动物实验基本操作技术专家讲座

动物试验基本操作技术

温州医学院试验动物中心动物实验基本操作技术第1页

为了确保试验研究结果可靠性、准确性和可重复性，必须掌握规范动物试验操作技术。娴熟动物试验操作技术和技巧，是试验研究确保。动物含有自卫能力，不会讲话，不领人情，更不会自动服从。降低动物应激反应或伤害，防止试验人员出现意外和受伤。动物实验基本操作技术第2页试验前准备理论准备：了解动物试验基础知识查阅关于试验方法参考文件制订研究计划和方案条件准备：动物、仪器、器械、药品试验场所和喂养场所动物实验基本操作技术第3页动物实验基本操作技术第4页动物实验基本操作技术第5页试验动物抓取与固定性别判定年纪大致判断妊娠检验分组与编号本章主要内容常规采血方法给药路径与方法麻醉方法处死方法动物实验基本操作技术第6页第一节试验动物抓取与固定标准：平静环境动作轻柔和熟练善待动物：多一份爱就多一份收获动物实验基本操作技术第7页小鼠动物实验基本操作技术第8页动物实验基本操作技术第9页大鼠动物实验基本操作技术第10页豚鼠动物实验基本操作技术第11页动物实验基本操作技术第12页家兔动物实验基本操作技术第13页动物实验基本操作技术第14页动物实验基本操作技术第15页动物实验基本操作技术第16页狗动物实验基本操作技术第17页动物实验基本操作技术第18页动物实验基本操作技术第19页猫动物实验基本操作技术第20页猴动物实验基本操作技术第21页

动物实验基本操作技术第22页第二节性别判定试验设计时有雌雄各半、雌雄不拘等。性成熟后，雌雄动物易区分：外生殖器第二性征新生动物？冬季天冷时兔子？动物实验基本操作技术第23页大鼠和小鼠动物实验基本操作技术第24页兔、豚鼠动物实验基本操作技术第25页第三节年纪大致判断提供试验动物时要有动物出生和生长统计。依据卡片统计来准确判断年纪。如无统计则要依据该动物生长曲线、牙齿、爪子或者毛色特征来大致判断。动物实验基本操作技术第26页惯用试验动物成年体重───────────────────────────

