK＋/－＋/－＋/－非沙门氏菌属注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸；－－阴性反应；＋/－－阳性或阴性反应。TSI和U琼脂筛选TSI琼脂U琼脂初步判断斜面底层产气硫化氢KA＋（－）＋（－）－可疑沙门氏菌属KA＋（－）＋（－）＋非沙门氏菌属AA＋（－）＋（－）＋非沙门氏菌属KK＋/－＋/－＋/－非沙门氏菌属注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸；－－阴性反应；＋/－－阳性或阴性反应。4．生化试验4．1将符合可疑沙门氏菌属特征的TSI琼脂培养物，按下表进行生化试验。序号生化项目沙门氏反应1U试验－2V-P试验－3LD试验＋4吲哚试验－5丙二酸钠试验－6卫矛醇试验d注：＋－阳性反应；－－阴性反应；d－反应不定。4．2所有生化试管均于37℃培养24±4．3生化试管结果符合沙门氏菌属特性按血清学试验进行。4．4血清学试验4．4．1检查培养物有无自凝性在洁净的玻片上加一滴生理盐水，将待试培养物混合于生理盐水滴内，使成为均一性的浑浊悬液，将玻片轻轻摇动30～60s，在黑色背景下观察反应（最好用放大镜观察）。如菌体彼此相凝集成明显或比较显小颗粒状物，即认为有自凝性，反之无自凝性。4．4．2检查“O”抗原对无自凝性的培物，按3.4.1的程度进行试验,但以多价“O”血清代替生理盐水,在2min判断结果.如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验.如为阴性结果,必要时,可结合生化试验结果按“Vi”抗原进行试验,再以多价和单价“O”血清进行试验.4．4．3检查“Vi”抗原按3.4.1的程序进行,但以“Vi”血清代替生理盐水。5．报告结果：5．1报告阳性结果：发现沙门氏菌。5．2报告阴性结果：未发现沙门氏菌。06.出口食品霍乱弧菌的检验方法1．仪器和设备1．1恒温培养箱：36±11．2恒温水浴箱：45±11．3高压灭菌锅1．4拍打式均质器1．5菌落计数器1．6试管:18×150mm12mm1．7锥形瓶:500ml250ml1．8平皿：直径为90mm1．9灭菌盒和枪头1．10灭菌袋1．11酒精棉1．12天平:感量0.1g1.13冰箱：0-4℃和-15～2．培养基的制备2．1碱性蛋白胨水称取15g干粉于1000.0ml蒸馏水中，加热溶解，分装，1212．2硫代硫酸钠、柠檬酸钠、胆盐、蔗糖琼脂（TCBS）称取89.1g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷至55℃2．3三糖铁（TSI）称取65g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×100mm，每管约2．4霍乱双糖铁琼脂（KIA）称取64.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热溶解，分装。121℃2．5T1N1琼脂称取35g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃在上项成分中改变氯化钠的含量，去除琼脂可制成T1N0和T1N3肉汤。2．6精氨酸葡萄糖斜面琼脂（AGS）称取58g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃2．7O/F实验用培养基（HLGB）称取45.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每管3ml（有的加矿物油覆盖）121℃2．8赖氨酸脱羧酶肉汤生化管2．9MR-VP肉汤生化管3.1样品的分离培养和初步鉴定:以无菌操作取以无菌操作取25g样品放入装有225ml生理盐水的无菌袋内，均质1分30秒，制成1：10的样品匀液用灭菌枪头吸取1ml均质好的样液放入9ml碱性蛋白胨水中放入9ml碱性蛋白胨水中36±1℃接种TCBS琼脂,36±1℃划线接种于T1N1琼脂36±1℃以无菌白色滤纸沾以无菌白色滤纸沾T1N1琼脂表面培养物滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验用接种环取氧化酶阳性培养物0.5％去氧胆酸钠液滴中进行粘丝试验以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性物以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性物接种TSI、KIA和AGS，穿刺底层并划线斜面在取氧化酶和粘丝试验阳性培养物接种接种T1N0和T1N3肉汤将TSI、KIA、AGS、T1N0、T1N3肉汤于36±1℃注：霍乱弧菌菌落特征形状大，光滑，黄色，稍平，具有不透明中心和半透明的边缘。霍乱弧菌初步鉴定试验中的反应KIATSIT1N0T1N3斜面底层斜面底层斜面底层霍乱弧菌A(K少见)AAa＋＋注：K-碱性；A-酸性；a-微酸性。霍乱菌属细菌在TSI、KIA、AGS中不产H2S，也不产气。一些气单胞菌属菌株可能产气。3．