药物分析-药物的杂质检查（药物分析课件）

干燥失重测定法

干燥失重是指药物在规定的条件下，经干燥恒重后后所减失的重量，以百分率表示。该法主要检查水分、结晶水及其他挥发性物质。

中国药典规定干燥失重的量应恒重，即供试品连续两次干燥后，称重的差异在0.3毫克以下，即为恒重。干燥失重测定法干燥失重恒重干燥失重测定法干燥失重测定法常压恒温干燥法恒温减压干燥法干燥剂干燥法适用于对热较稳定的药品，一般干燥的温度为105摄氏度。适用于对热较不稳定或其水分较难以除尽的药品。适用于受热分解或易于升华的供试品。干燥失重测定法的检查原理将精密称定的供试品置于已干燥至恒重的扁形称量瓶中，在规定条件下干燥至恒重，用减失的重量除以取样量，计算供试品的干燥失重。取供试品，混合均匀。取约1g（如为较大结晶，应先迅速捣碎使成2mm以下的小粒）或各品种项下所规定的重量，置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，称取的供试品其平铺厚度不可超过5mm，如供试品为疏松物质，其厚度不得超过10mm。二、操作方法1.取样注意：干燥失重在1.0%以下的品种可只做一份；干燥失重在1.0%以上的品种，应同时做平行实验两份。除另有规定外，照各品种项下规定的条件干燥，待温度升至规定值并达到平衡后，再放入供试品，按规定条件进行干燥。同时记录干燥开始的时间，干燥时应将瓶盖取下，放置于称量瓶旁边或将瓶盖半开。如采用烘箱干燥，温度一般设置为105℃。采用恒温减压干燥箱或减压干燥器时，温度应按各品种项下的规定设置，压力设置在2.67kpa（即20mm汞柱）以下。二、操作方法2.干燥干燥器中常用的干燥剂干燥失重测定法变色硅胶无水氯化钙五氧化二磷应显蓝色，且可反复使用，不显蓝色时可加热使之恢复至蓝色。常用的干燥剂，干燥效果最好，呈粉末状，只可使用一次，如表面呈结皮现象时，应除去结皮物。二、操作方法3.称重将称量瓶盖好，取出，称重。干燥器干燥法检查的供试品，干燥后即可直接称定其重量；烘箱法或恒温减压干燥法干燥的供试品，应在干燥后取出，先置于干燥器中，放冷至室温后，再称重。干燥失重（％）=样品减失的重量样品量×100％若干燥失重的实测数值小于等于规定限度，则判为符合规定，否则判为不符合规定。二、操作方法4.计算5.结果判定干燥失重测定法三、注意事项如供试品在尚未达到规定的干燥温度时，既出现了融化现象，则应先将供试品在低于熔点5~10摄氏度的温度下进行干燥，至大部分水除去以后，按规定条件进行干燥。0102减压干燥时，除另有规定外，温度一般设置为60℃，压力为2.67kPa（20mm汞柱以下)。减压干燥易选用单层玻璃盖的称量瓶。03初次使用新的减压干燥箱时，应先将其外部用厚布包好再行减压，以防破碎伤人。04装有供试品的称量瓶，尽量至于温度计附近，以免因箱内温度不均匀，产生温度误差。特殊杂质检查特殊杂质检测方法薄层色谱法高效液相色谱法紫外-可见分光光度法特殊杂质检查色谱法色谱法能利用药物与杂质在互不相容的两相中的分配系数或其他性质的差异而被分离，因此这种方法广泛应用在杂质检查中。薄层色谱法薄层色谱法的分离效能、灵敏度虽然不如高效液相色谱法，但是和紫外可见-分光光度法相比较，专属性要强，且不需要特殊设备，检测成本低。薄层色谱法薄层色谱检查方法自身稀释对照法03杂质对照品法01对照药物法02杂质对照品法限度法

