皖西高中教学联盟2025届高考生物考前最后一卷预测卷含解析

皖西高中教学联盟2025届高考生物考前最后一卷预测卷注意事项1．考生要认真填写考场号和座位序号。2．试题所有答案必须填涂或书写在答题卡上，在试卷上作答无效。第一部分必须用2B铅笔作答；第二部分必须用黑色字迹的签字笔作答。3．考试结束后，考生须将试卷和答题卡放在桌面上，待监考员收回。一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1．某植物细胞能利用质子泵（转运H+的载体）把胞内的H+泵出，使胞外H+浓度高于胞内；H+-蔗糖载体能够依靠膜两侧的H+浓度差把H+和蔗糖分子一同运入细胞（如图）。下列说法正确的是（）A．H+进出该植物细胞的跨膜运输方式相同B．H+-蔗糖载体跨膜运输物质时没有特异性C．O2浓度对该细胞运输蔗糖的速率无影响D．H+-蔗糖载体能够将蔗糖逆浓度梯度运输2．下列有关人体内环境稳态及其调节的叙述，正确的是（）A．癌胚抗原和甲胎蛋白会出现在正常人的内环境中B．人手和脚上出现的“水泡”中的液体主要是细胞内液C．人体的脑组织细胞内液中O2与与CO2的比值大于组织液中的D．人体的血浆中不可能出现淀粉、蔗糖及果糖等物质3．大肠杆菌是人和动物肠道寄生菌，在一定条件下会引起胃肠道等局部组织感染。检验水样中大肠杆菌数目是否符合生活饮用水卫生标准，常用滤膜法测定，其操作流程如图。大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝（EMB培养基的指示剂）反应，菌落呈黑色。下列对实验操作的分析，错误的是（）A．测定前，滤杯、滤膜和滤瓶均可用干热灭菌法灭菌处理B．过滤操作要在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染C．将过滤完的滤膜紧贴在EMB培养基上，完成大肠杆菌的接种操作D．EMB培养基属于选择培养基，只有大肠杆菌能正常生长并形成黑色菌落4．图1是裸露岩石上开始的群落演替过程，图2表示群落演替过程中植物的种数、植物的个体数及岩石体积的变化。下列叙述正确的是A．图1所示的群落演替过程属于次生演替B．形成顶极群落后，群落在水平方向上表现出垂直结构C．演替过程中植物种类丰富度逐渐增加并趋向稳态D．演替过程中植物的种数增加导致岩石体积下降5．下列有关HIV病毒和艾滋病的叙述，错误的是（）A．每个HIV病毒含有2条RNA分子B．HIV感染人群比健康人群更易患甲型H1N1流感C．HIV侵入人体后可以识别并结合脑细胞表面的受体D．没有感染过HIV的人，体内不存在与之相匹配的受体6．金鱼草中红花宽叶与白花窄叶杂交，得到的F1自交，F2中有10株红花宽叶，20株红花中等叶，10株红花窄叶，20株粉红花宽叶，40株粉红花中等叶，20株粉红花窄叶，10株白花宽叶，20株白花中等叶以及10株白花窄叶。下列叙述错误的是（）A．两对性状由两对等位基因控制，遵循自由组合定律B．F2中属于纯合体的是红花宽叶、红花窄叶、白花宽叶、白花窄叶C．若亲本为纯合的红花窄叶和白花宽叶，F2也可得到与上述相同的结果D．F2中红花中等叶与粉红花窄叶杂交，F3中白花中等叶占1/47．下列有关基因工程的说法正确的是（）A．如果某种生物的cDNA文库中的某个基因与该生物的基因组文库中的某个基因控制的性状相同，则这两个基因的结构也完全相同B．一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止密码子和标记基因C．目的基因进入受体细胞，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化D．将目的基因导入植物细胞和动物细胞的常用方法是显微注射法8．（10分）豌豆的高茎对矮茎为显性，受一对等位基因M/m控制。M基因控制合成的酶能促进赤霉素的合成，与此酶相比，m基因控制合成的酶只在第229位由丙氨酸（GCU、GCC、GCA、GCG）变为苏氨酸（ACU、ACC、ACA、ACG），失去了原有的酶活性。下列叙述正确的是（）A．M基因突变为m基因是因为G—C替换为A—TB．M基因突变为m基因后导致三个密码子发生改变C．赤霉素是M基因的表达产物，能促进豌豆茎的生长D．在杂合体Mm个体中，M基因表达，m基因不表达二、非选择题9．（10分）科学家采用转基因技术和克隆技术相结合的方法培育转基因克隆羊，以便通过膀胱生物反应器(膀胱上皮细胞可以合成所需蛋白质并分泌到尿液中)生产人的白蛋白。与乳腺生物反应器相比，膀胱生物反应器具有多种优点，如没有性别上的要求、提取时间长、提取方便和产量高等。其技术流程如图所示。（1）过程①为基因工程的核心步骤，即___________。导入成纤维细胞的常用方法是________。（2）为使人白蛋白基因能在转基因羊的膀胱上皮细胞中特异性表达，构建A时，应该在目的基因前插入________________。（3）B为____________，②表示的技术的原理是_____________________________。（4）C的发育阶段通常为______________。图中_________(填图中序号)过程是胚胎工程技术的“最后一道工序”。（5）C能在代孕母羊体内存活的生理学基础是______________________。10．（14分）草莓比较耐阴，若将其栽种在光照强度较弱的温室大棚里可能更加适宜生长。某生物兴趣小组研究了遮光处理对草莓叶片光合作用的影响。材料用具：二叶期草莓幼苗若干、遮阳网(网内光强为自然光强1/3左右)、光合分析测定仪等。实验步骤与分析：选取生长状况相似的草莓幼苗若干，均分为对照组和实验组，实验组用遮阳网进行处理。将两组草莓幼苗在相同且适宜条件下培养至植株长出6片叶左右，测得其净光合速率如图甲所示。（1）据图甲分析，实验组有机物累积总量显著低于对照组，与预期不符，判断依据为__________。（2）有同学推测遮阴可能影响光合作用的__________反应，并据此继续进行实验得到图乙的结果。由图乙可知，实验组利用CO2的效率降低，可能的原因是遮阴使叶片温度降低，导致__________。（3）某同学推测，适当遮光可能导致叶绿素含量增加，以适应弱光环境。请设计一个简单的实验验证该同学的推测是否正确，简单的写出实验思路：__________。（4）综上所述，欲提高草莓的光合速率，可改变__________(填“CO2浓度”或“遮光比例”)再作进一步研究。11．（14分）萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。①这是一种定点的_________技术。②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。12．进食后，葡萄糖进入胰岛B细胞所引起的胰岛B细胞和组织细胞的一系列生理反应，如下图所示。（1）进食后，图中ATP/ADP的比值上升原因是____。（2）简述胰岛B细胞内ATP/ADP的比值上升促进胰岛素分泌的过程________。（3）结合图示信息，解释胰岛素所具有的“能促进组织细胞加速摄取、利用和储存葡萄糖，从而使血糖水平降低”功能：________。（4）为研究血浆维生素D3（用VD3表示）与糖尿病的关系，科研人员根据血浆VD3的含量将受试者分为3组，跟踪统计4年后的糖尿病发病率，结果如表。组别第一组第二组第三组血浆VD3(ng/mL)|VD3<18.618.6≤VD3<3131≤VD3<50糖尿病的发病率(%)12.44.60.0进一步的研究发现：当胰岛B细胞内Ca2+达到一定浓度后，胰岛素开始释放。请结合上图信息推测血浆VD3在此过程中的相关功能可能是______。