2确认试验以接种环取初步鉴定试验符合霍乱弧菌反应的T1N3培养物，分别接种到以下培养基：Hugh-Leifson葡萄糖肉汤（HLGB），36±1℃ONPG胨水，36±1℃培养1h～赖氨酸脱羧酶肉汤，36±1℃阿拉伯糖肉汤，36±1℃O/129试验用培养基，36±1℃霍乱弧菌的生化反应表生化项目生化性状生化项目生化性状TCBSYD-甘露糖＋AGSKa氧化酶ONPG＋Nacl0％＋V-Pv3％＋精氨酸双水解酶－6％－赖氨酸脱羧酶＋8％－鸟氨酸脱羧酶＋10％－抑菌试验42℃＋10ugO/129S蔗糖－150ugO/129SD-纤维二糖－明胶酶＋乳糖－尿素酶－阿拉伯糖－注：Y-黄色；K-碱性；＋-80％或更多的菌株阳性；－-80％或更多的菌株阴性；v-依据种或菌株的可变反应；S-敏感；AGS-精氨酸-葡萄糖斜面。所有试验均不产H2S和气体。4．血清学凝集试验4．1自分离培养基上挑取可疑菌落与O1群霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集试验。如可疑菌落在诊断血清中很快（一般在10s）出现肉眼可见的明显凝集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。5报告结果霍乱弧菌的检出，可依据以下性状报告：革兰氏染色阴性，无芽孢或弯曲杆菌；TSI：斜面产酸/底层产酸，不产气，不产H2S；Hugh-Leifson试验：葡萄糖发酵阳性；氧化酶：阳性；精氨酸脱羧酶试验：阴性；赖氨酸脱羧酶试验：阳性；42℃嗜盐性试验：0％Nacl＋(有的非O1群霍乱弧菌不生长)3％Nacl＋6％Nacl－蔗糖发酵：阳性；ONPG试验：阳性；阿拉伯糖发酵：阴性O/129抑菌试验：10ug敏感；150ug敏感；血清学试验：O1群、O139群、非O1群。最终结果的报告，应在生化试验的基础上报告血清群别、血清型别和生物型别。口07.出口食品单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法 1．仪器和设备1．1恒温培养箱：36±11．2恒温水浴箱：45±11．3高压灭菌锅1．4均质器1.5冰箱：0-4℃和-15～-201．6试管:18×150mm12mm1．7锥形瓶:500ml250ml1．8平皿：直径为90mm1．9灭菌吸管 1．10灭菌均质杯1．11酒精棉1．12天平:感量0.1g2．培养基的制备2．1含0.6％酵母浸膏的胰酪大豆肉汤（TSB-YE）称取3.6g药品溶入100ml蒸馏水中，水浴加热30min，分装试管，121℃高压灭菌15min，冷却后0～4℃2.2含0.6％酵母浸膏的胰酪大豆琼脂（TSA-YE）称取4.7g药品溶入100ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，冷却50℃左右倒平板，待琼脂凝固后，放入0～42.3Fraser肉汤增菌液（FB1、FB2）FB1：称取12.38g药品溶入225ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右加入FBFB2：称取1.1g药品溶入20ml蒸馏水中，水浴加热30min，分装试管，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右加入FB2.4PALCAM琼脂称取6.61g药品溶入100ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右加入PALCAM添加剂1和添加剂2各0.4ml，倒平板，待琼脂凝固后，放入0～42.5OXA琼脂称取5.85g药品溶入100ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，冷却至50℃左右加入吖啶黄素、放线菌酮、多粘菌素E各1支，倒平板，待琼脂凝固后，放入0～42.67％羊血琼脂2.7SIM动力培养基称取3.0g药品溶入100ml蒸馏水中，水浴加热30min，分装试管，121℃高压灭菌15min，制成高层斜面，冷却后0～4℃2.8硝酸盐培养基2.9缓冲葡萄糖蛋白胨水2.10糖发酵培养基2.11过氧化氢酶试验3.操作程序3.1样品的培养和分离3030±1℃培养25±称取25g样品放入225mlFB1培养基中吸取1ml培养物，加入FB1增菌液中，30±1℃培养25±挑取可疑菌落，接种TSA-YE琼脂平板取1环划线分离于OXA和PALCAM平板挑取可疑菌落，接种TSA-YE琼脂平板取1环划线分离于OXA和PALCAM平板35℃培养3．2生化鉴定3．2．1取菌落于载玻片上，取菌落于载玻片上，典型运动镜检用0.85％灭菌生理盐水制成悬浊液，压上盖玻片，于显微镜下观察呈短棒杆菌，见有轻微旋转翻滚呈短棒杆菌，见有轻微旋转翻滚3．2．2菌落呈短杆状革兰氏阳性革兰氏染色菌落呈短杆状革兰氏阳性革兰氏染色以无菌操作取25g样品3．2．3去菌落于洁净载玻片上，去菌落于洁净载玻片上，过氧化氢酶试验滴加1滴3％的H2O2溶液，菌落呈过氧化氢酶阳性反应3．2．4将羊血琼脂平板划分为25个小格，将羊血琼脂平板划分为25个小格，溶血试验每格刺种1个菌落，30℃培养28～48菌落呈β-型溶血环3．2．530℃培养30℃培养转种典型菌于TSB-YET肉汤中，蓝色菌落检验3．2．5．1取培养物穿刺接种SIM半固体培养基，取培养物穿刺接种SIM半固体培养基，动力试验室温（20～25℃）培养48h至7天，在半固体试管内呈典型伞状生长。3．2．5．2取培养物接种硝酸盐肉汤中，取培养物接种硝酸盐肉汤中，硝酸盐还原试验35℃培养加入甲液0.2ml再加入乙液0.2ml，混匀，2min内呈红色为阳性2min内呈红色为阳性3．