(高清版)GBT 42349-2023 光催化材料抗病毒活性的测定 Q-β噬菌体试验方法

光催化材料抗病毒活性的测定Q-β噬菌体试验方法Determinationofantiviralactivityofphotocatalyticmaterials—[ISO18061:2014,Fineceratechnicalceramics)—Determinationofantiviralactivityofsemiconductiphotocatalyticmaterials—TestmethodusingbacteriophageQ-beta,IDT]国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会发布国家市场监督管理总局I Ⅲ 1 1 1 25原理 26材料 36.1试验微生物和试验准备 3 4 57.1试验装置 5 67.3保湿玻璃板 6 67.5滤纸 67.6荧光紫外灯 6 67.8打孔金属板 6 77.10无菌过滤器 7 7 79.1通则 79.2菌悬液的制备程序 8 8 8 99.6噬菌体滴度的测试 9 10.2噬菌体滴度的计算 Ⅱ Ⅲ本文件等同采用ISO18061:2014《精细陶瓷(高级陶瓷、高级工业陶瓷)半导体光催化材料抗病——为与现有标准体系协调，将标准名称改为《光催化材料抗病毒活性的测定Q-β噬菌体试验1本文件描述了含有光催化剂或表面有光催化剂或光催化材料涂膜表面的抗病毒活性的测试方ramics(advancedceramics,advancedtechnicalceramics)—UltravioletlightsoconductingphotocatalytityofsemiconductingphotocatalyticmISO80000-1量和单位第1部分：总则(Quantitiesandunits—Part1:General)24符号B₁:经紫外光照强度L照射后未经处理试样的噬菌体的平均滴度；C:经紫外光照强度L照射后光催化试样的噬菌体的平均滴度；VL:经过光照强度L照射后的光催化抗病毒活性值；3菌株编号大肠杆菌注：ATCC23631-B1与NBRC20012并不严格一致，但是它们来源相同且光催化性能相当(约为0.1];46.2.21/500营养肉汤(1/500NB)1个月。50.2(25℃时)。加棉塞并灭菌(见6.2.2)。灭菌完毕，加入10mL钙溶液并充分混匀。制备好后，在6.2.9卵磷脂吐温80大豆酪蛋白营养液(SCDLP)试验装置可以提供紫外照射来激活光催化剂以测定光催化材料的抗病毒活装有试样的试验舱。试验装置的原理图见图1。6所用的覆盖膜应符合ISO27447:2019中7.2的规定。薄膜应剪成(40±2)mm×(40±2)mm的片状。如果是不规则形状的测试样片(见第8章b)的注1],则制备与试样形状相同，但比试样小的(2.5~使用的保湿玻璃板应符合ISO27447:2019中7.3的规定，其尺寸应能完全覆盖培养皿。应通过将直径约为(4～6)mm的玻璃棒或玻璃管切割成(10～15)cm长且弯成U形或V形制备。所用的荧光紫外灯应符合ISO10667规定的351BLB或351BL等。所用的紫外照度计应符合ISO10667的规定。当要求的照度不能通过调整光源的高低来达到时，可以通过在灯下放置一个打孔的金属板(见图2和图3)来调节照度。7离心机应能施加10000g的加速度并在(4±2)℃的环境下使用。8试样过10mm。使用标准形状的试样。b)制备9片未经处理的试样和6片光催化处理的试样，当不能本方法的测试流程见图4。8b)在(37±1)℃条件下培养(16～24)h;c)取约1/1000体积的b)中培养物到含钙LB培养基中；d)在(37±1)℃条件下培养至菌浓达到(5.0×10⁸~2.0×10⁹)cfu/mL。a)使用1/500NB稀释噬菌体储备液(6.1.3),使滴度为(1.0×10³~4.0×10⁷)pfu/mL;b)如果制备的噬菌体悬液不立即使用，可存储于0℃并在2h内使用。