多肽药物的含量测定方法专家讲座

肽类药品含量测定方法背景：多肽类药品及其主要优势人体生长和发育都离不开多肽，多肽是调整系统功效和细胞生长基础。多肽类药品作为药品开发主要方向，它包含各种类型，常见多肽类药品有以下几个.多肽类疫苗：多肽类疫苗研制为人类攻克肝炎、艾滋病等疾病带来了希望。.抗肿瘤多肽类药品：肿瘤危害人类生存，其产生是多方面原因共同作用结果，但归根到底是癌基因表示问题。多肽类抗癌药品因为其能够成为肿瘤基因表示时调控因子，因而成为了抗癌药品研究新希望。.抗病毒类多肽药品：普通来说，病毒感染细胞过程包含以下几个主要阶段：吸附、自我复制、重新组合、释放病毒等。。抗病毒多肽通常作用于病毒吸附和病毒复制两个阶段，经过与宿主细胞特异性结合或者病毒蛋白酶结合来发挥作用。多肽药物的含量测定方法专家讲座第1页一、酸碱滴定法示例：苯酪酞测定测定方法：取本品约0.5g精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液呈中性）60ml，振摇，溶解后加酚酞指示液数滴，用氢氧化钠滴定（0.1mol/L)，即可。多肽药物的含量测定方法专家讲座第2页二、

紫外分度光度法

示例：五肽胃泌素含量测定五肽胃泌素为白色或类白色粉末。本品能促进胃酸、胃蛋白酶及内因子分泌，其促胃酸分泌作用相当于内源性胃泌素1/4，作用可连续10~40分钟。临床上主要用于胃酸分泌机能检验。多肽药物的含量测定方法专家讲座第3页方法原理：供试品加0.01mol/L氨溶液定量稀释，制成供试液，置紫外可见分光光度计,于280nm波优点测定吸收度，计算出其含量。试剂：氨溶液（0.01mol/L）标准品：E1%1cm

为70计算仪器设备：紫外可见分光光度计注：分光光度法应以配制供试品同批溶剂为对照，采取1cm石英吸收池。以吸收度最大波长作为测定波长，普通供试品吸收度读数，以在0.3-0.7之间误差较小。仪器狭缝波带宽度应小于供试品吸收带半宽度，不然测得吸收度偏低。狭缝宽度选择，应以降低狭缝宽度时供试品吸收度不再增加为准。因为吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，所以测定供试品吸收度后应减去空白读数，再计算含量。多肽药物的含量测定方法专家讲座第4页三、效价测定法实例（1）：抑肽酶效价测定抑肽酶(Trasylol，别名：抑胰肽酶、屈来密多)能抑制胰蛋白酶及糜蛋白酶，阻止胰脏中其它活性蛋白酶原激活及胰蛋白酶原本身激活。临床用于预防和治疗急性胰腺炎、纤维蛋白溶解引发出血及弥漫性血管内凝血。还可用于抗休克治疗。在腹腔手术后，直接注入腹腔可预防肠粘连。抑肽酶经过酶上丝氨酸活性部分，形成抑肽酶-蛋白酶复合物而到达抑制作用。然而与不一样蛋白酶结合，显示出不一样离解常数。与胰蛋白酶结合最牢靠．与人体纤溶酶结合不很牢靠。多肽药物的含量测定方法专家讲座第5页（1）底物溶液制备(2)胰蛋白酶稀释溶液制备精密量取胰蛋白酶溶液1ml，用硼砂－氯化钙缓冲液（pH8.0）稀释成20ml，室温放置10min，置于冰浴中。取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐171.3mg，加水溶解并稀释至25ml。临用时配制。胰蛋白酶溶液制备取胰蛋白酶对照品适量，精密称定，加盐酸滴定液（0.001mol/L）溶解并制成每1ml中约含0.8单位（每1ml中约含1mg）溶液，临用时配制并置于冰浴中。(3)供试品溶液制备取本品适量，精密称定，加硼砂一氯化钙缓冲液（pH8.0）溶解并制成每1ml中约含1.67单位（每1ml中约含0.6mg）溶液，精密量取0.5ml与胰蛋白酶溶液2ml，再用硼砂一氯化钙缓冲液（pH8.0）稀释成20ml，反应10分钟，置冰浴中（2小时内使用）。多肽药物的含量测定方法专家讲座第6页(4)测定法取硼砂－氯化钙缓冲液（pH8.0）9.0ml与底物溶液1.0ml，置25ml烧杯中，于25℃±0.5℃恒温水浴中放置3～5分钟，在搅拌下滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）调整pH值为8.0，精密加入供试品溶液（经25℃保温3～5分钟）1ml，并马上计时，用1ml微量滴定管以氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定释放出酸，使溶液pH值一直保持在7.9～8.1。每隔60秒读取pH值恰为8.0时所消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）体积（ml），共6分钟。另精密量取胰蛋白酶稀释溶液1ml，按上法操作，作为对照（重复一次）。以时间为横坐标，消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）为纵坐标作图，应为一条直线。供试品和对照两条直线应基本重合，求出每秒钟消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）体积（ml），按下式计算。每1mg抑肽酶效价（单位）式中4000为系数；W为抑肽酶制成每1ml中约含1.67单位时酶量，mg；n1为对照测定时每秒钟消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）体积，ml；n2为供试品溶液每秒钟消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）体积，ml；2为供试品溶液中所加入胰蛋白酶量为对照测定时2倍；f为氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）校正因子。多肽药物的含量测定方法专家讲座第7页效价单位定义能抑制一个胰蛋白酶单位[每秒钟能水解1μmolN-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）为一个胰蛋白酶单位（microkatal）]活力称为一个抑肽酶活力单位（EPU）。每1EPU抑肽酶相当于1800KIU。注意事项：（1）本试验测定原理：在一定条件下（pH8.0，25℃），胰蛋白酶可使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯水解为N-苯甲酰-L-精氨酸，使溶液pH下降，当加入氢氧化钠滴定后，使溶液pH又回到8.0，水解继续进行。（2）当胰蛋白酶中加入抑肽酶后，使50%胰蛋白酶活性被抑制，剩下胰蛋白酶继续与底物进行水解反应，用氢氧化钠滴定释放出酸，使pH一直维持7.9~8.0，在一定时间内，依据依据样品消耗氢氧化钠（0.1mol/L）体积（ml)算出活力单位。多肽药物的含量测定方法专家讲座第8页实例（2）杆菌肽效价测定：

利用杆菌肽能够抑制微生物生长特征，进行