2．5．3取培养物接种MR-VP肉汤中，取培养物接种MR-VP肉汤中，MR-VP试验35℃培养取1ml培养物于洁净试管中，再加入4％氢氧化钾溶液0.2ml,摇匀，再加入4％氢氧化钾溶液0.2ml,摇匀，加5％α-萘酚溶液0.5ml，呈红色为VP阳性,剩余培养物继续培养48h,加甲基红1d,出现红色为MR阳性反应。出现红色为MR阳性反应。3．2．5．4取培养物接种于三糖铁琼脂，取培养物接种于三糖铁琼脂，三糖铁试验35℃斜面和底层产酸，不产硫化氢。3．2．5．5取培养物分别接种于0.5％葡萄糖、取培养物分别接种于0.5％葡萄糖、糖发酵试验麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内，35℃结果分别是（＋＋＋－＋－）阴性继续培养到第5天，结果分别是（＋＋＋－＋－）阴性继续培养到第5天，3．2．5．6取培养物穿刺接种尿素酶琼脂斜面上，取培养物穿刺接种尿素酶琼脂斜面上，尿素酶试验35℃呈阴性反应，斜面无颜色变化。 李斯特菌菌种鉴别特征菌名蓝色菌落典型运动过氧化氢酶革兰氏染色溶血试验β动力试验尿素酶试验硝酸盐还原MR-VP试验三糖铁试验糖发酵利用葡萄糖麦芽糖七叶苷甘露醇鼠李子木糖单核细胞增生李斯特氏菌＋＋＋＋＋＋－－＋/＋产酸，不产H2S＋＋＋Vb＋－绵羊李斯特氏菌＋－＋＋＋＋－－＋/＋产酸，不产H2S＋＋＋－－＋英诺克李斯特氏菌＋＋＋＋－－－－＋/＋产酸，不产H2S＋＋＋－Vb－威尔斯李斯特氏菌＋＋＋－－＋－－＋/＋产酸，不产H2S＋＋＋－Vb＋西尔李斯特氏菌＋＋＋＋＋＋－－＋/＋产酸，不产H2S＋＋＋－－＋格氏李斯特氏菌＋＋＋＋－－－－＋/＋产酸，不产H2S－＋＋＋－－注：单核李斯特氏菌在OXA和PALCAM平板上的典型菌落呈黑色，直径2mm～3mm4．报告结果：报告检出或未检出单核增生李斯特氏菌。08.出口食品志贺氏菌的检验方法1．仪器和设备 1．1恒温培养箱：36±11．2恒温水浴箱：45±11．3高压灭菌锅1．4均质器1.5冰箱：0-4℃和-15～1．6试管:18×150mm12mm1．7锥形瓶:500ml250ml1．8平皿：直径为90mm1．9灭菌吸管 1．10灭菌均质杯1．11酒精棉1．12天平:感量0.1g1.13冰箱：0-4℃和-15～2．培养基的制备2．1GN增菌液2．2HE琼脂2．3SS琼脂2．4麦康剀琼脂2．5伊红美蓝琼脂2．6三糖铁琼脂2．7葡萄糖半固体2．8半固体管2．9葡萄糖胺琼脂2．10尿素琼脂3．11西蒙氏柠檬酸盐琼脂3．12氰化钾（KCN）培养基3．13氨基酸脱羧酶试验培养基：赖氨酸、鸟氨酸、及对照培养基3．14糖发酵管3．155％乳糖发酵管3．16蛋白胨水、靛基质试剂3．17志贺氏菌属诊断血清4．检验程序4．1分离和培养于于36℃称取25g样品放入225mlGN增菌液取增菌液1环划线接种HE和SS平板一个伊红美蓝平板一个，伊红美蓝平板一个，36℃另取1环划线接种于麦康凯平板或菌落呈现无色透明不发酵乳糖的菌落挑取平板上的可疑菌落36℃36℃观察结果接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管4．2血清学分型和进一步的生化试验4．2．1血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则A1、A2B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见下表。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原型和亚型型抗原群抗原在群因子血清中的凝集3，467，81a=1\*ROMANI1，2，4，5，9……＋－－1b=1\*ROMANI1，2，4，5，9……＋＋－2a=2\*ROMANII1，3，4……＋－－2b=2\*ROMANII1，7，8，9……－－＋3a=3\*ROMANIII1，6，7，8，9……－＋＋3b=3\*ROMANIII1，3，4，6……＋＋－4a=4\*ROMANIV1，（3，4）……（＋）－－4b=4\*ROMANIV1，3，4，6……＋＋－5a=5\*ROMANV1，3，4……＋－－5b=5\*ROMANV1，5，7，9……－－＋6=6\*ROMANVI1，2，（4）……（＋）－－X变体－1，7，8，9……－－＋Y变体－1，3，4……＋－－注：＋凝集；－不凝集；（）有或无。4．2．2进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖胺，西蒙氏柠檬酸盐。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，PH7.2尿素，氰化钾（KCN）生长，以及水杨苷和七叶苷的分解。除宋内氏菌和鲍氏13型为鸟氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养基均为阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做5％乳糖发酵、甘露醇、棉子糖、和甘油的发酵和靛基质试验。志贺氏菌属四个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似，见下表：志贺氏菌属四个群的生化特性生化群5％乳糖甘露醇棉子糖甘油靛基质A群：痢疾志贺氏菌－－－（＋）－/＋B群：福氏志贺氏菌－＋＋－（＋）C群：鲍氏志贺氏菌－＋－（＋）－/＋D群：宋内氏志贺氏菌＋/（＋）＋＋d－注：＋阳性；－阴性；－/＋多数阴性，（＋）迟缓阳性；d有不同生化型。