实验动物的生物安全

实验动物的生物安全引言实验动物：指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及其他的科学实验的动物。如大白鼠、小白鼠、裸鼠、豚鼠、家兔、比格犬、恒河猴、小型猪、沙鼠等。实验用动物包括：实验动物，野生动物，经济动物。如牛、羊、未实验动物化的土种狗等。KM小鼠C57小鼠裸鼠SD大鼠新西兰兔Hartely豚鼠实验动物是从事科学研究、教学、生产、检验的重要支撑条件，广泛应用于医药研发、教学实验、药品生产、生物检验等方面。实验动物为人类健康和社会进步作出了巨大贡献。引言引言目前我国实验动物生产量已达1900万只(2009)，使用量高达1600万只，高于欧盟25国1210万只的总和。我国实验动物环境设施规模和质量不断提升，实验动物进出口越来越频繁，新品系不断引进，使得我国实验动物资源日趋丰富。实验动物在生产、使用过程中，存在感染、繁殖病原体的可能以及向环境扩散病原微生物的危险，对人和环境造成生物安全危害。

引言1999年北京某实验室曾发生实验人员感染流行性出血热事件。事件起因就是操作人员被携带病毒的实验动物抓咬伤而受感染引起的。引言2006年长春市某高校中药系实验室发生学生感染流行性出血热事件，76名学生中有10名学生受感染。整个事件起因也是由于实验操作过程中被动物抓咬伤而造成的。引言2010年12月东北农业大学畜禽生产教育班30名学生进行“羊活体解剖学实验”后，28人感染布鲁氏菌病，症状为关节疼痛、全身乏力等，严重者生活不能自理。引言

实验动物生物安全问题已引起国、内外高度重视。2001年我国实施新版《实验动物国家标准》，其中规定：实验用大小鼠的等级提高到SPF级。2004年《北京市实验动物管理条例》，修改和增加了实验动物生物安全方面内容，2006年第二届北京实验动物科学国际论坛上，日本国立大学生物安全委员会委员长佐藤浩教授提出，生物安全已成为实验动物研究中不容忽视的重要因素。实验动物生物安全:是对实验动物可能产生的潜在风险或现实危害的防范和控制。由实验动物造成的各种风险和危害包括：

生产和使用实验动物中的各个环节，如实验动物的引种、保种、繁育、运输、进出口，使用实验动物(包括感染和非感染实验动物)进行动物实验、从事科研活动等过程中实验动物都有可能造成各种危害。

引言

动物实验造成的生物危害，已引起微生物学、生物医学等相关学科工作者的极大关注。动物性气溶胶、人兽共患病和实验室相关疾病感染是形成动物实验生物危害的三大重要因素。因此，在制定防护生物危害的生物安全措施上应包括实验室规程的制定、实验设备的设置(一次隔离)、实验设施的规划(二次隔离)、个人防护用品的准备、感染动物的饲养和管理以及生物危害的评估等方面；动物实验生物安全实验室(ABSL)与一般微生物学生物安全实验室(BSL)相比，既有其相同之处，又有其不同特点。实验动物生物安全的条件与保障国家、地方法律、法规合格的实验动物与设施严格、标准化的操作废弃物的正确处理实验动物生物安全应急预案

引言国家或地方实验动物主要法规、标准1、《实验动物管理条例》（1988）2、《实验动物质量管理办法》（修订版）（2001）3、《实验动物许可证管理办法（试行）》（国家：2001、广东省：2002）4、《实验动物种子中心管理办法》5、《省级实验动物质量检测机构技术审查准则》6.《广东省实验动物管理条例》2010年10月1日7.国家GB14925—2010(2011.10.01)国家或地方实验动物主要法规、标准1《实验动物微生物等级及监测》2《实验动物寄生虫等级及监测》3《实验动物环境及设施》4《哺乳类实验动物的遗传质量控制》5《实验动物配合饲料通用质量标准》6《实验动物配合饲料卫生标准》国家或地方实验动物主要法规、标准实验动物生产许可证

实验动物使用许可证

国家或地方实验动物主要法规、标准实验动物的生产和使用许可证必须经监测机构检测合格后发给单位和个人，严禁转借、转让和出租或者超许可证范围使用，如果出现上述情况，科技厅主管部门将暂扣许可证，责令限期整改；情节严重或逾期不改，吊销实验动物生产、使用许可证。实验动物分为四级：一级为普通级（cv）；二级为清洁级（cl）；三级为无特定病原体（SPF）级；四级为无菌级（包括悉生动物）。目前比格犬、恒河猴、小型猪等大动物多为普通级，大、小鼠均为清洁级以上，豚鼠、家兔等有普通级、清洁级、SPF级。国际上将实验动物分为三个级别；SPF级以上动物种群来源于剖腹产动物，微生物、寄生虫是按国标严格控制。实验动物设施分为三级：一是普通环境（洁净度8级、10万）；二为屏障环境（洁净度7级、万级）；三为隔离环境（洁净度5级、百万）。实验动物及其设施的等级隔离系统(Insulationsystem)

是以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置组成的饲养系统。用作饲养无菌动物和已知菌动物。分正、负压隔离器。

屏障系统(Barriersystem)

这是清洁级、SPF级动物生产或实验的设施。人、实验动物、饲料、饮水、垫料、空气及其它物品均需进行严格的微生物控制。人流、物流及动物流要分开。开放系统(Opensystem)

