T-NAIA 0288-2024 一次性使用卫生用品中金黄色葡萄球菌检验 实时荧光PCR法_第1页
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DeterminationofStaphylococcusaureusindisposablesanitaryproducts—2024-05-17发布2024-05-30实施I II 1 1 1 1 1 2 2 3 4 5 6本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件起草单位：宁夏计量质量检验检测研究院、宁夏食品检测研究1GB/T27403实验室质量控制规范食医用手套或指套）、纸巾、湿巾、卫生湿巾、电话膜、帽子、口罩、妇女经期卫生用品（包括卫生护3.2DNA(deoxyribonuleicaci3.3Nuc(thermost3.4PCR(polymerasechain一次性使用卫生用品样品经扩增培养后，提取增菌液中DNA，以提取的DNA为模板，以金黄色葡萄球菌中（Nuc）基因中相对保守且高度特异的引物和探针进行目标物的实时荧光PCR扩增，根据Ct值2在100级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少3个包装，从每个包装中取样7.3.1手动提取法。从样品增菌液（7.2）表层吸取1mL增菌液。离心收集细菌（4000rpm/min，37.3.2试剂盒法。从样品增菌液（7.2）表层吸取1mL增菌液，离心收集细菌（4000rpm按照商品化细菌基因组提取试剂盒说明书进行细菌基因组DNA提取，如不能即时检验，提取后DNA取适量DNA原液加无菌双蒸水稀释至一定倍数后，使用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计测定ρ—DNA浓度，单位为微克每毫升(μg/mL体积(μL）1检验过程中分别设置阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照为金黄色葡萄球菌标准菌株DNA，阴性对照为大肠埃希氏菌标准菌株DNA，空白对照为等体积的无菌双蒸水。每个待检样品提取DNA溶c)阳性对照：有荧光对数增长且荧光通道出现典型的扩增曲4结果为阳性者，该样品检验结果为金黄色葡萄球菌初筛阳性，对样品增菌液进一步按照GB5A.1.1成分A.1.2制法6F:5'-CACCTGAAACAAAGCATCCTAA5'-FAM-TGCTTCAGGGCCATATTTCTR:5'-CGCTAAGCCACGTCCATATNuc基因的扩增片段atgtacaaaggtcaaccaatgacattcagactattattgggtgcatttacgaaaaaaatggtagaaaatgcaaataa

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