4．3结果报告综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。09.出口食品霉菌的检验方法1。仪器和设备1．1霉菌培养箱：36±11．2恒温水浴箱：45±11．3高压灭菌锅1．4均质器1．5试管:18×150mm1．6锥形瓶:500ml250ml1．7平皿：直径为90mm1．8灭菌吸管 1．9灭菌均质杯1．10酒精棉1．11天平:感量0.1g1．12冰箱：0-4℃和-15～2．培养基的制备2．1孟加拉红培养基称取31.6g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装。1212．2生理盐水:称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中,分装锥形瓶和试管内,每管吸9ml，121℃3.操作程序3.1样品稀释和培养以无菌操作取以无菌操作取25g样品放入装有225ml生理盐水的无菌均质杯内，均质1分30秒，制成1：10的样品匀液用灭菌吸管吸取1ml样液放入9ml生理盐水中，摇匀。放入9ml生理盐水中，摇匀。从试管中吸取1ml样液分别注入两个平皿内，制成10倍的样品稀释液，制成10倍的样品稀释液，依次类推（10-2、10-3）分别倒12-15ml孟加拉红入各平皿立即将平皿内的样液和琼脂充分混合待琼脂凝固后将平皿翻转立即放进25待琼脂凝固后将平皿翻转立即放进25±1℃培养7天将平皿旋转，注意倾注时间不宜太长4．报告结果：取相同稀释度的两个平板数的平均值乘以稀释倍数。标准：≤100/g.10.表面样品的检验表面样品包括：筐、工作台、菜板、刀具、围裙、套袖、手、手套、白盒、工作服。每天做3类相同的表面样品做细菌总数、大肠菌群检测。手和手套还要增加金黄色葡萄球菌的检测。取样工器具、内包装物料的取样：在10cm2的面积上（内包装物料取102．检验过程=1\*GB2⑴细菌总数：方法同第一章，结果报告“个/cm2”或“个/手”或“个/100cm2”。=2\*GB2⑵大肠菌群：去氧胆酸盐类平板计数法=1\*alphabetica、去氧胆酸盐琼脂培养基的制备：称取40g于1000.0ml蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,冷至50=2\*alphabeticb、接种与培养选择适宜的两个连续稀释度的样品液，用无菌吸管吸取1ml注入无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿，倒入冷至45℃左右的培养基约15ml，摇匀凝固后再在上层倒入3-5ml培养基，旋转平皿，覆盖于表面，36±1℃的培养48平板上的大肠菌群呈深红色，菌落直径大于0.5mm，周围可能有雾状胆盐沉淀，菌落形态有的边缘整齐，呈圆形，扁平，有的边缘不齐，表面凸起或呈波状，且为玫瑰红色。参照第一章，选择10-100的菌落计算结果，报告为“个/cm2”或“个/手”或“个/100cm2=3\*GB2⑶金黄色葡萄球菌：平板表面计数法=1\*alphabetica、从1：10稀释液中吸取1ml,接种到3个表面干燥的B-P平板上，这3个平板上分别接种0.4ml、0.3ml、0.3ml。=2\*alphabeticb、以涂抹棒接种物涂布于琼脂表面，避免涂到平板边缘，将平板正置到接种物被培养基吸收，将平板翻转于36±1℃的培养箱内培养48±2h。（金黄色葡萄球菌在B-P平板上的典型菌落特征：呈圆形，表面光滑，凸起、湿润，直径2～3mm，灰色至黑色，有光泽，常有浅色边缘，周围绕以不透明圈沉淀，其外常有一清晰带。）c、从可计数的各类型菌落中至少各选取1个菌落，接种至肉汤培养基中，于36±1℃的培养箱内培养20d、吸取肉汤培养物0.3ml同0.5ml凝固酶试验兔血浆混合，36±1℃e、将呈凝固酶阳性的菌落所代表的3个平板上的菌落相加，并乘以样品稀释倍数，结果报告同上。=4\*GB2⑷空气落菌数的测定（沉降法）在车间的四角及中心5个点，各放置1个直径9cm的倾入灭菌计数琼脂的平板，在采样点打开盖暴露5分钟，36±1℃培养48h。取5个平板计数结果的平均值，报告为“个/平皿”11.生产用水的检验生产用水中余氯的检测：取样：先将水管打开放水5min，使水管中的杂质除去，用水冲洗3遍取水瓶，再将水样采于瓶中。（每天抽取4个水管）检测：在50ml具塞比色管中，加入2.5ml四甲基联苯胺溶液，再加入水样至50ml刻度，混合后立即与标准比色管比色。说明：加氯20min方可使用，水中的游离氯浓度应在0.05～0.3PPM。检测结果如不符合要求，应立即通知加工车间及水过滤设备人员，及时纠正，经再次检测合格后方可继续使用。（二）生产用水的微生物检验4．1水的取样：先用酒精棉擦拭水管口，如为不锈钢水管得用酒精灯灼烧水龙头管口消毒，然后将水龙头完全打开，放水5进36±1℃10min后再将取水瓶（灭好菌的瓶，冲洗3次，）4．2细菌总数的检测：平板计数法以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml样液注入平皿中，分别倒12-15ml平板计数琼脂（恒温45±1℃立即放进36±1℃4．