杂质对照品法适用于已知待测杂质且具有该杂质的对照品。薄层色谱检查方法杂质对照品法（限度法）供试品溶液色谱图中待检杂质的斑点颜色和大小不得超过杂质对照溶液色谱中的斑点颜色和大小，以判断供试品中的特殊杂质是否超过限量。薄层色谱法在这种方法中，我们选择的药物对照品是杂质限量的上限，供试品溶液色谱中所显主斑点，及其他杂质斑点与对照品溶液所显主斑点及其他杂质斑点进行对应比较，要求供试品杂质斑点颜色不得比对照品中杂质斑点更深，且不能显对照品溶液以外的杂质斑点即可判定符合要求。对照药物法薄层色谱法对照药物法适用于无适合的杂质对照品或供试品中杂质斑点颜色与主斑点的颜色有差异，难以判断其限量时选择此种方法。对照药物法薄层色谱法1.供试品溶液①：每1ml含有5mg马来酸麦角新碱溶液；2.供试品溶液②：每毫升中含有0.2毫克马来酸麦角新碱溶液；3.马来酸麦角新碱对照品溶液。123对照药物法薄层色谱法以马来酸麦角新碱中有关物质的检查为例365nm紫外光灯下检视，结果：1.供试品溶液主斑点位置和颜色与对照品溶液的主斑点相同;2.如供试品①显杂质斑点，其颜色与对照品溶液对应的杂质斑点比较，不得更深，并不得显对照品溶液以外的杂质斑点；3.供试品溶液②除主斑点外，不得显任何杂质斑点，此种情况即为合格。结果判定案例--对照药物法斑点定位自身稀释对照法供试品溶液的自身稀释对照法是将供试品溶液按杂质限量稀释至一定浓度的溶液作为对照溶液。薄层色谱法结果判定薄层色谱法供试品溶液色谱中除主斑点外的其他斑点，与自身稀释对照溶液中所显主斑点进行比较，以判断供试品溶液中特殊杂质是否超过限量，这种方法准确度较差，要求供试品与杂质对显色既显相同的颜色，显色灵敏度也应相同或相近。当药物中存在多个杂质时，其中已知杂质有对照品时。当药物中存在多个杂质时，其中已知杂质有对照品时。供试品溶液自身稀释法杂质对照品检查薄层色谱法残留溶剂检查法

残留溶剂是指在原料药或辅料的生产中以及在制剂的制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全除去的有机溶剂。

中国药典规定残留溶剂测定采用气相色谱法。残留溶剂检查法残留溶剂检查法第一类溶剂毒性较大，可以致癌并对环境有害，应该避免使用的溶剂。2应限制使用的溶剂，一般具有非基因毒性，不可逆或可逆毒性。

