GXAS-沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法编制说明

PAGEPAGE6团体标准制定（修订）《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》（征求意见稿）编制说明一、项目来源根据《广西标准化协会关于下达2023年第七十批团体标准制修订项目计划的通知》（桂标协〔2023〕231号）精神，由广西分析测试协会提出，广西博测检测技术服务有限公司牵头，与广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西益谱检测技术有限公司、广西绿保环境监测有限公司、农业农村部亚热带果品蔬菜质量监督检验检测中心、广西壮族自治区分析测试研究中心、百色市检验检测中心、广西众晟生物科技有限公司、广西东盟食品检验检测中心、广西壮族自治区林业科学研究院、南宁市武鸣区经济作物技术服务中心、横州市综合检验检测中心、广西工商学校、北海市农业技术服务中心、金秀瑶族自治县食品药品与计量检验检测中心、凭祥市农业农村局等单位共同起草的《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》（项目立项编号2023-7003）团体标准的制定任务。二、项目背景及目的意义1、目的意义、必要性广西地处我国华南地区，因其优越的区位、气候、自然资源条件，农业优势产业发展极具特色，是全国水果主产区。据《中国农村统计年鉴2021》广西2020年柑橘园面积为 576.6千公顷。广西2020年柑橘产量为1382.1万吨，2021年柑橘产量为1607.4万吨，增长116.3%。当今广西柑橘已经形成了北沙糖，南沃柑局面。近年来，武鸣沃柑产业迅猛发展，2020年底产果面积40万亩，产量120万吨，成为产值百亿元的水果大产业。沃柑种植时，经常喷施杀菌剂类农药防治柑桔溃疡病；沃柑采摘后也通过杀菌剂类农药浸泡等方式为水果保鲜，延长存储周期。GB2763-2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中柑果有44种杀菌剂类农药残留项目最大残留限量要求，其中36种杀菌剂类农药残留项目在GB2763-2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中有相应的指定检测标准方法。而双胍三辛烷基苯磺酸盐、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑锌、溴菌腈、亚胺唑、毒菌酚和氟吡菌酰胺等8种杀菌剂类农药残留项目虽有限量指标却无检测标准方法。查询也没有相应的检测标准方法。为了保证食品安全，提高沃柑产品质量。迫切需要建立沃柑中双胍三辛烷基苯磺酸盐、二氰蒽醌、噻唑锌、溴菌腈、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等农药残留检测新方法，发布相应的农药残留检测方法标准来指导和规范沃柑中杀菌剂类农药残留检测。防止农药残留超标的不合格产品流入市场，为全国消费者提供放心优质合格沃柑。指导广大沃柑种植企业及农户正确使用杀菌剂类农药。提高沃柑产品质量和商品经济价值，提高农民经济效益，推动广西沃柑加工产业健康发展，打造广西沃柑品牌具有积极的促进作用。并填补目前国内国家标准、行业标准、地方标准、团体标准无沃柑中双胍三辛烷基苯磺酸盐、二氰蒽醌、噻唑锌、溴菌腈、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等农药残留标准检测方法的空白。2紧迫性沃柑上市的季节天气闷热潮湿，细菌、病菌极易繁殖，部分果农保鲜技术掌握不充分，贮存方式不合理，导致沃柑大量损耗，质量等级下降，造成果农经济大量损失。为指导沃柑种植企业及农户正确采收沃柑，更好保障沃柑的新鲜度，提高沃柑产品质量和商品经济价值，提高农民经济效益，推动广西沃柑加工产业健康发展，打造广西沃柑品牌。广西发布实施地方标准DB45/T2272-2021《沃柑采收及保鲜贮运技术规程》和团体标准T/GXAS107-2020《沃柑采收及采后商品化处理技术规程》，两个标准推荐的保鲜溶液主要是2，4-D钠盐、双胍三辛烷基苯磺酸盐、咪鲜胺等三种农药组成。2021年初“泡药沃柑”报道里提到的抑霉唑、咪鲜胺、24滴、百可得等杀菌剂类农药，并不是禁药，按照标准和规定使用抑霉唑、咪鲜胺、24滴等杀菌剂类农药为水果保鲜，延长存储周期，是全世界通用的做法。但从报道来看，使用杀菌剂类的环节明显存在着诸多安全问题。为确保消费者品尝到物美质优的沃柑，防止上市的沃柑农残不超标，保障人民群众“舌尖上安全”，加强沃柑中农药残留检测已是紧迫性问题。基于GB2763—2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中只有双胍三辛烷基苯磺酸盐、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑锌、溴菌腈、亚胺唑、毒菌酚和氟吡菌酰胺等8种杀菌剂类农药残留限量指标而无检测标准方法，为此，建立沃柑中双胍三辛烷基苯磺酸盐、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑锌、溴菌腈、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等农药残留检测新方法，发布相应的农药残留检测方法的标准。