4大肠菌群的检测：多管发酵法=1\*alphabetica、无菌操作于装有5ml双倍乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有导管），各加入10ml水样；于各装有10乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有导管），各加入1ml水样；于各装有10乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有导管），各加入1ml1：10稀释水样。共计15管，三个稀释度。如有乳糖蛋白胨发酵管都不产酸产气，则报告总大肠菌群阴性。=2\*alphabeticb、如有产酸产气的发酵官分别划线接种于EMB平板上，36±1℃培养18～24h,观察有无典型菌落（深紫色具有金属光泽、紫黑色不带或略带金属光泽、淡紫色中心较深的菌落），作革兰氏染色镜检。证实试验：将革兰氏染色阴性军接种乳糖蛋白胨培养液，36±1℃培养24±4．5粪大肠菌群：多管发酵法=1\*alphabetica、自总大肠菌群乳糖发酵试验的阳性管中取1环转种于EC肉汤中，放入放入44.5±1℃的水浴箱内（水面高于试管中培养基液面）培养48±2h，如所有管均不产气，则报告为阴性。=2\*alphabeticb、如有产气者，则划线接种欲EMB平板上，36℃培养24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。查MPN检数表，报告每100ml水样中粪大肠菌群的MPN值。总大肠菌群（MPN）检索表（总接种量55.5ml，其中5份10ml水样；5份1ml水样；5份0.1ml水样）接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值1010.11010.1000000000000012345024579000000111111012345246791100000022222201234546791113111111111111012345468101214000000333333012345679111315111111222222012345681012151700000044444401234589111315171111113333330123458101215171900000055555501234591113151719111111444444012345111315171922接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值1010.11010.11111110000000123452468101211111155555501234513151719222422222200000001234557912141622222255555501234517202326293222222211111101234579121417193333330000000123458111316202322222222222201234591214171922333333111111012345111417202327222222333333012345121417202225333333222222012345141720242731接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值1010.11010.1222222444444012345151720232528333333333333012345172124283236333333444444012345212428323640444444333333012345273339455259333333555555012345252932374145444444444444012345344047546269444444000000012345131721253036444444555555012345414856647281444444111111012345172126313642555555000000012345233143587695接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值接种量，ml每100ml水样中总大肠菌群近似值1010.11010.144444422222201234522263238445055555511111101234533466384110130555555222222012345497094120150180555555444444012345130170220280350430555555333333012345791101401802102505555555555550123452403505409201600＞1600PAGEPAGE1目录内容提要写作提纲正文一、资产减值准备的理论概述………………4（一）固定资产减值准备的概念……………4（二）固定资产减值准备的方法……………5（三）计提资产减值准备的意义……………5二、固定资产减值准备应用中存在的问题分析……………5（一）固定资产减值准备的计提模式不固定………………5（二）公允价值的获取………6（三）固定资产未来现金流量现值的计量…………………7（四）利用固定资产减值准备进行利润操纵………………8三、解决固定资产减值准备应用中存在的问题的对策……10（一）确定积累时间统一计提模式…………10（二）统一的度量标准………11（三）提高固定资产可收回金额确定方式的操作性………11（四）加强对固定资产减值准备计提的认识………………12（五）完善会计监督体系……………………12参考文献………………………15内容提要在六大会计要素中，资产是最重要的会计要素之一，与资产相关的会计信息是财务报表使用者关注的重要信息。