3毒性低，对人体危害较小的溶剂。4目前尚无足够毒理学资料的溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度。残留溶剂检查法生产企业在使用时应提供该类溶剂在药品中残留水平的合理性报告，使其符合产品规范、GMP或其他基本的质量要求。残留溶剂检查法色谱条件测定方法残留溶剂检查法气相色谱法中固定相也就是氮气是固定不变的，因此药物中挥发性成分的分离主要是依赖于色谱柱的选择和对柱温的调节。残留溶剂检查法残留溶剂检查法理论塔板数分离度进样重复性残留溶剂检查法气相色谱法的系统适用性试验用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论塔板数一般不低于5000;填充柱的理论塔板数一般不低于1000。0102色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰分离度应大于1.5。03以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积比值的相对标准偏差（RSD）应不大于5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD值应不大于10%。残留溶剂检查法残留溶剂检查法应用气相色谱法测定残留溶剂的操作流程1供试品溶液的制备；2对照品溶液的制备；3气相色谱法具体检查方法的选择及进样分析；4残留溶剂浓度计算及结果判定。1供试品溶液的制备；2对照品溶液的制备；3气相色谱法具体检查方法的选择及进样分析；4残留溶剂浓度计算及结果判定。残留溶剂检查法供试品溶液制备供试品溶液制备顶空进样法溶液直接进样法残留溶剂检查法顶空进样法气相色谱特有的一种进样方法，适用于挥发性大的组分的测定。测定时，通常以水为溶剂，精密称取供试品0.1～1g，对于非水溶性药物，可采用N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜的溶剂。溶剂选择时应考虑供试品和待测溶剂在其中的溶解度，所选的溶剂应不干扰待测溶剂的测定。溶液直接进样法适用于沸点较高，顶空进样灵敏度不如直接进样的组分，如乙二醇、甲酰胺等。残留溶剂检查法二、对照品溶液的制备采用制备供试品溶液相同的方法和溶剂，制备对照品溶液；如用水作溶剂，应先将待测有机溶剂溶解在50%二甲基亚砜或N，N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。残留溶剂检查法二、对照品溶液的制备限度检查根据残留溶剂的限度规定，确定对照品溶液的浓度；定量测定为保证定量测定结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积不宜超过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的2倍。残留溶剂检查法第一种为毛细管柱顶空进样等温法第二种方法是毛细管柱顶空进样程序升温法第三种方法是溶液直接进样法三、具体检查方法的选择及进样分析残留溶剂检查法1.毛细管柱顶空进样等温法本法适用于被检查的有机溶剂数量不多，并且极性差异较小的情况。三、具体检查方法的选择及进样分析残留溶剂检查法2.毛细管柱顶空进样程序升温法适用于检查的有机溶剂数量较多并且极性差异较大的情况。残留溶剂检查法3.溶液直接进样法可采用填充柱，也可采用适宜极性的毛细管柱。残留溶剂检查法四、残留溶剂浓度计算及结果判定限度检查以内标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值。以外标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积。定量测定按内标法或外标法计算各残留溶剂的量药物杂质杂质杂质是指存在于药物中的没有治疗作用或影响药物的疗效和稳定性，甚至对人体健康有害的物质。检查杂质、控制纯度是确保用药安全、有效，保证药品质量的一个重要方面。47杂质是如何引入到药物中的呢？杂质生产过程1贮藏过程2杂质在药物的生产过程中，合成药物时，所用的原料不纯、未反应完全的原料、反应的中间体和副产物，都会成为杂质。还有使用的一些试剂、溶剂等，如未能完全除去，也会成为产品中的杂质。用有机溶剂提取或精制后，产品中就可能有残留溶剂的存在。

此外，在生产中所使用的金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具，也可能使产品中引入砷盐、铅、铁、铜、锌等金属杂质。杂质的来源杂质的来源药品在贮藏过程中也会引入杂质，尤其是贮藏保管不善，或贮藏时间过长，在外界条件如温度、湿度、日光、空气的影响下，或因微生物的作用，可能发生分解、氧化、潮解和发霉、异构化等变化，使药物中产生有关的杂质。杂质的分类一般杂质在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。特殊杂质在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸，异烟肼当中的肼。特殊杂质的检查方法收载在该药物的质量标准中。按来源分类杂质的分类无机杂质主要来源于药物生产涉及的仪器、原料、干燥试剂、催化剂、重金属等。有机药物有机药物中引入的原料、中间体、副产物、分解产物、异构体和残留的有机溶剂等属于有机杂质。按性质分类杂质的分类信号杂质药物中还有一种杂质，本身无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平。此类杂质的存在可以反映药物的生产工艺及贮藏状态是否正常。杂质的分类有害杂质药物中的重金属、砷盐、残留溶剂等，对人体有毒害，为有害杂质。如过量存在，会导致人体中毒，影响到用药的安全性。在质量标准中对有害杂质要加以严格控制，以保证用药的安全。