指导和规范沃柑中杀菌剂类农药残留检测，防止农药残留超标的不合格产品流入市场，为全国消费者提供放心优质合格沃柑。配合广西地方标准DB45/T2272—2021《沃柑采收及保鲜贮运技术规程》和团体标准T/GXAS107—2020《沃柑采收及采后商品化处理技术规程》等标准实施。狠抓沃柑标准化、规范化生产，全力打造“武鸣沃柑”的百亿产业，打响“中国沃柑看武鸣”品牌。3市场化需求作为全国沃柑主要种植产区，近年来武鸣沃柑产业迅猛发展，出口品牌效应持续加强，走俏国际市场。陆续出口到菲律宾、马来西亚、印度尼西亚等东盟国家及加拿大等北美国家。主动开拓国外销售渠道，掌握柑橘的最新检验检疫要求，制定相应的沃柑农药残留检测标准，加强检测，防止不合格产品流入市场，提供放心优质合格沃柑供应国际市场。为此，旨在解决沃柑中双胍三辛烷基苯磺酸盐、春雷霉素、二氰蒽醌、噻唑锌、溴菌腈、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺等农药残留尚无检测方法标准的问题，广西博测检测技术服务有限公司成立沃柑杀菌剂类农药残留检测研究课题小组，并于2021年6月联合南宁市武鸣区经济作物技术服务中心向南宁市科学技术局申请重点研发项目《沃柑中杀菌剂类农药残留关键检测技术的研究》，于2021年底获批。《沃柑中杀菌剂类农药残留关键检测技术的研究》获批后，课题小组克服新冠疫情等客观条件对课题研究的影响，同时克服课题研究的化合物性质各异的影响，不断进行转化和净化试验，研发了《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》检测方法，方法试样用乙酸乙酯超声/振荡提取，盐析离心后，取上清液，经分散固相萃取净化，气相色谱-质谱联用法同时提取同时检测沃柑中溴菌腈、亚胺唑、氟吡菌酰胺农药及其代谢物残留量，定性精确，定量准确，快速高效，可提高监管部门与检验机构的工作效率。弥补了沃柑中溴菌腈、亚胺唑、氟吡菌酰胺检测方法的空缺，顺应社会需求，具有先进性、科学性、实用性。三、项目编制过程（一）成立标准编制工作组《沃柑中杀菌剂类农药残留关键检测技术的研究》课题的任务之一是制定相关的团体标准。2021年12月获批后，课题组及相关参与单位组成《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》工作组，就团体标准开展调研、试验、比对、编制等相关工作。由广西博测检测技术服务有限公司牵头组织成立了标准编制工作组，制定了标准编写方案，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作，具体由广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西益谱检测技术有限公司、广西绿保环境监测有限公司、农业农村部亚热带果品蔬菜质量监督检验检测中心、广西壮族自治区分析测试研究中心、百色市检验检测中心、广西众晟生物科技有限公司、广西东盟食品检验检测中心、广西壮族自治区林业科学研究院、南宁市武鸣区经济作物技术服务中心、横州市综合检验检测中心、广西工商学校、北海市农业技术服务中心、金秀瑶族自治县食品药品与计量检验检测中心、凭祥市农业农村局等单位相关人员配合。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内有关沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定的相关技术文献资料。主要有：GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（三）研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容确定为气相色谱-质谱联用法测定沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的检测原理、试剂和材料、主要仪器设备、样本采集与处理、检测方法、结果计算。（四）调研及形成草案、征求意见稿、2023年7月，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有的参考资料中有关气相色谱-质谱联用法测定沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的要求，并结合气相色谱-质谱联用法测定沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量实际要求的基础上，按照简化、统一等原则编制完成团体标准《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》（草案）。2023年10月，标准编制工作组对前期的研究和数据进了整理并结合前期技术咨询会、征求意见会、技术审查会的内容针对气相色谱-质谱联用法测定沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量进行多次讨论、研究，最终形成团体标准《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》（征求意见稿）和编制说明。