然而长期以来，我国的企业普遍存在资产不实、利润虚增的情况，从而使资产减值问题一度成为我国会计规范的热点问题。人们也期望通过会计上的法律法规减少信息的不对称，让企业向广大投资者提供真实有效的信息。在企业生产经营过程中，资产减值是一个不可避免的现象，本文通过对新旧会计准则的对比，针对会计实务中对资产减值准备会计处理，分析资产减值准备在会计实务操作中的存在的问题，并对新会计准则下的会计处理方法进行分析与评价，进而提出解决问题的方法，阐述了资产减值准备提取在实务操作中面临的境况。从资产减值准备入手，对固定资产减值准备进行分析，提出了计提标准不恰当，计提时间未作统一规定等问题，并针对存在的问题提出了分析方法等对策。写作提纲一、资产减值准备的理论概述（一）固定资产减值准备的概念（二）固定资产减值准备的方法（三）计提资产减值准备的意义二、固定资产减值准备应用中存在的问题分析（一）固定资产减值准备的计提模式不固定（二）公允价值的获取（三）固定资产未来现金流量现值的计量（四）利用固定资产减值准备进行利润操纵三、解决固定资产减值准备应用中存在的问题的对策（一）确定积累时间统一计提模式（二）统一的度量标准（三）提高固定资产可收回金额确定方式的操作性（四）加强对固定资产减值准备计提的认识（五）完善会计监督体系固定资产减值准备问题的探讨随着我国经济的发展，市场经济日益完善，大众对企业会计信息披露要求也逐步提高。而市场经济的完善，竞争的加剧，企业对其交易方会计信息要求也提高，国家为了宏观调控的需要，也需要企业提供大量真实的会计信息。新企业会计准则规定，“资产减值损失一经确认，在以后会计期间不得转回”是不可逆性的规定。按照财务会计的谨慎性原则，预期不会带来经济利益的资源就不应列入资产，预期不会带来原预计额的经济利益的资源要折扣后列入资产，即减除预计减值后的部分才是能带来经济利益的资产。本文通过对我国会计准则中的资产减值准备会计问题的研究，理论上提高企业对现行资产减值准则的认识，促进企业完善企业相关会计核算，提高企业财务管理水平，对于完善我国资产减值准备会计准则提出建议，促进我国资产减值准备准则完善。实践中，这一研究旨在加强企业对与资产减值准备会计准则的认识，完善企业会计核算，提示相关部门就准则中不完善的地方加强对企业的监督。以下就是我的论文。一、资产减值准备的理论概述（一）固定资产减值准备的概念固定资产减值准备是指资产的账面价值超过其可回收金额，固定资产可收回金额是指其公允价值减去处置费用后的净额与固定资产预计未来现金流量的现值两者之间较高者。其中，处置费用包括与资产处置有关的法律费用、相关税费、搬运费以及为使资产达到可销售状态所发生的直接费用等判断固定资产是否减值，应依据资产可能已经发生减损的某些迹象，如果存在任何一种迹象，企业应对其可收回金额进行正式估计。企业的固定资产可按固定资产的账面价值与可收回金额孰低计量，按可收回金额低于账面价值的差额计提减值准备。对于可收回金额须以相关技术、管理等部门的专业人员提供的内部或外部独立鉴定报告，作为判断依据。（二）固定资产减值准备的方法大部分企业的资产减值准备主要包括坏账准备、固定资产减值准备和存货跌价准备。固定资产减值准备，固定资产减值准备计提范围包括市场价格持续下跌或技术陈旧、损坏、长期闲置等原因导致可收回金额低于账面价值的固定资产。计提方法是按单项资产计提。1、计提公式：减值准备=账面价值－可收回金额。2、全额计提情况：①长期闲置不用，在可预见的未来不会再使用，且已无转让价值的固定资产；②虽然固定资产尚可使用，但使用后产生大量不合格的固定资产；③已遭损毁，以至于不再具有使用价值和转让价值的固定资产；④其它实质上已经不能再给企业带来经济利益的固定资产。需要注意的是，已经全额计提减值准备的固定资产，不再计提折旧。（三）计提资产减值准备的意义固定资产减值是指固定资产在使用过程中，由于存在有形损耗和无形损耗以及其他原因，导致其可收回金额低于其账面价值的情况。当可收回金额低于帐面价值时，确认固定资产发生了减值，这是就要计提固定资产减值准备，从而调整固定资产的账面价值，以使账面价值真实客观地反映实际价值。计提减值准备使得企业的会计信息更加真实、制定的财务政策更加稳健。而从信息的使用者角度出发，适时考虑无形损耗，更精确计量了期末资产的价值，同时也剔除了虚增的利润，降低了财务风险，体现了谨慎性原则。计提减值准备是对固定资产折旧的有益补充，它的实施也体现了实质重于形式的原则，使会计信息更加真实，财务政策更加稳健。现在，企业固定资产的更新速度越来越快，利用固定资产减值准备及时地反映固定资产的减值具有很强的现实意义，的确有助于提高会计信息质量。二、固定资产减值准备应用中存在的问题分析（一）固定资产减值准备的计提模式不固定固定资产在实际运用过程中可以发现，企业对各项资产进行全面检查的时间“年度终了”较好掌握，但是“定期”会计制度没有说明，这就给企业提供了很大的选择空间，使企业在操作的时候具有一定的随意性，财务人员可以随意制定计提时间，造成虚假信息泛滥，误导投资，也使企业之间提供的相关信息缺乏了可比性。