DB1310-T 345-2024 平菇液体菌种制备技术规范

65.020.01CCS

B051310 DB

1310/T

—2024平菇液体菌种制备技术规范廊坊市市场监督管理局发

布DB

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345—2024 本文件按照GB/T

1.1—2020《标准化工作导则

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由廊坊市农业农村局提出。源与规划局、廊坊市农业农村局。本文件主要起草人：周志国、陈文杰、解春艳、王艳、侯桂森、任思竹、付强、闫训友、史振霞、张瑞青、杜伟娜、王素霞、乔丽秀、李春叶。DB

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345—20241 范围本文件规定了平菇液体菌种的基本要求、生产技术和生产档案等要求。本文件适用于平菇液体菌种的制备。2规范性引用文件文件。GB

150 压力容器GB

5749 生活饮用水卫生标准GB

19172 平菇菌种GB

50073 洁净厂房设计规范GB/T

食品微生物学检验

培养基和试剂的质量要求GB/T

12728食用菌术语NY/T

食用菌菌种生产技术规程3 术语和定义GB/T

12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。液体菌种在生物发酵罐中通过深层培养(液体发酵)技术生产的液体形态的食用菌菌种。母种经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和单位，也称一级种、试管种。液体菌种菌龄菌种接入培养基开始计算的液体菌种培养时间。发酵罐空消对尚未加水投料的空发酵罐进行高压灭菌。发酵罐实消指对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。DB

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345—2024通气量单位时间通入发酵罐中无菌空气体积与发酵罐体积的比值。菌种活力菌种的生长、繁殖能力。4 基本要求人员要求工作人员应该保持个人卫生，进液体菌种发酵车间须穿戴经灭菌处理的工作服、口罩、鞋、帽。场所要求生产场所符合NY/T

GB

5749要求。厂房及设施要求厂房设计应符合

NY/T

要求。洁净车间应设有多功能实验室、菌种保藏室、无菌接种室、摇瓶室、发酵罐室，设计符合

50073要求。生产设备要求关部门检验合格，符合GB

150要求。具有备用电源。5 生产技术工艺流程工艺流程步骤如图1所示。图1 工艺流程步骤DB

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345—2024母种活化母种活化配方及操作流程应符合NY/T

528要求。活化后母种质量应符合GB

要求。摇瓶液体菌种生产5.3.1 容器使用无色或近无色专用玻璃三角甁做摇瓶,使用硅胶塞或专用封口透气膜进行封口。5.3.2 培养基配方生产用水应符合GB

5749要求，培养基质应符合NY/T

528要求，玉米粉过目筛。其中，培养基配方根据成分不同，分为配方1和配方2：——配方

1：葡萄糖

20

g，蛋白胨

5

g，酵母膏

2

g，磷酸二氢钾

1

g，硫酸镁

g，维生素

B1

10mg

1

L，pH

6.0～6.5；——配方

2：玉米粉

10

g，葡萄糖

g，酵母膏

5

g，牛肉膏

2

g，磷酸二氢钾

2

g，硫酸镁

1

g，维生素

B1

mg，水

1

L，

6.0～6.5。5.3.3 培养基配制2/5～，并用专用封口透气膜或硅胶塞封口。5.3.4 灭菌将分装好的摇瓶放入灭菌锅内，采用高压灭菌，灭菌温度控制在

℃～122

℃，维持25

～min。5.3.5 接种7块～83～4）mm3～4）1～2）的母种块于摇瓶培养基内，菌种块菌丝面朝上。5.3.6 摇瓶菌种培养接种结束后封口，放入恒温箱中23

25

24

h，然后置于摇床上震荡培养，摇床温度控制在25

℃±1

℃，转速

r/min，摇床培养5

d～6

d。培养全过程要求无光或弱光培养。5.3.7 摇瓶菌种质量标准1h后菌丝体体积不低于整个培养液体积的，均匀悬浮于液体培养基中不分层。发酵罐液体菌种生产5.4.1煮罐、空消骤：在发酵罐中充满水，通蒸汽加热到

℃，煮沸1

h，之后冷却。注意冷却过程中保持罐内外及夹DB

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345—2024度126

℃，维持40

～

min。5.4.2 发酵罐液体菌种培养基配方生产用水应符合GB

5749要求，培养基质应符合NY/T

528要求，玉米粉过目筛。其中，培养基配方根据成分不同，分为配方1和配方2：——配方

1：玉米粉

8

g，葡萄糖

15

g，酵母膏

3

g，牛肉膏

2

g，磷酸二氢钾

2

g，硫酸镁

1

g，维生素

B1

10

，泡敌

0.4

g，水

1

L，

～；——配方

2：玉米粉

10

g，麦麸

20

g（煮汁），葡萄糖

15

g，蛋白胨

3

g，磷酸二氢钾

2

g，硫酸镁

1

g，泡敌

g

1

L，pH

～6.5。5.4.3 投料和定容用温水把玉米粉等原料搅拌均匀，混合后加入罐体，装液量为罐体容量的～70%，加入敌做为消泡剂，通入空气鼓气搅拌1

min～2

，混合均匀，拧紧上料口盖。5.4.4 发酵罐实消0.05MPa0MPa，维持80～30min，其他与外界有流通的阀门开口如取样口、排污口、接种口等均要通蒸汽30

灭菌。5.4.5 冷却灭菌结束，关闭空气过滤器灭菌阀与排气阀，缓慢打开空气过滤器排水阀降压至0

MPa，夹层通入0.01时通过空气过滤器向培养层内通入无菌空气，调整排气阀，维持罐压0.04

MPa～0.05

，培养液温度降至25

℃时，关闭夹层进水阀。5.4.6 接种‰～175%0.01菌种倒入发酵罐接种口，盖上接种口盖子，去掉火焰圈，拧紧接种口盖。5.4.7发酵罐菌种培养罐压0.03

～0.05

MPa，培养温度控制在23

℃～

℃，培养6

d～7

d。5.4.8 发酵罐液体菌种质量标准平菇发酵罐液体菌种感官见表1。3.5

pH5.3g/mL0.20.250.5

cmDB

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345—2024表1 平菇发酵罐液体菌种感官要求5.4.9发酵罐液体菌种检测发酵罐液体菌种检测方法如下：——形态学观察：主要是通过肉眼观察菌球形态，包括菌液色泽、菌液形态、通过鼻嗅检测菌液气味，通过显微镜观察菌丝体形态。——pH

测定：通过

试纸测定菌液酸碱度。

小于

5

为不正常。——菌丝湿重测定：检测发酵水平，方法是称取一定体积的培养液，经

10000

5min，称重。——菌种活力检测：将液体菌种接种到

平皿中，测量菌丝日平均生长速度。——霉菌检验：按照无菌操作从取样阀取少量疑有霉菌污染的培养液，接种于

中规定的

PDA

培养基中，置于

35

℃～

℃恒温培养

h，采用显微镜和感官观察菌丝生长状况和有无杂菌污染；若出现白色以外的杂色者，或