四、标准制定原则（一）实用性原则本文件是在充分收集相关资料和文献，分析溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的检测方法当前现状，调研溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的检测方法情况，在现有较少的溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的检测方法的基础上，结合课题组提取、净化、比对等系列实验数据总结起草的。符合当前沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的检测方法的方向与需求，有利于行业的长远发展，具有较强的实用性和可操作性。（二）协调性原则本文件编写过程中注意了与沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的检测方法相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。（三）规范性原则本文件严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。（四）前瞻性原则本文件通过气相色谱-质谱联用法测定沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量，验证分析沃柑样品，建立《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》方法，弥补了沃柑中溴菌腈、亚胺唑、氟吡菌酰胺检测方法的空缺，顺应社会需求，具有先进性、科学性、实用性。五、标准主要章节内容及确定依据团体标准《沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》主要内容包括术语和定义、要求、原理、试剂和材料、主要仪器设备、试样制备、分析步骤、结果计算。2022年起，课题小组克服新冠疫情等客观条件对课题研究的影响，同时克服课题研究的化合物性质各异的影响，不断进行转化和净化试验，数据量丰富，在不断的试验过程中试验方法得到不断完善，最终形成准确度高、可操作性强的气相色谱-质谱联用法检测沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量方法。（一）原理试样用乙酸乙酯超声/涡旋振荡提取，盐析离心后，取上清液，经分散固相萃取净化，液相色谱-质谱联用法检测，外标法定量。（二）试剂和材料除另有说明外，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。1试剂1.1乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。1.2甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。1.3乙酸乙酯，（CH3COOC2H5，CAS号：141-78-6)：色谱纯。1.4氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）：优级纯1.5硫酸镁(MgSO4，CAS号：7487-88-9)。用前在500℃下烘5小时，冷却200℃取出，冷却近室温，贮存于干燥器备用。2标准品2.1溴菌腈（C6H6Br2N2，CAS号35691-65-7）标准品：纯度≥99%；2.2亚胺唑，（C17H13Cl3N4S，CAS号：86598-92-7），标准品纯度≥99%2.3氟吡菌酰胺，（C16H11ClF6N2O，CAS号：658066-35-4），标准品纯度≥99%3标准溶液配制3.1溴菌腈标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取约10mg（精确至0.1mg）溴菌腈标准品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。3.2亚胺唑标准储备溶液(（1000mg/L）：准确称取约10mg（精确至0.1mg）亚胺唑标准品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。3.3氟吡菌酰胺标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取约10mg（精确至0.1mg）氟吡菌酰胺标准品于10mL容量瓶中，用乙腈溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。3.4混合标准中间溶液100μg/ml分别取适量上述标准储备溶液（3.1~3.3）于10mL容量瓶中，40℃水浴氮气吹至近干，用乙酸乙酯定容配制成100μg/mL的混合标准溶液，有效期6个月；再用乙酸乙酯稀释，配制10μg/mL的混合标准溶液，避光-18℃及以下条件保存，有效期1个月。4材料4.1乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(PSA):40μm~60μm。4.2微孔过滤膜（有机相）:0.22μm，或相当者。