企业的会计行为受会计准则等制度规定的约束，但是会计准则在具有统一性和规范指导作用的同时还兼有一定的灵活性，给会计人员区别不同情况留有一定的活动空间和判断余地，如同一会计事项的处理存在多种备选的会计方法或可由会计人员做出不同的判断。准则的灵活性是为了让更多的企业从实际出发，多种会计处理方法并存，为企业进行会计操纵提供了可乘之机，企业可以根据自身利益的需要选择会计方法，操纵会计报表。（二）公允价值的获取对于固定资产减值而言，公允价值的获取有难度，我国新会计准则中对公允价值的定义：“在公平交易，熟悉情况的交易双方自愿的进行资产交换或者债务清偿的金额。”可见，公允价值计量属性反映的是现值，其本质是一种基于市场信息的评价，是公平交易的市场而不是其它主体对资产或负债价值的认定。公允价值计量属性的引入无疑在很大程度上会提高资产减值会计信息的决策相关性，尽管我国市场经济已经有了长足的发展，但非市场化的因素依然很多，与国际财务报告准则所依赖的“成熟市场经济”相距甚远。部分市场仍然处于垄断状态，竞争不充分，固定资产的市场价格不能反映市场的公允性，我国目前的资产信息、价格市场不健全，不能定期、及时地公开各种资产的最新市价，因此公允价值难以得到合理的确定，不同市场上所反映出来的市场信息存在一定的差异性，价格难以真正反映价值，准则对资产可收回金额的估计规定过于笼统，没有明确划分不同性质的资产所使用的计量属性，企业资产按照其经济利益的实现方式可以划分为两类，一类是待出售和处置或者持有的目的就是为了出售并且有公平市场价值的资产，如可交易性金融资产、可供出售的金融资产及投资性房地产等；另一类是基于持续经营的假设，通过持续使用来实现经济利益的资产，这类资产的价值在很大程度上取决于企业的经营管理水平，如企业的生产设备和产房等固定资产，这类资产即使有公平的市场价格，但由于这类资产在正常经营条件下是不会被出售或处置的，因此，其相应的市场价格与其特定主体价值的计量是无关的，其价值取决于其未来所能实现的经济利益的折现值。即同一生产设备在不同企业的不同经营管理水平下其特定主体价值是不一样的。因此，如果笼统的运用公允价值和现值对资产的可收回金额进行估计并取其高者，不仅会降低会计信息的可靠性，也会降低会计信息的相关性。在单个企业的经营环境恶化和经营管理水平下降的条件下，企业固定资产的公允价值减去处置费用后的净额可能会大于账面价值，账面价值可能大于现值，此时，从会计信息的可靠性和相关性的要求来看，企业应该以现值低于账面价值的金额来计提资产减值，这正是投资者决策所需要的会计信息。但是，按照准则规定，企业完全可以已公允价值减去处置费用后的金额大于资产的账面价值为由不计提减值，而不对现值进行估计。而此时，以公允价值为基础计量的资产价值不仅没有真实的反映企业的经营状况，也损害了会计信息的预测价值和反馈价值，所获得的信息本身可能就是不完整的，增加了公允价值计量的难度，造成了投资者的决策失误。（三）固定资产未来现金流量现值的计量固定资产未来现金流量现值的计量难度较大，新准则规定：“资产预计未来现金流量的现值，应当按照资产在持续使用过程中和最终处置时所产生的预计未来现金流量，来选择恰当的折现率对其进行折现后的金额加以确定。”可见，未来现金流量现值准确性取决于未来现金流量和折现率确定的科学性和合理性。但是，对现金流量和折现率的确定很难把握。主要表现在：1、未来现金流量的预测具有很大不确定性。新准则规定：“固定资产的未来现金流量的取得是需要企业管理层在合理和有依据的基础上对固定资产剩余使用寿命内整个经济状况进行最佳估计，其中预计的固定资产未来现金流量应当包括：固定资产持续使用过程中预计产生的现金流入如销售量，以及售价的预测；为实现固定资产持续使用过程中产生的现金流入所必需的预计现金流出（包括为使固定资产达到预定可使用状态所发生的现金流出）如设备购置、厂房构建的预测；资产使用寿命结束时，处置固定资产收到或者支付的净现金流量如处置收入、处置费用公允价值的预测。而这些预测，一方面需要建立在一系列假设和估计的基础之上，另一方面需要企业的管理当局具有较高的现金流量管理水平，对于我国而言中小企业占据着市场经营的主体，而中小企业的企业规模小、经营决策权高度集中，但凡是中小企业，基本上都是一家一户自主经营，使资本追求利润的动力完全体现在经营者的积极性上。由于经营者对千变万化的市场反应灵敏，实行所有权与经营治理权合一，既可以节约所有者的监督成本，又有利于企业快速作出决策。其次，中小企业员工人数较少，组织结构简单不会单设部门去管理现金流量，这样一来，对于企业的财务信息就会造成不确定，带来数据失真的后果。2、合理折现率的计量难度大。新准则规定：“折现率是反映当前市场货币时间价值和资产特定风险的税前利率，该折现率是企业在购置或者投资资产时所要求的必要报酬率。”因此合理的折现率必须考虑资金的时间价值和资产特定的风险价值。要求合理折现率的确定必须以能够反映该项资产特定风险的市场利率为依据，如果该项市场利率难以取得，也可以采用替代利率估计折现率。替代利率可以是调整后的加权平均资金成本、增量借款利率或者其他相关借款利率。调整时需要考虑该项资产的特定风险，以及其他有关货币风险和价格风险。这样一来折现率成了一个十分不稳定的因素，对于企业而言，客观估计某项固定资产的特定风险有相当大的难度，不同的会计人员对于固定资产价值的会计估计显然会有差异，这样也容易导致利润操纵，因而计提是否真实合理不易确定。在计提固定资产折旧时，要将计提的减值准备考虑进去。