氯化物和铁盐的检查对照法氯化物的检查铁盐检查《中国药典》第四部收载了多项一般杂质的通用检查方法药物中的氯化物检查氯化物人体利用在硝酸酸性条件下，氯离子与银离子可生成氯化银的白色浑浊，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，以判断供试品中的氯化物是否超过了限量。白色浑浊（一）检查原理药物中的氯化物检查（二）操作流程样品管对照管(浓度：10

gCl－/ml)药物中的氯化物检查（二）操作流程药物中的氯化物检查比浊药物中的氯化物检查（三）注意事项AA供试品溶液溶解后若呈碱性，可滴加硝酸使呈中性。B加入10ml稀硝酸后，溶液如不澄清应过滤。C标准氯化钠溶液应在临用前进行配制。D为了避免光线使单质银析出，在观察前应在暗处放置5分钟。5.加稀硝酸的目的避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成而干扰检查。加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。（三）注意事项药物中的氯化物检查6.平行原则为了保证样品管和对照管的反应条件一致，要求样品管和对照管要平行操作。（三）注意事项纳氏比色管大小、粗细、颜色应一致03操作平行01试剂平行02药物中的氯化物检查（三）注意事项药物中的氯化物检查7.有机药物中氯化物的检查

a溶于水的有机药物——直接检查b不溶于水的有机药物——8．供试品溶液如带颜色，通常采用内消色法处理后再进行检查。（三）注意事项内消法供试液1加硝酸银试液样片管样片管对照管供试液2加硝酸银试液滤过滤液加标准氯化钠对照管药物中的氯化物检查（三）注意事项药物中的氯化物检查外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。《中国药典》采用硫氰酸盐法检查铁盐。杂质---铁盐药物中三价铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色的可溶性硫氰酸铁配位化合物，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色，以控制铁盐的限量。铁盐检查法(一)检查原理供试液对照液在白色背景下，比较两管的颜色稀盐酸过硫酸铵硫氰酸铵溶液4ml25mld.HCl30%硫氰酸铵过硫酸铵50mgH2O50mlH2O

样

品标准溶液铁盐检查法（二）操作方法铁盐检查法4ml25mld.HCl30%硫氰酸铵过硫酸铵50mgH2O50mlH2O

样

品标准溶液

杂质--砷盐72古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸银法杂质--砷盐利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断砷盐的限量。

三价As五价AsZn+HClAsH3HgBr2试纸砷斑黄棕色古蔡氏法（一）检查原理古蔡氏法检砷装置导气管检砷瓶中空磨口塞具孔塞具孔有机玻璃塞盖AB用于制备样品砷斑用于制备标准砷斑立即将装好的导气管C密塞于两个锥形瓶上，在25℃～40℃水浴中，反应45分钟碘化钾试液5m1酸性氯化亚锡试液5滴在室温放置10分钟后加锌粒2g（二）操作流程古蔡氏法（三）注意事项在检查过程中，金属锌与盐酸反应生成新生态的氢，氢与药物中的砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，而砷盐有两种价态，分别是三价的砷和五价的砷，碘化钾和氯化亚锡的主要作用是还原五价的砷成三价的砷，以加快反应速度。五价砷砷化氢古蔡氏法（三）注意事项生成的砷化氢与溴化汞试纸反应生成砷斑过程中，由于锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干扰试验结果。导气管醋酸铅棉花吸收产生的硫化氢气体古蔡氏法（三）注意事项用三氧化二砷配制标准砷贮备液，临用前取贮备液新鲜配制标准砷溶液，每1ml标准砷溶液相当于1μg的As。标准砷斑用2ml标准砷溶液(相当于2μgAs)制备，可得清晰的砷斑，过深或过浅均会影响比色的正确性。古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）砷化氢与Ag(DDC)吡啶溶液作用，使Ag(DDC)中的银还原为红色胶态银，用目视比色法或在510nm波长处测定吸光度值进行比较。醋酸铅棉花锌粒、盐酸、碘化钾、酸性氯化亚锡AsH3红色胶态银，可目视比色或在510nm比较A（一）检查原理醋酸铅棉花锌粒、盐酸、碘化钾、酸性氯化亚锡AsH3红色胶态银，可目视比色或在510nm比较A二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）比较样品砷斑和标准砷班，比较样品溶液和标准砷溶液颜色深浅或在510nm处吸光度大小。Zn+HCl红色胶水黄→棕杂质--砷盐古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸银法