参考答案一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1、D【解析】

载体蛋白能够与特异性溶质结合，通过自身构象的变化，将与它结合的溶质转移到膜的另一侧。载体蛋白既参与被动的物质运输，也参与主动的物质运输。载体蛋白的运输具有专一性和饱和性，专一性指一种载体蛋白在细胞内外物质进行运输时只能对应地运送唯一的一种或性质非常相近的一类物质。【详解】A、质子泵（转运H+的载体）把胞内的H+泵出，使胞外H+浓度高于胞内，因此H+出该植物细胞为主动运输，进入该植物细胞为协助扩散，进出跨膜运输方式不同，A错误；B、H+-蔗糖载体跨膜运输物质时也有特异性，不能运输其它的物质，B错误；C、质子泵（转运H+的载体）把胞内的H+泵出，为主动运输需要能量，与O2浓度有关，而蔗糖运输依赖于H+的势能差（浓度差），因此O2浓度对该细胞运输蔗糖的速率有影响，C错误；D、H+-蔗糖载体能够将蔗糖逆浓度梯度运输，H+的势能差可以为其提供能量，D正确。故选D。2、A【解析】

内环境也即细胞外液，包括血浆、淋巴和组织液；水肿是组织液增多，减少来，促进走，会消除水肿；O2与CO2过膜的方式是自由扩散。【详解】A.癌胚抗原和甲胎蛋白是机体合成的两种糖蛋白，存在于人体血清等内环境中，A正确；B.人手和脚上出现的“水泡”中的液体主要是组织液，B错误；C.人体的脑组织细胞内液中O2与CO2的比值小于组织液中的才有利于气体交换，C错误；D.果糖属于单糖，人体的血浆中可能出现果糖，但不可能出现淀粉、蔗糖，D错误。故选A。【点睛】明确内环境的成分是解答本题的关键!3、D【解析】