5仪器和设备5.1气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）。5.2分析天平：感量0.1mg和感量0.01g。5.3组织捣碎仪。5.4涡旋振荡仪。5.5超声波清洗器5.6离心机：转速不低于4500r/min。5.7旋转蒸发仪。（三）试样制备1试样制备样品取样部位按照GB2763规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。2试样储存将试样按照测试和备用分别存放。于-18℃及以下条件储存。（四）分析步骤1提取称取10g试样置于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL乙酸乙酯超声/涡旋振荡提取15min，加入5gNaCl,涡旋3min，于4500r/min离心5min，待净化。2净化吸取（四）1中上层清液5mL于内含1000mg无水硫酸镁、200mgPSA的塑料离心管中，涡旋振荡2min，于4500r/min下离心5min。准确吸取3mL上清液于15mL离心管中，40℃水浴氮气吹至约0.8mL，用乙酸乙酯定容至1.0mL，过微孔滤膜，转进样小瓶用于测定。3测定3.1仪器参考条件a)色谱柱：5％苯基-95％甲基聚硅氧烷石英毛细管柱；30m×0.25mm×0.25μm，或相当者；b)色谱柱温度：40℃保持2min，然后以20℃/min程序升温至180℃，保持2min；再以10℃/min升温至280℃，保持5min；c)载气：氦气，纯度≥99.999%，流速1.0mL/min；d)进样口温度：280℃；e)进样量:1μL。f)进样方式：不分流进样；g)电子轰击源：70eV;h)离子源温度：230℃j)GC-MS接口温度：250℃：k)选择离子监测：每种化合物分别选择一个定量离子，2个~3个定性离子。每组所有需要检测的离子按照出峰顺序，分时段分别检测。每种化合物的保留时间、定量离子及定性离子，参见表1；表1溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑的保留时间、定量离子及定性离子序号农药中文名农药英文名保留时间(min)定量离子定性离子1定性离子2定性离子31溴菌腈bromothalonil6.52766.052.0106.079.02氟吡菌酰胺fluopyram15.994173.0145.0195.0208.03亚胺唑imibenconazole27.362125.055.082.0253.03.2基质匹配标准工作曲线空白样品按照（四）1、（四）2进行前处理得到空白基质溶液。精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.010mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.400mg/L、0.800mg/L、1.000mg/L的基质匹配标准工作溶液，根据仪器性能和检测需要选择不少于5个浓度点，供气相色谱质谱联用仪测定。以农药定量离子的质量色谱图面积为纵坐标.相对应的基质匹配标准工作溶液质量浓度为横坐标，绘制基质匹配标准工作曲线。3.3定性及定量3.3.1保留时间被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较.相对误差应在±2.5%之内。3.3.2离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时.如果检出的色谱峰的保留时间标准样相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物选择的离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品目标化合物的离子丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。表2定性时离子丰度比的最大允许偏差离子丰度比（％）>50>20~50>10~20≤10允许相对偏差（％）±20±25±30±50本方法的标准物质GC-MS选择离子监测质量色谱图参见图1-图3。图1溴菌腈标准品的选择离子监测质量色谱图图2氟吡菌酰胺标准品的选择离子监测质量色谱图图3亚胺唑标准品的选择离子监测质量色谱图3.4定量：外标法定量；3.5试样溶液的测定将基质匹配目标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱-质谱联用仪中，保留时间和离子丰度比定性，测得定量离子的质量色谱图峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。3.6平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。3.7空白试验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。（五）结果计算试样中各农药残留量以质量分数ω计，单位为毫克每千克(mg/kg)，按公式(1)或公式(2)计算。 （1）ω=ρ式中：ω—试样中各被测物残留量的数值，单位为毫克每千克(mg/kg);ρ1—基质匹配标准工作溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L);ρ2—从基质匹配标准工作曲线中得到的试样溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L);A—试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积As—基质匹配标准工作溶液中被测物的质量色谱图峰面积V1—提取液的体积，单位为毫升(mL)；V2—移取净化液的体积，单位为毫升(mL)；V3—样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m—试样质量的数值，单位为克(g)。（六）方法确定依据1、基体效应试验采用两组样品：其中一组是待测分析物的纯标品溶液，其进样测定的峰面积记为A，另一组空白样品按照（四）1、（四）2进行前处理得到空白基质溶液，将待测分析物加入此溶液进样测定的峰面积记为B，则绝对基质效应（absoluteME）=（B/A）×100%；也可用基质效应因子（MF）来表示。若MF>100%，则表明离子增强效应；若MF＜100%，则表明离子抑制效应。基体效应试验结果见表3。表3基体效应试验结果纯标品溶液的峰面积记为A空白基质的峰面积记为B绝对基质效应（absoluteME）=B/A*100溴菌腈9493674071.0氟吡菌酰胺421914050396.0亚胺唑4197632042048486.0表3结果表明：溴菌腈基质效应因子（MF）71.0%，氟吡菌酰胺基质效应因子（MF）96.0%，表明溴菌腈和氟吡菌酰胺是离子抑制效应，溴菌腈基质效应因子的变动超过15%；亚胺唑基质效应因子（MF）486.0%，为离子增强效应，其基质效应因子的大大变动超过15%。为消除基质效应采用空白基质配制标准溶液曲线。2、提取时间选择试验称取10.00g浸泡过溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药的沃柑样品，加入10mL乙酸乙酯，分别5min、10min、15min、20min、30min、40min超声提取，按（四）2净化后检测各浸提液中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑含量，考查提取时间对提取影响，试验结果见表4。表4提取时间选择试验结果提取时间（min）5101520253040旋涡振荡提取20min溴菌腈（mg/kg）0.250.240.250.240.280.270.270.28氟吡菌酰胺（mg/kg）0.390.410.420.440.460.430.490.45亚胺唑（mg/kg）0.080.090.110.110.110.110.100.10表4数据表明，增加提取时间，氟吡菌酰胺浸提效果更好，浸提15分钟已基本达到效果。涡旋振荡提取20min与超声振荡提取20min提取效果一致。本方法定采用涡旋振荡或超声振荡浸提15分钟。3、净化材料的选择称取20.00g空白基体中加入在4000ng的溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑混合标准溶液,加入20mL乙酸乙酯，分取1.5mL浸提液于不同净化材料中净化，净化后过0.22μm膜上机检测溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑，考查不同净化材料的回收率，试验结果见表5。表5净化材料选择试验结果净化材料溴菌腈氟吡菌酰胺亚胺唑检测浓度（ng/mL）回收率（%）检测浓度（ng/mL）回收率（%）检测浓度（ng/mL）回收率（%）30mgPSA和300mgMgSO4156.4078.20156.3478.17195.0997.5560mgPSA和300mgMgSO4153.4176.71177.6488.82190.5195.2590mgPSA和300mgMgSO483.7141.85148.0574.02221.11110.5630mgPSA和300mgMgSO4+corbonS4mg77.3638.68146.9573.48209.02104.5130mgPSA和300mgMgSO4+corbonS8mg91.8645.93168.1584.07191.4995.7530mgPSA和300mgMgSO4+corbonS16mg91.6845.84159.5379.77218.37109.1930mgPSA和300mgMgSO4+GCB4mg95.5747.79111.6355.81197.8598.9330mgPSA和300mgMgSO4+GCB8mg116.6958.34171.4285.71192.6396.3230mgPSA和300mgMgSO4+GCB16mg94.2447.12180.9190.45210.47105.2430mgPSA、30mg吸附剂C18和300mgMgSO4+corbonS4mg68.3868.3878.6778.6729.5359.0730mgPSA、30mg吸附剂C18和300mgMgSO493.5846.79160.4980.24215.37107.69注：加标理论浓度为200ng/mL。