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文档简介

Attune流式细胞仪|Bigfoot全光谱分选仪|明星样品制备试剂18,000+种流式抗体|80+种荧光染料|PrimeFlow流式RNA分析invitrogen2流式细胞术能够从单细胞水平同时分析细胞样本中的基因入地了解异质性细胞群的详细信息。无论进行细胞亚群鉴完成流式实验通常需要将多种抗体搭配成多色流式实验方案。这本流式细胞术整体解决方案手册不仅介绍了•炎症•肿瘤免疫•神经炎症•基因编辑•微生物学确定免疫分型抗体活细胞死细胞细胞功能检测选择缓冲液实验对照上机检测免疫细胞通常需要刺激活化后才能快速增殖或分化为成熟•Invitrogen™eBioscience™细胞刺激试剂盒CD3receptorCD28/CD3TCR介导的激活和共刺激PMAConA丝裂原介导的白细胞激活IonomycinandPMA激活并刺激白细胞CD14激活白细胞CSFCSF-1RM-CSF巨噬细胞和单核细胞的分化和存活刺激组未刺激组刺激组未刺激组thermofi/flow-assays4•转录因子Step1:输入您所需的抗体站上流式抗体的搜索结果中包含内部抗体验证*测试数据和Step1:输入您所需的抗体•荧光染料亮度Step2:根据您的应用,选择InvitrogeneBioscience抗体300400500600700800900300400500600700800900图5.正常人外周血流式分析结果。分别用Anti-humanCD3抗体(左图为Invitrogen™eBioscience™APC-eFluor™780标记;右图为InvitrogeneBioscienceeFluor450标记)和Anti-humanCD56-APC抗体染色正常人外周血样本后,设门分析淋巴细胞。流式抗体,请访问thermofi/flowantibodiesInvitrogen荧光染料天然染料•性价比高•部分染料的亮度很低•以其激发光波长命名•覆盖整个光谱的稳定染料•可用于流式细胞术和成像实验•用于流式细胞术天然染料•性价比高•部分染料的亮度很高偶联染料•供体染料与受体染料的发射光谱不APC-Cyanine5APC-Cyanine7聚合物染料SuperBright系列染料•荧光溢漏更少•使用两种或两种以上SB染料时需加入InvitrogeneBioscienceSuperBrightCompleteStainingBuffer(货SuperBright436SuperBright600SuperBright645聚合物染料BrilliantViolet和Br•使用两种或两种以上BUV染料时需加•发射光谱窄Qdot605Qdot655Qdot705Qdot800DNA结构创新染料•独特的光谱特征•以其激发光和发射光波长命名•在使用NovaFluor染料标记细胞时,使用InvitrogenCellB)封闭非特异性标记,减少背景噪音NovaFluorBlue660-4了解更多赛默飞荧光染料信息,请访问thermofisherStepStep1:Step3:选择荧光染料Step2:输入抗原指标Step5:生成实验方案Step4:图6.InvitrogenPanelBuilder简单5步轻松设计流式配色方案400-820-8982/800-820-8982LifeScience-CNTS@thermofi6CellBlox封闭缓冲液的作用是避免NovaFluor染料与部分细细胞这些细胞之间的非特异性结合,从而降低背景荧光信NovaFluor流式荧光染料的优势包括:表2.NovaFluor流式荧光染料及其他染料详细信息列表*49648849448850953048849448849458548895094882,343305094883,3845096654885096654884946904885,2264826954884,9925684965906634965406903,2994966506606409,8446406856406396403,301363639640636636*光谱流式数据均由5激光Cytek™Aurora™光谱流式细胞仪上生成,并使用SpectroFlo™软件分立即选购NovaFluor染料抗体,请访问thermofi/novafluor-dyes8*eBioscience流式染色缓冲液(货号00-4222)eBioscience细胞内固定破膜剂套装(货号88-8824)eBioscienceFoxp3/转录00-5523)细胞增殖细胞增殖细胞群倍增细胞群倍增DNA复制DNA复制细胞周期细胞周期活细胞活细胞细胞凋亡细胞凋亡细胞活性细胞活性可固定可固定非固定非固定细胞代谢细胞代谢线粒体感受器线粒体感受器线粒体探针线粒体探针氧化应激氧化应激钙指示剂钙指示剂死细胞。Invitrogen™细胞活性检测试剂均采用一步法或二盒激光器激光器非固定染料可固定染料405nm488nm561nm633/5nmLIVE/DEADFixableNearIR(775)LIVE/DEADFixableNearIR(780)808nmLIVE/DEADFixableNearIR(876)在使用细胞活性染料去检测固定后的细胞时,请选择LIVLIVE/DEAD™可固定细胞活性染料在细胞固定和/或破膜后仍能准确地评估细胞活性(图9Invitrogen™Attune™根据来源,对细菌悬液进行培养或过滤在流式细胞仪上检测细菌样本来源用LIVE/DEADBacLight细菌活性试剂根据来源,对细菌悬液进行培养或过滤在流式细胞仪上检测细菌样本来源储存的培养液饮料食品Propidiumiodide死细胞活细胞受损细胞出血性巴斯德杆菌PropidiumIodideFluores图9.