大肠杆菌的代谢能与伊红美蓝（EMB培养基的指示剂）反应，菌落呈黑色，因此可以制备EMB培养基来鉴别大肠杆菌。在实验室进行微生物培养的时候都需要进行严格的无菌操作，尽量减少杂菌的污染。【详解】A、干热灭菌法适用于对滤杯、滤膜和滤瓶进行灭菌，防止杂菌的污染，A正确；B、在酒精灯火焰附近操作可以减少空气中的杂菌污染，B正确；C、由于过滤完后细菌粘附在滤膜上，将滤膜紧贴在EMB培养基上可以将粘附的菌种接种在培养基上，C正确；D、EMB培养基属于鉴别培养基，没有选择作用，D错误；故选D。4、C【解析】

随时间的推移，一个群落被另一个群落代替的过程，叫做演替。演替的种类有初生演替和次生演替两种。初生演替：是指一个从来没有被植物覆盖的地面，或者是原来存在过植被，但是被彻底消灭了的地方发生的演替；次生演替：原来有的植被虽然已经不存在，但是原来有的土壤基本保留，甚至还保留有植物的种子和其他繁殖体的地方发生的演替。分析图示，图1表示裸露岩石上开始的群落演替过程，属于初生演替。图2表示群落演替过程中植物的种数、植物的个体数及岩石体积的变化，随着植物的种数增加，岩石体积增加。【详解】A、图1是裸露岩石上开始的群落演替过程，属于初生演替，A错误；B、形成顶极群落后，群落在垂直方向上有分层现象，表现出垂直结构，B错误；C、看图可知：演替过程中植物种类丰富度逐渐增加并趋向稳定，C正确；D、题图显示，演替过程中植物的种数增加时，岩石的体积增大，D错误。故选C。5、D【解析】

艾滋病的致病原理：HIV病毒进入人体后，与人体的T淋巴细胞结合，破坏T淋巴细胞，使免疫调节受到抑制，使人的免疫系统瘫痪，最后使人因无法抵抗其他细菌、病毒的入侵，而患病死亡。【详解】A、HIV体内含有2条RNA，A正确；B、HIV感染者的免疫系统被破坏，更易感染其他病原体，B正确；C、HIV可以攻击脑细胞，因此HIV可以识别并结合脑细胞表面的受体，C正确；D、没有感染过HIV的人体内仍然存在对抗HIV的免疫应答，故体内存在与之相匹配的受体，D错误。故选D。【点睛】本题结合HIV病毒和艾滋病，考查人体免疫系统的作用，要求识记免疫系统的组成和功能，掌握体液免疫和细胞免疫的具体过程。6、D【解析】

由题意可知，F2中红花:粉红花:白花=1:2:1，宽叶:中等叶:窄叶=1:2:1。【详解】A、根据题意，金鱼草的两对性状由两对等位基因控制，为不完全显性，遗传遵循自由组合定律，A正确；B、F2中表现有粉红花、中等叶为杂合体，所以纯合体为红花宽叶、红花窄叶、白花宽叶、白花窄叶，B正确；C、根据F2的表型比可推出亲本是纯合的红花宽叶与白花窄叶，也可以是纯合的红花窄叶和白花宽叶，C正确；D、F2中红花中等叶与粉红花窄叶杂交，F3中的表现型有粉红花中等叶、粉红花窄叶、红花中等叶、红花窄叶，无白花中等叶，D错误。故选D。【点睛】本题中需要考生根据1:2:1的分离比推出控制这两对相对性状的基因均为不完全显性，且根据两对相对性状的表现型组合推出两对性状符合基因的自由组合定律，再进行相关的分析。7、C【解析】

基因工程技术的基本步骤：(1)目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；(3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。【详解】A、如果某种生物的cDNA文库中的某个基因与该生物的基因组文库中的某个基因控制的性状相同，但这两个基因的结构不完全相同，因为基因组文库中的基因中含有内含子、启动子等结构，而cDNA文库中的基因中不含这些结构，A错误；B、一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子和标记基因，终止密码子位于mRNA上，B错误；C、目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化，C正确；D、将目的基因导入植物细胞的常用方法是农杆菌转化法，导入动物细胞的常用方法是显微注射法，D错误；故选C。8、A【解析】