放置(前者6块，后者9块);b)使用无菌的吸头吸取0.15mL测试噬菌体悬液并将其滴加到每一膜然后轻推使噬菌体悬液均匀分散至整个膜表面，小心操作勿使液体溢出膜外，如果使用非常规尺寸试样(见第8章b)的注1],可调整噬菌体悬液接种体积以适应覆盖膜尺寸(见7.2);9d)除3片未经处理的试样接种后立即测定噬菌体滴度外(见9.6),其余试样进行光照试验(见e)取3片接种噬菌体悬液后的未经处理试样(噬菌体立即接种后试样),使用无菌镊子将其覆盖膜和未经处理的试样放入均质袋内，小心操作勿使噬菌体悬液从覆盖膜或试体滴度测试(见9.6)。9.5.19.5.4与9.5.5所述试样应置于(25±5)℃的条件下。光照强度/(mW/cm²)举例白天的窗边、光催化反应的辅助灯边(BLB)白天室内距窗边1.5m范围内、清晨或日落前的窗口白天室内距窗边3m左右在没有窗户的房间(只有室内灯),在晚上的房间(仅限室内光)注：可以避免紫外伤害的最大光照强度为0.25mW/cm²,目前紫外照度计的光电感应器能测到的最小光照强度为0.001mW/cm²。9.5.4将装有已经接种了噬菌体悬液试样(3个未经处理的对照样和3个光催化处理的试样)的培养皿9.5.5将装有已经接种了噬菌体悬液的试样(3片未经处理的试样和3片经光催化处理的试样)的培养d)使用新的无菌吸管吸取c)中的1mL液体，放入含有(9±0.1)mL蛋白胨生理盐水的试管e)使用10倍稀释法得到系列稀释液；j)在室温下放置(15～30)min;1)培养结束后，选取出现(30～300)个噬菌斑的平皿进行计数。测试结果按下列方法计算。根据ISO80000-1的规定，应将计算结果按公式(1)计算噬菌体的滴度。当1mL洗脱液的平板上斑点数小于30个时，使用平均数来计算噬菌斑数量。当1mL洗脱液的平板上斑点数量小于1时，平均数计为1。N=Z×Dp×10…………(1)a)接种后3片未处理试样上的噬菌体滴度对数平均值满足公式(2):b)立即接种后未处理试样上的噬菌体滴度应在(1.0×10⁶~4.0×10⁶)pfu范围内。10.4光催化抗病毒活性值计算试验结束后按公式(3)和公式(4)计算光催化抗病毒活性值：VL=[log(BL/A)-log(CL/A)]=log[BL/CL]式中：VL——经过光照强度L照射后的光催化抗病毒活性值；L——紫外光照强度，单位为毫瓦每平方厘米(mW/cm²);A——立即接种后未处理试样的噬菌体平均滴度；B——经紫外光照强度L照射后未经处理试样的噬菌体平均滴度；CL——经紫外光照强度L照射后光催化试样的噬菌体平均滴度。△V=log[BL/CL]-[log(Bp/A)-log(Cp/A)]=log[BL△V——紫外光照贡献的光催化抗病毒活性值；Bp——暗条件放置后，未经处理试样的噬菌体平均滴度；Cp——暗条件放置后，光催化试样的噬菌体平均滴度。10.5非光催化抗病毒活性值计算如果光催化材料的抗病毒活性值也包含了由非光催化引起的抗病毒活性，可以在测试结束后按公式(5)计算非光催化性的抗病毒活性值：Vo=[log(Bp/Cp)]…………(5)式中：Vo——测试样品在暗条件下放置后，非光催化性的抗病毒活性值；Bo——暗条件放置后，未经处理试样的噬菌体平均滴度；Cp——暗条件放置后，光催化试样的噬菌体平均滴度。11测试报告测试报告应包含如下信息：a)注明使用了本方法；c)预照射使用的条件(见第8章中注2);d)使用的菌种信息；e)荧光紫外灯的制造商和产品序号；f)紫外照度计的制造商和产品序号；g)光照条件，包括紫外光照的强度和照射时间；h)覆盖膜和保湿玻璃板的类型及规格；i)接种量及接种噬菌体的滴度；j)A,Bz,CL,VL,Bo,Cp,△V的值；k)如材料具有非光催化的抗病毒活性，报告A,BL,CL,VL,Bo,Cp,△V,Vo的值。GB/T42349—2023/ISO180(资料性)流感病毒和Q-β噬菌体的比较数据0图A.1甲型流感病毒与Q-β噬菌体的光催化活性比较(0.10mW/cm²)初始感染滴度的相对比率初始感染滴度的相对比率时间/h图A.2甲型流感病毒与Q-β噬菌体的光催化活性比较(0.01mW/cm²)(资料性)使用噬菌体ATCC23631-B1和NBRC20012测定的光催化活性比较通过评价TiO₂样品来比对Q-β噬菌体(ATCC23631-B1和NBRC2