这样做企业将导致固定资产的原始价值一部分进入了产品成本，一部分进入了营业外支出，固定资产的原始价值应该是一个有机的整体，这样做不是强行将本来属于一体的事物拆成了两部分，而对计提减值准备金额估计的大小将使营业费用与非营业费用之间的界限变模糊，进而影响到营业利润与非营业利润的计算结果。由于折旧率和尚可使用年限在固定资产减值准备计提和转回的各期均要做相应的改变，固定资产均要重新计提折旧，不但计算烦琐，而且容易出错。（四）利用固定资产减值准备进行利润操纵固定资产预计未来现金流量的现值、公允价值等是企业确认和计量资产减值准备的很重要的基础。通过上面的分析我们知道，公允价值、未来现金流量、折现率等在一定程度上依赖于会计人员的主观判断，存在较大的主观性，其结果会因人而异。尽管新准则对公允价值、未来现金流量现值的使用进行了细化和规范，但是要企业真实地计提固定资产减值，还存在一定的难度。利润操纵是公司的管理层为了实现自身的效用少交所得税或实现公司的市场价值最大化目标，进行会计政策的选择，调节公司盈余的行为固定资产减值的计提能够平抑各年度间的利润波动，为踌年度利润调节留出空间，有的企业甚至将视为操纵盈亏的“蓄水池”。企业利用固定资产减值准备操纵利润的表现形式通常有两种形式：少提固定资产减值准备，增加企业利润。企业自身的动机，有些企业为了上市或向银行贷款，少提固定资产减值准备来增加企业利润，不能真实的反映资产价值，反映资产所带来的经济利益，从而来粉饰财务报表，误导了信息使用者的经济决策，从而来得到想要的结果。多提固定资产减值准备，减少企业利润。盈利的公司加速计提，一些企业往往趁着当前生产经营态势较佳、利润大幅增长的经营背景，大额加速计提固定资产减值准备，这样既能集中清算、释放一些历史问题遗留下来的各种潜在风险，又能利用“会计估计”而低估固定资产形成秘密准备金，为以后的会计期间留下足够的“业绩储备”。固定资产减值的计提直接影响企业利润的增减。有些企业人为地多提或少提固定资产减值准备，以达到调节企业利润的目的，这种行为严重的影响了会计信息的真实可靠性，主观随意性较大，留给企业很大的选择空间，计提标准以及比例的确定都可由企业自行根据情况确定，这在客观上也为企业利用计提固定资产减值准备操纵利润提供了方便企业既可以“少提”来掩盖风险，虚增利润，也可以“多提”减少利润，为来年增加利润做准备，从而达到一定的目的。同时需要指出的是，新会计准则规定，资产减值损失一经确认，在以后会计期间不得转回，这使得企业想要利用转回资产减值准备调节利润的美梦破灭，避免出现虚列资产，少提减值而导致企业利润的虚增，这一项规定大大减少了企业利用资产减值准备进行调节利润的空间。三、解决固定资产减值准备应用中存在的问题的对策(一)确定积累时间统一计提模式新会计准则对计提资产减值准备的时间未作统一规定的问题做出了明确的说明，并规定应当判断资产是否存在发生减值的可能性的迹象。如果存在减值迹象，应进行减值测试，估计资产的可回收金额。当固定资产的可回收金额低于其账面价值时，应当计提减值准备。这一规定统一了资产减值准备计提的时间，避免企业对外报送季报、年报时均应按照准则规定来判断是否存在资产减值的迹象，以便确定是否应该计提减值准备。准则还规定了，对于固定资产的减值损失，一旦确认后，会计期间内均不得转回。1、判断资产减值迹象。资产存在减值迹象是是否进行减值测试的必要前提，资产肯能发生减值的迹象主要可从外部信息来源和内部信息来源两方面加以判断。（1）从企业外部信息来源看，资产的市价当期大幅度下跌，其幅度明显高于因时间的推移或者正常使用而预计的下跌；企业经营所处的经济、技术或者法律等环境及资产所处的市场在当期或者将在近期发生重大变化，从而对企业产生有不利的影响；市场利率或者其他市场投资报酬率在当期已经提高，从而影响企业计算资产预计未来现金流量现值的折现率，导致资产可收回金额大幅度降低等。（2）从企业内部信息来源看，如果企业有证据表明资产已经陈旧过时或者其实体已经损坏；资产已经或者将被闲置、终止使用或者其实体已经损坏；企业内部报告的证据表明资产的经济绩效已经低于或者将低于预期。2、确定可收回金额。可收回金额应当根据资产的公允价值减去处置费用后的净额与资产预计未来现金流量的现值两者之间较高者确定。应当遵循以下原则：（1）资产的公允价值减去处置费用后的净额，应当根据公平交易中销售协议价格减去可直接归属该资产处置费用的金额确定；不存在销售协议但存在资产活跃市场时，应当按照资产的市场价值减去处置费用的金额确定。（2）资产预计未来现金流量的现值，应当按照资产在持续使用过程中和最终处置时所产生的预计未来现金流量，选择恰当的折现率对其进行折现后的金额加以确定。（3）资产的公允价值经济安全处置费用后的净额与资产预计未来现金流量的现值，只要有一项超过了资产的账面价值，就表明资产没有发生减值，不需要再顾及另一项金额。3、由于该企业治理结构、会计准则的不完善以及会计信息市场的不完备，会计政策选择权具有一定的必然性。赋予企业一定的会计弹性，便于企业通过专业判断和会计选择向市场传递企业的特有信息。然而，现在我国资本市场尤其是股票市场的发展时间毕竟还很短，各项措施都极不完善，在这种情况下不宜赋予企业过多的选择权[9]。因此，应该对资产减值的试用范围作较详细的规定，尽可能缩小会计人员人为估计和判断的范围，避免企业执行会计政策的主观随意性，统一和规范资产减值准备的计提方法和计提比例，尽可能减少同类业务处理方法的多样性和选择权。对于不同的计量模式实际上可以统