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ICS07.080GB/T41907—2022肠激酶活性检测方法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会GB/T41907—2022 I Ⅱ 4试剂或材料 26试验步骤 28质量控制 2IGB/T41907—2022本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国工具酶标准化工作组(SAC/SWG11)提出并归口。本文件起草单位：雷谷(厦门)生物医药有限公司、通用生物系统(安徽)有限公司、苏州坤琪生物科坊诺道中科医学检验实验室有限公司、福建南生科技有限公司、上海鹰姿生命科技有限公司、苏州海狸技有限公司、中国计量科学研究院计量与分析科学研究所、深圳华大生命科学研究院。ⅡGB/T41907—2022肠激酶(EC3.4.21.9)是十二指肠细胞分泌的一种可以在较宽pH范围(4.5～9.5)和较宽温度范围内切割含有4个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键(天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸)的蛋白质水解酶。制定肠激酶活性检测方法的国家标准，用以推动该类工具酶的产业化，对于肠激酶的生产和使用具有重要意义。1GB/T41907—2022肠激酶活性检测方法2规范性引用文件3术语和定义十二指肠细胞分泌的一种可以切割含有4个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键(天冬氨酸-天冬氨酸-37℃,16h内将0.5mg的硫氧还蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27),95%降解为NP-27所需要的酶量为1个肠激酶活性单位(U)。4.1硫氧还蛋白-NP-27(Thioredox4.3氯化钠(NaCl):固体。4.4氯化钙(CaCl₂):固体。4.6硫氧还蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27)溶液：称取硫氧还蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27)约25mg,用反应缓冲液溶解并定容至25mL,配制成每毫升含1mg硫氧还蛋白-NP-27(Thioredoxin-2GB/T41907—20224.82×SDS凝胶加样缓冲液：量取或称取10mL5仪器设备6试验步骤6.1酶切反应取离心管8支，各加入硫氧还蛋白-NP-27(Thioredoxin-NP-27)溶液40μL,再依次分别加入肠激酶样缓冲液终止酶切反应，分别取各反应液20μL,进行SDS凝胶电泳。6.2电泳12%SDS凝胶电泳，电压90V～120V,当溴酚蓝线到达凝胶板底部时停止电泳，取出凝胶进行染色30min,并过夜脱色至无底色。当融合蛋白电泳条带看不见时，表明此时的肠激酶量恰好能将该融合蛋白样品完全酶切，并以此反应体系作为依据计算酶活性。7结果计算供试品中肠激酶活性按公式(1)计算： (1)式中：S——肠激酶活性，单位为肠激酶活性单位每毫克蛋白或固含物(U/m

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