表5数据表明，加入脱色素材料corbonS或GCB，均对溴菌腈有影响，氟吡菌酰胺、亚胺唑影响不大，PSA增加到60mg/mL时，溴菌腈的回收率下降到41.85%，氟吡菌酰胺、亚胺唑影响不大。综合数据，方法选择每毫升提取液加入40mgPSA和200mgMgSO4净化。4、线性曲线本方法中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑的标准工作曲线图见附图4-图6，从图4-图6可见，溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑在0.01mg/L～1.0mg/L范围内具有良好的线性关系，相关系数(r)均≥0.99996，具有较高的准确性。图4溴菌腈标准工作曲线图图5氟吡菌酰胺标准工作曲线图图6亚胺唑的标准工作曲线图5、检出限试验以3倍信噪比为检出限，10倍信噪比为定量限，溴菌腈的检出限为0.023mg·kg-1，定量限为0.076mg·kg-1，氟吡菌酰胺的检出限为0.0007μg·kg-1，定量限为0.003μg·kg-1，亚胺唑的检出限为0.00015mg·kg-1，定量限为0.0005mg·kg-1。6、加标回收试验称取10g空白基体中加入在250ng（0.3倍溴菌腈定量限）、1000ng（1.3倍溴菌腈定量限）、2000ng（2.6倍溴菌腈定量限）、4000ng（5倍溴菌腈定量限）的溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑混合标准溶液,加入10mL乙酸乙酯，按（四）1、2前处理，按（四）3测定溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑含量，考查加不同标准的回收率，试验结果见表6。表6加标回收试验结果加标理论浓度（ng/mL)溴菌腈氟吡菌酰胺亚胺唑检测浓度（ng/mL)回收率（%）检测浓度（ng/mL)回收率（%）检测浓度（ng/mL)回收率（%）250ng即0.025mg/kg7559.2979.05129.2086.1347.7663.681000ng即0.1mg/kg300179.9860.0248.0882.69306.6102.22000ng即0.2mg/kg600385.3264.2444.074.0532.9288.824000ng即0.4mg/kg400359.7289.93367.691.90362.2490.56结果表明：本方法溴菌腈回收率60%～89.93%、氟吡菌酰胺回收率74.0%～91.90%，亚胺唑回收率63.4%～102.2%。不同浓度的加标回收率满足GB/T27404‑2008《国家食品理化检测‑实验室质量控制规范》的相关要求。4、精密度试验为验证方法的实用性，人为对沃柑产品喷施含有溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑成分的农药，并按照GB2763《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》进行采样及制备样品，称取10g试验样品，加入10mL乙酸乙酯，按（四）1、（四）2前处理，按（四）3测定溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑含量，平行检测8次，考查本方法的精密度，试验结果见表7。表7精密度试验结果溴菌腈氟吡菌酰胺亚胺唑1（mg/kg)0.19050.46060.16732（mg/kg)0.19240.43980.16483（mg/kg)0.19570.48970.17304（mg/kg)0.20140.45690.16695（mg/kg)0.20740.51300.16126（mg/kg)0.21920.50180.15457（mg/kg)0.20950.51530.15758（mg/kg)0.21180.50100.1568平均值（mg/kg)0.20350.48480.1627标准偏差（mg/kg)0.01020.02850.0063%RSD5.015.883.90结果表明：溴菌腈的相对标准偏差为5.01%、氟吡菌酰胺的相对标准偏差为5.88%，亚胺唑的相对标准偏差为3.90%，方法重现性好，精密度高。本方法各化合物的相对标准偏差满足GB/T27404‑2008《国家食品理化检测‑实验室质量控制规范》的相关要求。5方法的准确度（机构间比对）选取11个沃柑样品，按照试验方法进行测定，选择3家实验室3台不同仪器进行比对测定，测定结果见表8。表8沃柑中溴菌腈、氟吡菌酰胺、亚胺唑农药及其代谢物残留量测定样品名称广西博测检测技术服务有限公司Agilent

气质联用仪7890B-5977B农业农村部亚热带果品蔬菜质量监督检验测试中心赛默飞气相色谱-质谱联用仪TSQ9000国家林业局林产品质量检验检测中心（南宁）岛津GCMS-TQ8050NX溴菌睛(mg/kg)氟吡菌酰胺(mg/kg)亚胺唑(mg/kg)溴菌睛(mg/kg)氟吡菌酰胺(mg/kg)亚胺唑(mg/kg)溴菌睛(mg/kg)氟吡菌酰胺(mg/kg)亚胺唑(mg/kg)沃柑22010.220.390.120.220.390.110.270.390.11沃柑2202未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出沃柑2203未检出未检出未检出未检出未检