1、基因突变是指基因中发生碱基对的替换、增添和缺失，而引起的基因结构改变。

2、基因对性状的控制方式：①基因通过控制酶的合成来影响细胞代谢，进而间接控制生物的性状，如白化病、豌豆的粒形；②基因通过控制蛋白质分子结构来直接控制性状，如镰刀形细胞贫血症、囊性纤维病。【详解】A、分析丙氨酸(GCU、GCC、GCA、GCG)和苏氨酸(ACU、ACC、ACA、ACG)的密码子的区别可以看出，密码子中G→A，也就是M基因相应位置中的G—C替换为A—T，A正确；B、由A项分析可知，M基因突变为m基因后只导致1个密码子发生改变，B错误；C、赤霉素不是M基因的表达产物，M基因的表达产物为控制赤霉素合成的酶，C错误；D、在杂合体Mm个体中，M基因和m基因均有表达产物，只是m表达的酶失去了原有的活性，D错误。故选A。【点睛】本题主要考查基因突变和基因对性状的控制，意在考查考生对基因的表达和基因突变的相关知识的理解和把握知识间内在联系的能力。二、非选择题9、构建基因表达载体显微注射法能在膀胱上皮细胞中特异性表达的基因的启动子减数第二次分裂中期的卵母细胞动物体细胞核具有全能性桑椹胚或囊胚③受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应（为胚胎在受体内的存活提供了可能）【解析】

据图分析，图中过程①表示构建基因表达载体的过程，A表示基因表达载体；过程②表示核移植技术，B表示减数第二次分裂中期的卵母细胞；过程③表示胚胎移植，C表示早期胚胎。【详解】（1）根据以上分析已知，图中过程①表示构建基因表达载体；将目的基因导入成纤维细胞（动物细胞）常用显微注射法。（2）基因工程中，为使目的基因在相应细胞中表达，在构建基因表达载体时，应在目的基因前加入相应受体细胞中的启动子，因此为使人白蛋白基因能在转基因羊的膀胱上皮细胞中特异性表达，构建A时，应该在目的基因前插入膀胱上皮细胞中特异性表达的启动子。（3）B要去核并构建重组细胞，因此B为处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞；②表示的技术是体细胞核移植，其原理是动物细胞核具有全能性。（4）C为能移植的胚胎，一般为桑椹胚或囊胚；胚胎工程技术的“最后一道工序”是胚胎移植，即图中③。（5）C早期胚胎能在受体子宫内存活的生理学基础是受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。【点睛】解答本题的关键是掌握基因工程的基本步骤、核移植技术、胚胎移植技术等知识点，能够分析题图并准确判断图中各个数字代表的过程的名称以及各个字母代表的结构的名称。10、在实验时间内，实验组吸收的CO2总量少于对照组暗光合作用相关酶的活性降低提取并用纸层析法分离遮光和未遮光情况下的草莓等量叶片中的色素，观察并比较叶绿素色素带的宽度遮光比例【解析】

由题意呈现的实验目的（研究遮光处理对草莓叶片光合作用的影响）与反映实验结果的曲线图和柱形图为切入点，明辨实验的自变量和因变量，进而对比分析图甲中两曲线的变化趋势、图乙中实验组和对照组的固定CO2的效率和CO2的补偿点的差异，并围绕“影响光合作用的环境因素、绿叶中色素的提取和分离”的相关知识，对各问题情境进行分析解答。【详解】（1）对比分析对照组和遮荫组的曲线变化趋势可推知，实验组（遮荫组）有机物累积总量显著低于对照组的原因可能是：在实验时间内，遮阴组吸收的CO2总量少于对照组。（2）图乙显示，实验组（遮荫组）固定CO2的效率明显低于对照组，而CO2的补偿点却高于对照组，说明遮阴使实验组的CO2的利用率降低，可能影响光合作用的暗反应，究其原因是：遮阴使叶片温度降低，导致与光合作用相关的酶的活性降低，进而引起实验组利用CO2的效率降低。（3）欲设计一个简单的实验验证适当遮光可能导致叶绿素含量增加、以适应弱光环境的推测是否正确，其实验思路为：提取并用纸层析法分离遮光和未遮光情况下的草莓等量叶片的色素，观察并比较叶绿素色素带的宽度。（4）综上分析，左右自然光强，降低了草莓叶片利用CO2的效率，因此欲提高草莓的光合速率，可改变遮光比例再作进一步研究。【点睛】本题以反映“遮光处理对草莓叶片光合作用的影响”的实验结果的曲线图与柱形图为载体，考查学生对影响光合作用的环境因素等相关知识的识记和理解能力，以及具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理的能力。11、限制酶和DNA连接CaCl2基因突变引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）抗原-抗体杂交抑菌圈对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2、“分子缝合针”——DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3、PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2、常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。【详解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√（3）根据实