杂质的控制方法LoremipsumdolorsitametLoremipsumdolorsitamet限量检查法定量测定法84杂质限量的检查只要把杂质的量控制在一定的限度以内，仍然能够保证用药的安全和有效。药物中所存在的杂质，在不影响药物疗效和药物使用安全的前提下，综合考虑药物生产的可行性与产品的稳定性，是允许药物中含有一定量的杂质的。杂质限量的检查杂质限量药物中所含杂质的最大允许量，通常用百分之几或百万分之几来表示。杂质的限量检查药物中杂质的检查，一般也不要求测定其含量，而只检查杂质的量是否超过限量。例如《中国药典》(2020年版）中规定布洛芬炽灼残渣不得超过0.1%。杂质限量的检查对危害人体健康，影响药物稳定性的杂质，必须严格控制其限量。砷对人体有毒，其限量规定较严，一般不超过百万分之十。重金属(其中以铅为主)易在体内积蓄，引起慢性中毒，并影响药物的稳定性，允许存在的量也很低。药物中杂质限量的制订除了根据杂质本身的性质外，还要根据生产所能达到的水平并参考各国药典的惯例。杂质限量的计算供试品(S)中所含杂质的量是通过与一定量杂质标准溶液进行比较来确定。杂质的限量检查法限量检查时，一般不需要测出杂质的准确含量。对照法灵敏度法比较法杂质的限量检查法对照法取一定量待检杂质的标准溶液与一定量供试品溶液在相同条件下加入一定的试剂处理后，比较反应结果，从而判断供试品中所含杂质是否超过限量。该法的检测结果，只能判定药物所含杂质是否符合限量规定，一般不能测定杂质的准确含量。对照样品砷斑杂质的限量检查法灵敏度法向一定量供试品溶液中加入定量试剂，在一定反应条件下不得出现正反应，从而判断供试品中所含的杂质是否符合限量规定。本法的特点是不需杂质标准溶液。利用氯离子与银离子生成氯化银沉淀反应的灵敏度来控制灭菌注射用水中氯化物的限量。

杂质的限量检查法比较法取一定量供试品依法检查，测得待检杂质的特定参数不得超过规定值，特定参数有吸光度、旋光度等，本法的特点是不需要对照物质，只需准确测定杂质的吸光度、旋光度等参数，与规定限量进行比较。盐酸去氧肾上腺素中酮体的检查：取本品，依法制成每1ml中含4mg的溶液，照紫外﹣可见分光光度法，在310nm的波长处测定吸光度，不得大于0.20。杂质--重金属重金属对人体的危害铅抑制体内多种酶的活性而引起代谢障碍，可抑制神经突触的传导及脑的发育，影响骨骼的钙代谢，造成贫血，引起肾脏损害等。汞在脑组织中与脑内蛋白质结合而引起脑损害，可以引起肾脏损害。镉镉对呼吸系统、肾脏及骨骼具有毒性。杂质---重金属《中国药典》0821项下规定了药物中重金属的检查方法。铬含量超标重金属概念在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠试液作用而显色的金属杂质。如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等。重金属重金属检查法硫代乙酰胺法炽灼后硫代乙酰胺法硫化钠法杂质---重金属适用于无须有机破坏，在酸性条件下可溶解的无色药物中的重金属检查。硫代乙酰胺法硫代乙酰胺在弱酸性(pH3.5醋酸盐缓冲液)条件下水解,产生H2S,与微量重金属离子(以Pb2+为代表)生成黄