药物分析：第三章 药物的杂质检查

药物分析：第三章药物的杂质检查杂质：影响药物纯度的物质控制杂质原因：由于药物中的杂质无治疗作用，或者影响药物的稳定性和疗效，甚至危害人们的健康，因此，必须对药物中的杂质进行检查，以保证药品质量和临床用药安全、有效，同时也为生产和流通过程的药品质量管理提供依据。如果药物中所含的杂质超过质量标准规定的纯度要求，就有可能使药物的外观性状、物理常数发生变化，甚至影响药物的稳定性，使活性降低、毒副作用增加。杂质的种类来源分：一般杂质-多种药物中普遍存在；特殊杂质-特定药物在生产、贮存过程中引入的杂质。毒性分：有毒杂质；信号杂质-无毒，含量多少可以反映药物的纯度。理化性质分：有机杂质；无机杂质；残留溶剂杂质限度的设定：MaximumDailyDoseReportingThresholdsIdentificationThresholdsQuantificationThresholds<2g/day0.050.10%or1.0mgperdayintake0.15%or1.0mgperdayintake>2g/day0.03杂质的限量杂质限量(%)=（杂质最大允许量／供试品量）*100%对杂质限量的控制方法：限量检查法(limittest)；对杂质进行定量测定含量限量L(%)=（标准溶液的浓度C*标准溶液的体积V/供试品量S）*100%一般杂质的检查注意操作的平行性。氯化物的检查Cl-+Ag+→AgCl↓(白色)原理：药物中的微量氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，判定供试品中的氯化物是否符合限量规定。方法：样品溶解/标准氯化钠溶液(10μgCl/ml)，50mL纳氏比色管，+稀HNO310mL+水至40mL+AgNO3试液1.0mL+水至50mL,暗处放置5min，比较。（氯化物浓度以50mL中含50～80μg的Cl为宜。）去除颜色干扰：内消色法（倍量法）；外消色法：如KMnO4中氧化物的检查，可先和乙醇适量还原后再依法检查。注意事项：（1）比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察（2）平行操作原则（3）若供试品有颜色，需经处理后方可检查。重金属检查法以铅的限量表示重金属限度。第一法：硫代乙酰胺法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2SPb2++H2S(pH3.5)→PbS↓+2H+原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判定供试品中重金属是否符合限量规定。方法：样品按规定法制成供试液25mL/标准铅溶液(10μgPb/ml)+醋酸盐缓冲液(pH3.5)2mL，加水至25mL，25mL纳氏比色管，+硫代乙酰胺试液2mL，摇匀，放置，比较。注意事项：供试品若有色，在加硫代乙酰胺试液前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰胺试液比色。第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物第三法：硫化钠法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。第四法：微孔滤膜法适用于重金属限量低（含重金属杂质2～5μg）的药物。砷盐检查法——古蔡氏法：原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量的砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。标准砷斑的制备精密标准砷溶液(1μgAs/mL)2mL，置锥形瓶中，+盐酸5mL与水21mL，+碘化钾试液5mL、酸性氯化亚锡试液5滴，室温放置10min，+锌粒2g，立即安装导气管，将锥形瓶置25～40℃水浴中，反应45min，取出溴化汞试纸，即得。样品砷斑的制备如标准的制备，按各品种项下规定方法制成供试品溶液。五价砷也能被锌还原，但速度较慢，故加入KI和氯化亚锡将其还原成三价砷；KI和氯化亚锡还能抑制锑化氢的生成，锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑；硫化氢能与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，导气管中用醋酸铅棉花吸收硫化氢，又使砷化氢以适宜的速度通过。注意事项：供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等在酸性溶液中生成HS2或SO2，应先加硝酸使氧化成硫酸盐；供试品为铁盐，消耗还原剂，先加酸性氯化亚锡试液使高铁离子还原为低铁离子；环状结构的有机药物要先进行有机破坏（碱和酸）；含锑药物，锑化氢干扰砷盐的检出（SbH3+HgBr2→SbH2(HgBr)+HBr），改用白田道夫(Betterdorff)法干燥失重测定法主要检查药物中的水分及其他挥发性物质。恒重-两次称量差不超过0.3mg。常压恒温干燥法：除另有规定外，在105℃干燥至恒重，干燥失重=（称量瓶与加入样品重-恒重后称量瓶与样品重）/样品重*100%减压干燥法与恒温减压干燥法：适用于熔点低或受热分解的供试品。干燥剂干燥法：适用于受热分解或易升华的供试品。常用干燥剂：硅胶、硫酸、和五氧化二磷等。热分析法：在程序控制温度下测量物质的理化性质与温度关系的一类技术。热重分析、差热分析、差示扫描热分析。差热分析(DTA)：是在程序控制温度下，测量试样与参比物（一种在测量温度范围内不发生任何热效应的物质）之间的温度差与温度△T关系的一种技术。有机溶剂残留检查方式：《中国药典》规定残留溶剂的检查方法为GC，可采用填充柱，也可采用毛细管柱，检测器通常使用火焰离子化检测器（FID），对含卤素元素的残留溶剂如三氯甲烷等，采用ECD检测器，易得到高的灵敏度。采用FID时需加尾吹气，因为毛细管柱的柱内载气流量太低，不能满足检测器的最佳操作条件，所以使用毛细管柱时要采用辅助气，即在毛细管柱后增加一路载气直接进入检测器，就可保证检测器在高灵敏度状态下工作，尾吹气的另一个重要作用是消除检测器死体积的柱外效应。内标法测定时，对照品连续进样5次，待测物与内标物峰面积比的RSD应不大于5%；外标法测定，得待测物峰面积RSD应不大于10%。通常对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。毛细管柱顶空进样等温法（第一法）：适用于被检查的有机溶剂数量不多，并且极性差异较小的情况。顶空平衡时间一般30～45min。毛细管柱顶空进样程序升温法（第二法）：适用于被检查的有机溶剂数量较多，且极性差异较大。薄层色谱法对检测方法进行系统适用性试验：使检测灵敏度、比移值、分离效能符合规定。常用方法：（1）杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备得到杂质对照品的情况；（2）供试品溶液自身稀释对照法：适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况，该法仅限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的情况下使用；（3）杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用：（4）对照药物法：当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照品中所含待检杂质需限量要求，且稳定性好。高效液相色谱法检测杂质方法