使用LIVE/DEADBacLight试剂盒对出血败血性巴斯德杆菌染色15分钟后,在Att查看更多细胞活性染料相关信息,请访问thermofi/flow-cellviability增殖分析实验通常检测平均DNA含量或者细胞代谢指标,Invitrogen™CellTrace™试剂通过分析在连续传代后细胞亚群中的染料稀释浓度来追踪细胞分裂代数(图10)。当细胞发生增殖时,子细胞的荧光亮度是上一代母细胞的一是是Click-iTPlusEdU流式检测试剂盒BrdU是是CellTrace细胞增殖试剂盒是是Ki-67抗体是是是否是否0细胞计数细胞计数thermofi/flow-cellproliferationInvitrogen™PrimeFlow™RNA流式检测允许流式细胞术同时检测数百万个单细胞内的RNA和蛋白表达动力学(图•检测端粒DNAmiR-146amiR-146aAlexaFluor647Arg1mRNAAlexaFluor488Cxcl13Cxcl13mRNAAlexaFluor750Retn1Retn1amRNAAlexaFluor568F4/80eFluor450F4/80eFluor450F4/80eFluor450F4/80eFluor450图11.使用PrimeFlowRNA试剂盒样本制备样本制备靶标杂交信号放大流式检测荧光标记探针信号预放大探针基因特异性的信号预放大探针基因特异性的使用抗体标记蛋白(可选)固定并破膜悬浮细胞使用抗体标记细胞内蛋白(使用抗体标记蛋白(可选)固定并破膜悬浮细胞使用抗体标记细胞内蛋白(可选)使用基因特异性探针组孵育细胞分别用信号预放大探针和信号放大探针杂交Gene1使用流式细胞仪进行分析Gene1AlexaAlexaFluor647CD8mRNAGeneCD8mRNA含有固定RNA的悬浮细胞CD8PE-Cyanine7证实验结果准确性。特别是在细胞样品非常稀少或者待测新一代补偿微球流式实验结果有着更加精准的补偿调节。当荧光标记的抗体添加到微球中,可以观察到阳性细胞群和阴性细胞群清多克隆兔IgG同型对照大鼠IgG2a,kappa同型对照大鼠IgG2a,lambda(CD21/图13.使用14种不同种属和亚型的抗体对UltraCompeBeadsPlus补偿微表7.Invitrogen补偿微球UltraCompeBeadsUltraCompOneCompAbC总抗体补偿微球ArC胺反应补偿微球GFPBrightCompPlus补偿微球eBeads补偿微球eBeads补偿微球eBeads微球应用细胞活性检测同时识别κ和λ链活性染料*激光器兼容性据SB染料和BV染料进行兼容多数标准激光或紫激光488nm25tests01-3333-4101-3333-4201-2222-4101-2222-42细胞绝对计数是一种定量检测样品中的细胞0CountBrightCD19细胞CD19APC-eFluor780图14.CountBrightPlus微球计数表8.Invitrogen绝对计数微球计数LIVELIVE/DEADBacLight细菌活性及计数试剂盒**CountBrightPlus微球*AccuCheck微球•样品细胞浓度•移液准确度•细菌活性C36995L34856表9.Invitrogen质控校准微球细胞大小校准仪器质控校准彩虹校准微球仪器激光校准Alignlow流式校准微球流式荧光标准化AccuCheckERF和VirocheckERF对照微球流式细胞大小校准试剂盒流式亚微米颗粒大小参考试剂盒用途细胞大小对照细胞大小对照流式细胞仪日常质控激光光路校准仪器间和仪器内数据对比的标准化和荧光校准发射光无荧光发射绿光400-680nm515-660nm(蓝激光或645-680AccuCheckERF微球,415-910nmViroCheckERF微球,390-910nm微球大小0.02µm-2.0µm3.0µm-3.4µmAccuCheckERF微球:3.2µmViroCheckERF微球:100nm,200nm,500nm货号A343052.5µm:A16502,A16500,A165016.0µm:A16505,A16503,A16504AccuCheckERF微球:A55950ViroCheckERF微球:V10425查看更多微球相关信息,请访问thermofi/flow-controlsAttune流式细胞仪搭配Invitrogen™CytKick™或CytKick™Max自动进样器,将精度与性能完美结合。上样速度更快的同时,能达到更高灵敏度,且无需担心因仪器堵塞而造CytPix流式细胞仪还搭载了高速明场相机和自动图像分析仅能获得多色流式数据,还能提供细胞形态学等图像信表10.Attune流式细胞仪参数AttuneCytPix成像型流式细胞仪AttuneNxT流式细胞仪激光器脉冲激光功率液流系统荧光分辨率数据采集率最大光电转化速度像素分辨率0.3µm/像素物镜放大倍率理论分辨率直观观察到800nm微粒3,000-6,000张图像/秒参数/特征直下式分选到1536孔板,并提供多种上样选项和温控装•安全:定制化设计的集成式II级生物安全柜和气溶胶管理表11.Bigfoot全光谱超高速流式细胞分选仪参数查看Bigfoot全光谱流式细胞分选仪相关信息,请访问thermofi/bigfoot免费服务电话:400-820-8982/800-820-8982技术支持邮箱:LifeScience-CNTS@thermofi开始使用在线流式配色工具,请访问thermofi/order/panel-builder查看独特的光谱特征和减少光谱重叠选择抗原指标选择荧光染料添加活性染料或细胞查看独特的光谱特征和减少光谱重叠选择抗原指标选择荧光染料CDCD3标记抗体荧光强度荧光强度荧光强度活细胞死细胞活细胞死细胞10101010100V2V4V6V8V10V12V14V16B2B4B6B8B10B12B14R2R4R6R8通道紫激光检测器400nm–850nm蓝激光检测器500nm–900nm红激光检测器650nm–900nm101010100V

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