动物

小鼠

大鼠

豚鼠

家兔

猫

狗──────────────────────────

体重

18-28g

180-280g

350-650g

2-3kg

1.5-2.5kg

9-15kg─────────────────────────动物实验基本操作技术第27页小鼠ICR生长曲线动物实验基本操作技术第28页CBA/J生长曲线动物实验基本操作技术第29页初生小鼠即可发声，嗅觉和味觉敏感3日脐带脱落，开始长毛并出现胡须动物实验基本操作技术第30页4－6日双耳耸立动物实验基本操作技术第31页7－8日开始爬行，下门齿长出，被毛浓密动物实验基本操作技术第32页9－11日有听觉，被毛长齐动物实验基本操作技术第33页9－11日听觉发育完全，被毛长齐动物实验基本操作技术第34页12－14日开眼，上门齿出，开始采食、饮水动物实验基本操作技术第35页能跳跃，能抓取东西动物实验基本操作技术第36页动物实验基本操作技术第37页动物实验基本操作技术第38页3周后可断奶独立生活雄鼠：6.90g雌鼠：6.40g动物实验基本操作技术第39页SD生长曲线大鼠动物实验基本操作技术第40页动物实验基本操作技术第41页初生仔鼠无毛、闭眼、耳孔闭合、6-7克动物实验基本操作技术第42页耳朵张开动物实验基本操作技术第43页开始长毛动物实验基本操作技术第44页被毛显著动物实验基本操作技术第45页8-10天下门齿长出动物实验基本操作技术第46页动物实验基本操作技术第47页14-17天开眼动物实验基本操作技术第48页动物实验基本操作技术第49页19天第一对臼齿长出动物实验基本操作技术第50页21天第二对臼齿长出、能够断乳雄鼠：52g，雌鼠：50g动物实验基本操作技术第51页豚鼠普通年幼豚鼠牙齿短而白，爪软而短，眼睛圆亮，行动活泼，被毛有光泽，且紧贴身体。而老年豚鼠则相反，牙齿和爪均较长，眼睛朦胧，行动迟缓。可依据体重粗略地判断年纪。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。试验对年纪要求比较严格时，必须由卡片统计提供准确年纪。日龄/d初生720306090120180体重/g50-115100-120150-200170-220240-300330-400400-470520-600动物实验基本操作技术第52页兔年纪判断主要标志：门齿和爪。门齿：青年兔：雪白、短小、整齐。老年兔：暗黄、厚长、不整齐、破损。趾爪：＜1岁，红多于白，=1岁，红色与白色相当，＞1岁，白多于红色。另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓为老年兔。动物实验基本操作技术第53页狗主要依据牙齿生长情况、磨损程度、外形、颜色等来综合判定:20—30天开始长牙，第10个月牙齿已全部长出。伴随年纪增加，乳齿脱落而长出恒齿。2-4个月，更换门齿，5—6个月更换犬齿。幼年狗牙齿雪白而无磨损，1—2岁时，下颌前门齿逐步被磨损，2—3岁时，前门齿尖锐端被磨损而消失。而上颌前门齿在2—3岁时才开始磨损。在4—5岁时，其尖锐端也被磨损消失，且牙齿发黄。到10—12岁时，牙根全部磨损。动物实验基本操作技术第54页年纪犬齿更换和磨损情况2个月以下仅有乳齿(白、细、尖)2～4个月更换门齿4～6个月更换犬齿(白，牙尖圆钝)6～10个月更换臼齿1岁牙长齐，雪白光亮。门齿有尖突2岁下门齿尖突部分磨乎3岁上、下门齿尖突大部分磨平4～5岁上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄6～8岁门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损9～10岁唇部、胡须发白10岁以上门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白动物实验基本操作技术第55页第四节妊娠检验临床检验和试验室检验：外部检验法摸胎法阴道检验法：大小鼠、豚鼠、地鼠直肠检验法：大动物超声波检验法孕酮含量测定法青蛙试验：猴动物实验基本操作技术第56页大小鼠阴道涂片检验动物实验基本操作技术第57页阴栓检验动物实验基本操作技术第58页第五节分组与编号动物试验之前，必须对动物进行随机分组，再编号标识。随机化分组：防止人为影响动物实验基本操作技术第59页一、分组例1：将14只小鼠随机分成两组。①先将小鼠编为1～14号，②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄14个随机数字。或者用计算器产生随机数字。编排以下：动物实验基本操作技术第60页动物编号1234567891011121314随机数日1622779439495443548217379323归组BBABAABABBAAAA③奇数代表A织，偶数代表B组④A组：356811121314B组：1247910⑤调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数字78，用78除以8（因为需要把A组8个数字调整掉一个），得余数6，所以把A组第6个动物，即12号动物调整到B组。动物实验基本操作技术第61页⑥最终分组A组：3568111314B组：124791012注意：假如A组多3个，则再取1个随机数字，除以7。假如除尽，则写下除数当做余数。动物实验基本操作技术第62页例2：12只大鼠随机分为3组①大鼠编号1~12②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。③每个数分别用3除，统计余数（整除记下3）④依据余数分组大鼠编号：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10余数：2，3，1，2，3，2，3，3，1，1，3，1组别：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A动物实验基本操作技术第63页⑤A：3，9，10，12B；1，4，6C：2，5，7，8，11⑥调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把C组5个数字调整掉一个），得余数1，所以把C组第1个动物，即2号动物调整到B组。⑦最终分组A：3，9，10，12B；1，2，4，6C：5，7，8，11动物实验基本操作技术第64页例2：6只大鼠随机将每只分为1组①大鼠编号1~6②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄6个随机数字。③每个数分别用6、5、4、3、2、1除，统计余数（整除记下除数）④依据余数分组:余数3则把C记下；余数1，则把剩下第1个字母A记下；第3个余数1，把剩下第1个字母B记下……大鼠编号：1，2，3，4，5，6随机数字：33，46，10，52，68，07除数：6，5，4，3，2，1余数：3，1，2，1，2，1，A组别：BCDEF动物实验基本操作技术第65页二、编号和标识1、染色法：浅色动物3.5-5％苦味酸溶液（黄色）0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）2％硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟）煤焦油酒精溶液（黑色）龙胆紫溶液（紫色）动物实验基本操作技术第66页动物实验基本操作技术第67页2、打耳孔法：小型动物动物实验基本操作技术第68页3、剪趾法：小型动物139号？动物实验基本操作技术第69页4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分5、针刺法(纹身)：刺号钳，中、大型动物6、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物7、剪毛法：大动物8、笼子标号动物实验基本操作技术第70页动物实验基本操作技术第71页三、去毛1、剪毛：弯头剪毛剪2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛；如用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。动物实验基本操作技术第72页4、化学脱毛：惯用脱毛剂①8%硫化钠水溶液②硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状③硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状④硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其它大动物。动物实验基本操作技术第73页第六节常规采血方法正式试验前后，常需采血测定生化指标。动物实验基本操作技术第74页1、大小鼠：眶静脉丛（窦）：少许屡次采大小鼠血。小鼠0.2～0.3ml，大鼠0.4～0.6ml摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到4～5％体重血量。尾静脉：用于少许屡次采大小鼠血。动物实验基本操作技术第75页眶静脉丛采血动物实验基本操作技术第76页摘眼球采血尾静脉采血动物实验基本操作技术第77页剪头：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.5～1.0ml血量大血管：包含颈动脉（静脉），股动脉（静脉），腋下动脉（静脉），腹主动脉。此方法不惯用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得5ml左右血量。心脏采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（开胸，右心室）或屡次采血（不开胸）。动物实验基本操作技术第78页鼠断头器动物实验基本操作技术第79页2、家兔：耳缘静脉：可重复采血，每次5～10ml。耳中央静脉：可重复采血，每次10～15ml。动物实验基本操作技术第80页心脏采血可用于一次性（开胸）或屡次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到80～100ml血量。颈动静脉采血：用于一次性采血，需要手术，可得血量80～10ml。动物实验基本操作技术第81页动物实验基本操作技术第82页3、豚鼠：心脏采血：可用于一次性（开胸）或屡次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到5～10ml血量。背跖静脉采血：用于少许重复采血。动物实验基本操作技术第83页4、犬猫：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血5、猪：前腔静脉采血或耳大静脉采血6、羊：颈静脉采血7、猴：前肢头静脉、后肢皮下静脉或耳缘静脉等。8、禽类：翼下静脉动物实验基本操作技术第84页动物实验基本操作技术第85页动物实验基本操作技术第86页动物实验基本操作技术第87页动物实验基本操作技术第88页动物实验基本操作技术第89页惯用试验动物

