影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座

影响免疫组化染色原因及对策影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第1页良好免疫组化染色切片是正确判断染色结果基础和前提。因为免疫组化染色过程中存在很多步骤或步骤，每一个步骤或步骤都可能影响到染色最终止果，所以，要做好一张高质量免疫组化切片并不是一件非常轻易事。需要病理技术员和病理医生亲密配合、相互协调、共同努力才能确保做出合格免疫组化切片。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第2页一、影响免疫组化染色质量原因1、标本固定手术标本及时固定是确保免疫组化染色质量关键。未能及时固定组织，会造成细胞变性和自溶，造成结构破坏和抗原物质弥散，在免疫组化染色上表现为抗原定位改变和背景染色增高。过分固定会造成抗原决定簇封闭和抗原丢失。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第3页同一病例ER表示情况ERER固定不及时固定二周后取材固定8小时后取材影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第4页未及时固定乳腺癌组织ER表示胞浆着色影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第5页影响免疫组化染色质量原因2、切片质量影响切片太厚、皱褶，刀痕，敷贴不牢靠，以及脱蜡不彻底，均会影响免疫组化染色质量，易出现非特异性染色和染色不均匀。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第6页影响免疫组化染色质量原因3、抗原修复步骤影响抗原修复步骤在免疫组化染色中是极为主要步骤。不一样修复时间、不一样修复方法、不一样抗原修复液，最终结果会有差异。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第7页

同一蜡块不一样修复方式结果ERHer-2(2+)Her-2(1+)微波修复水浴修复影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第8页

同一蜡块不一样修复时间结果影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第9页

同一蜡块使用不一样修复液结果Ki-67EDTA柠檬酸影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第10页4、操作过程中细节问题影响滴加抗体未完全覆盖组织，PBS残留过多，操作过程中切片干燥等原因，会出现边缘效应和染色不均匀及北京染色等。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第11页抗体覆盖组织不完全造成边缘效应影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第12页抗体覆盖不均匀灶状着色影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第13页影响免疫组化染色质量原因5、第一抗体、检测系统影响使用不一样克隆、不一样种属起源抗体，不一样检测系统，免疫组化染色会产生差异。使用三步法试剂盒（如SP法）生物素系统进行免疫组化染色时，假如操作不妥会产生较强背景染色。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第14页影响免疫组化染色质量原因6、显色剂、复染剂影响不一样DAB显色试剂盒、不一样显色时间，会对免疫组化染色强度及级别判断产生影响。苏木素复染过深、过浅，对比都不清楚。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第15页DAB显色恰当GST-π影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第16页DAB显色恰当CK5/6影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第17页Ki-67影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第18页胸腔积液离心包埋细胞块免疫组化染色TTF-1CK7影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第19页Calponin影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第20页TOPOⅡ影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第21页CK5/6影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第22页P63影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第23页DAB显色适当，苏木素复染过浅影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第24页二、免疫组化染色质量控制组织固定1、标本在离体后应马上浸泡于相当于标本体积8~10倍标准固定液中，大标本要剖开固定。离体后标本固定前存放不得超出30分钟。2、在实际工作中，就可操作性而言，10%缓冲福尔马林是兼顾保留组织形态和抗原性通行、被广泛接收选择。3、适度、适时固定。普通而言，大标本只要做到及时切开固定，在室温下12小时即可到达固定要求；为了适应免疫组化染色标准化需要，标本固定后应及时取材，通常固定时间不得超出24小时。4、到达固定时间要求而不能及时进入脱水程序标本，提议将标本置入70%乙醇中进行暂时保留直至进入组织脱水程序。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第25页免疫组化染色质量控制脱水及制片1、建立严格组织脱水试剂规范化更换制度，确保组织处理质量。2、切片厚度普通3~4µm，厚薄均匀、平整，无刀痕、折叠，采取高质量防脱载玻片。3、切片在60℃烤箱内烤2~3小时，或者70℃烤箱内1小时。4、脱蜡要和常规切片分开，使用单独二甲苯，假如温度过低或二甲苯使用次数较多，可适当延长脱蜡时间。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第26页免疫组化染色质量控制抗原修复抗原修复方式有各种，热修复普通推荐高压锅热修复法，不过微波修复也有其方便一面。影响抗原修复基本原因是加热温度和加热时间，以及所使用修复液PH值。需要操作者在实际工作中探索总结，同时要依据每种抗体详细要求，找到较适合修复方式。抗原修复恰当是否，直接关系到免疫组织化学染色成败，深入影响最终结果正确判读。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第27页免疫组化染色质量控制抗体及检测系统选择选择优良抗体和检测试剂盒，新买抗体要进行敏感性测试，找到最正确抗原修复条件，每次试验要设置对应阳性和阴性对照。试剂使用一定在其使用期内，同时经常观察抗体使用过程中结果改变，如不理想要及时更换。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第28页免疫组化染色质量控制显色和复染不要忽略显色过程，和常规染色类似，显色不恰当也会造成染色前功尽弃。不一样组织、不一样抗体显色时间有差异，必要时使用显微镜观察切片显色效果。苏木素复染过深过浅都会造成对比不清楚，不利于观察评价。影响免疫组化染色的因素和对策专家讲座第29页免疫组化染色质量控制影响免疫组化染色原因很多。在操作中应重视细节，