新编实验大肠杆菌的培养和分离

病毒细菌放线菌真菌原生生物微生物新编实验大肠杆菌的培养和分离第1页单细胞原核，分支状菌丝（基内~、气生~）放线菌新编实验大肠杆菌的培养和分离第2页单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见，含有一定形态结构子细胞群体（种群）菌落是判定菌种主要依据菌落新编实验大肠杆菌的培养和分离第3页芽孢：细菌休眠体芽孢新编实验大肠杆菌的培养和分离第4页结构异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-)物质(元素)组成：CHONPS…大肠杆菌新编实验大肠杆菌的培养和分离第5页按照微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质。培养基类型液体培养基固体培养基凝固剂琼脂扩大培养，工业生产分离纯化，判定菌种，计数，保藏新编实验大肠杆菌的培养和分离第6页成份作用主要起源碳源主要作能源物质无机碳(CO2)或有机碳(糖类)氮源合成含N类化合物N2，NH3，铵，硝酸盐尿素，牛肉膏，蛋白胨无机盐调整渗透压等水生长因子调整促生长维生素，AA，碱基等培养基成份新编实验大肠杆菌的培养和分离第7页消毒：较为温和方法，如酒精

注：消毒不能杀死芽孢灭菌：强烈，全部，完全无菌灭菌消毒技术是微生物相关工作中最普通也是最主要技术。无菌技术新编实验大肠杆菌的培养和分离第8页1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（牛奶）3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒（空气）(1)惯用消毒方法：新编实验大肠杆菌的培养和分离第9页(2)惯用灭菌方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h3、高压蒸汽灭菌：1kg/cm2、121℃下维持15分.新编实验大肠杆菌的培养和分离第10页称量-计算-溶化-灭菌-倒平板灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min步骤一：制备LB培养基(液)新编实验大肠杆菌的培养和分离第11页倒平板步骤一：制备LB培养基(液)新编实验大肠杆菌的培养和分离第12页紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜使锥形瓶瓶口快速经过火焰左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置倒平板过程总结新编实验大肠杆菌的培养和分离第13页从大肠杆菌斜面→锥形瓶中液体培养基接种好后在37度摇床振荡培养12h工具：接种环在接种前要灭菌步骤二：大肠杆菌扩大培养新编实验大肠杆菌的培养和分离第14页分离方法：平板划线分离法原理：经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后，能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体，这就是菌落。只能蘸一次、再次划线从上次末端开始、划好倒置培养1-2天、划线末端出现不连续单个菌落步骤三：大肠杆菌分离纯化新编实验大肠杆菌的培养和分离第15页

平板划线接种灼烧接种环冷却

划线（第一区域）蘸取菌液灼烧接种环冷却

划线（第二区域）灼烧接种环冷却

划线（第三区域）灼烧接种环冷却

划线（第四区域）灼烧接种环冷却

划线（第五区域）灼烧接种环平板倒置放置培养新编实验大肠杆菌的培养和分离第16页新编实验大肠杆菌的培养和分离第17页第一区域第二区域第三区域第四区域第五区域新编实验大肠杆菌的培养和分离第18页新编实验大肠杆菌的培养和分离第19页新编实验大肠杆菌的培养和分离第20页

1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者新编实验大肠杆菌的培养和分离第21页2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总