最大安全采血量与最小致死采血量动物种类最大安全采血量(mL)最小致死采血量(mL)小鼠0.10.3大鼠12豚鼠510家兔1040狗50300猴1560动物实验基本操作技术第90页动物实验基本操作技术第91页采血场全部充分光线；室温夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；采血用含有采取部位普通需要进行消毒；采血用注射器和试管必须保持清洁干燥；若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。采血时要注意动物实验基本操作技术第92页惯用抗凝剂：肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素1mg＝125U，10U~20U抗1ml血凝集，但通常应用2~3倍剂量。使用方法：可配成1%肝素溶液，用时取0.1ml于试管内，100℃烘干，每管可抗凝5~10ml血。或用1%肝素溶液湿润采血注射器。肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。动物实验基本操作技术第93页枸橼酸钠：使凝血必需钙离子失活。惯用3~5%水溶液，碱性较强。草酸盐合剂：草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，福尔马林1.0ml，加蒸馏水至100ml。使凝血必需钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1ml。氟化钠：每毫升血加6mg。动物实验基本操作技术第94页其它体液采集1、胸水、腹水采集：穿刺2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓动物实验基本操作技术第95页6、尿液采集：代谢笼搜集导尿管采集膀胱穿刺压迫排尿动物实验基本操作技术第96页第七节给药路径与方法在动物试验过程中，应依据不一样试验目标、动物种类、药品类型来决定动物给药路径与方法。动物实验基本操作技术第97页1、自动口服：加入饲料或饮水2、投喂药片：掰开口，放到舌根部3、灌胃（i.g)4、直肠给药5、呼吸道给药6、滴鼻7、点眼动物实验基本操作技术第98页动物实验基本操作技术第99页8、经皮肤给药：惯用于检测药品、毒物、化装品等透皮吸收、局部作用、致敏作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤，大小鼠常采取浸尾方式。9、皮内注射(i.d)：普通用于接种或过敏试验。将药液注射在真皮和表皮之间。动物实验基本操作技术第100页10、皮下注射(s.c)：颈背部、腋下、腿、侧腹。11、肌肉注射(i.m)：股内侧部肌肉。动物实验基本操作技术第101页12、腹腔注射(i.p)：下腹部腹中线两侧动物实验基本操作技术第102页13、静脉注射(i.v)：小鼠：尾静脉大鼠：尾静脉、阴茎静脉、舌下静脉、浅背侧跖静脉大小鼠尾部有4对动静脉，其中背腹各有1根动脉、两侧各有1根静脉很显著。动物实验基本操作技术第103页尾静脉注射动物实验基本操作技术第104页阴茎静脉注射舌下静脉注射动物实验基本操作技术第105页猴后肢皮下静脉注射浅背侧跖静脉动物实验基本操作技术第106页豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射家兔：耳静脉注射猪：耳缘静脉动物实验基本操作技术第107页动物实验基本操作技术第108页猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射动物实验基本操作技术第109页14、脑腔注射15、关节腔注射：16、椎管内注射：注射入蛛网膜下腔17、淋巴囊内注射：蛙和蟾蜍动物实验基本操作技术第110页注射路径小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5静脉0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10几个动物不一样给药路径惯用注射量（毫升）动物实验基本操作技术第111页第八节麻醉方法对动物实施麻醉，是动物福利办法。如不实施麻醉，动物严重应激，影响试验结果，甚至死亡。动物清醒状态下，可能会伤及人员。动物实验基本操作技术第112页1、麻醉方法：全麻吸入麻醉，静脉注射、腹腔注射。局麻浸润麻醉。依据手术，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等次序逐步深入注射到术野周围。动物实验基本操作技术第113页动物实验基本操作技术第114页惯用麻醉剂使用方法及剂量麻醉剂

动物种类

给药路径剂量(mg/kg)惯用浓度(％)戊巴比妥钠犬、兔静脉303

腹腔40～503大鼠、小鼠、豚鼠

腹腔40～502硫喷妥钠

犬、兔

静脉15-202

大鼠

腹腔401

小鼠

腹腔15-201氯胺酮犬、猫

腹腔10-4010

大鼠、小鼠

腹腔100～20010

氯醛糖

兔

静脉80-1002

大鼠

腹腔502乌拉坦

兔

静脉750-100030

大鼠、小鼠

皮下或肌肉

800-100020动物实验基本操作技术第115页使用全身麻醉剂注意事项