只能进行普通级实验动物的生产与实验。实验动物及其设施的等级实验动物及其设施的等级不同等级动物：必须由省级实验动物监测机构监测合格，发放“实验动物质量监测保合格证”。动物实验中所用动物必须为质量合格动物。实验动物及其设施的等级隔离环境以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置组成的饲养系统（隔离罩、IVC等）。用作饲养无菌动物和已知菌动物。洁净度：百级。屏障环境

主要用于进行SPF级、清洁级的大鼠、小鼠等小动物实验（配备饲养室及操作室）。洁净走廊SPF动物实验室实验动物及其设施的等级实验动物及其设施的等级

屏障环境动物实验设施设备

实验动物及其设施的等级

屏障环境动物实验设施设备

实验动物及其设施的等级

屏障环境动物实验设施设备普通环境

主要用于进行兔、猫、狗、猴等大动物实验饲养（配备饲养室及操作室）。实验动物及其设施的等级实验动物及其设施的等级

屏障环境动物实验设施设备实验动物及其设施的等级

屏障环境动物实验设施设备

涉及传染性、中毒性、放射性、致癌性、致突致畸及致死性实验等应在有特殊要求的生物安全实验室中进行，应根据生物安全防护的要求进行建筑或改造，按照有关规定执行。WHO将动物生物安全实验室分为四级：动物生物安全实验室一级(ABSL-1)

动物生物安全实验室二级(ABSL-2)

动物生物安全实验室三级(ABSL-3)

动物生物安全实验室四级(ABSL-4)

实验动物及其设施的等级实验动物及其动物实验的操作实验动物生产的生物安全：实验动物生产过程中，对实验动物可能造成的各种风险和危害的防范和控制。实验动物生产，包括实验动物的引种、保种、繁育、运输、进出口等过程。定期进行严格的微生物指标监测。实验动物引种：实验动物种子来源于国家实验动物保种中心，遗传背景清楚，质量符合国家标准。

实验动物保种和繁育：必须由国家或行业主管部门认可的单位进行。实验动物及其动物实验的操作适用于SPF/无菌动物饲养或运输小鼠饲养笼大鼠饲养笼实验动物运输：运输实验动物时，所使用的转运工具和笼器具，应当符合所运实验动物的微生物和环境质量控制标准。不同品种、品系、性别和等级的实验动物，不得在同一笼盒内混合装运。实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作实验动物使用的生物安全：动物及饲养要求:1、引进动物进行实验必须具备实验动物质量合格证,隔离检疫一周，无异常时方进行实验。2、坚持卫生消毒制度：定期对动物房舍和饲养用具进行消毒（消毒方法及消毒剂交替使用）。3、饲养管理人员要定期做健康检查。实验操作要求：动物实验人员实验操作过程中做好防护，穿戴好工作衣、帽、口罩、手套;严格按标准操作规程进行。实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作

屏障环境标准操作规程

SPF级动物实验室的管理责任SPF级动物实验室工作人员职责SPF级动物实验室工作人员职责SPF级动物实验室人员进出的标准操作规程SPF级动物实验室物品进出的标准操作规程SPF级动物实验室动物进出的标准操作规程使用SPF级动物实验室的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作

屏障环境标准操作规程

SPF级实验动物购买的标准操作规程SPF级实验动物接收和检疫的标准操作规程SPF级动物实验室实验动物饲料、饮水、垫料管理的标准操作规程SPF级实验动物抓取和保定的标准操作规程SPF级实验动物逃脱处理的标准操作规程SPF级实验动物死亡和伤病处理的标准操作规程高压蒸汽灭菌器使用与维护的标准操作规程传递窗使用与维护的标准操作规程渡槽使用与维护的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作

屏障环境标准操作规程

空气压缩机和喷枪使用与维护的标准操作规程SPF动物室照明及紫外线设备使用与维护的标准操作规程消毒灭菌方法的标准操作规程SPF动物实验室日常管理的标准操作规程屏障系统日常卫生与消毒的标准操作规程空调净化系统使用与维护的标准操作规程SPF动物实验室净化的标准操作规程SPF级动物实验室内环境监控的标准操作规程SPF级动物实验室实验动物笼子标记的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作

普通环境标准操作规程

普通级实验动物设施管理责任的标准操作规程使用普通动物实验室的标准操作规程实验动物重新进入普通级动物室的标准操作规程普通级实验动物、饲料、饮水、垫料购买及管理普通级动物室人员保健和安全的标准操作规程普通级动物室实验动物接收的标准操作规程普通级动物室实验动物和物资进出管理的标准操作规程普通动物室抓取动物的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作

普通环境标准操作规程普级级实验动物逃脱、死亡和伤病处理的标准操作规程进入普通级动物实验室内人员管理的标准操作规程普通级动物室环境监控的标准操作规程普通级动物室笼具和其它辅助设备管理标准操作规程普通级动物室环境卫生管理的标准操作规程普通级动物室实验动物笼子标记的标准操作规程实验用Beagle狗饲养的标准操作规程实验用兔饲养的标准操作规程实验用豚鼠饲养的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作不同品种、不同等级和互有干扰的动物实验，不得在同一实验间进行饲养，同一来源、相同品种、品系而用于不同实验目的动物实验饲养，也不得在同一实验间进行。不得将普通级动物带进屏障环境中进行实验，如将实验动物带离屏障环境进行实验，不得再带回屏障环境中进行饲养、实验。实验动物及其动物实验的操作在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。实验小鼠的抓取实验动物及其动物实验的操作实验大鼠的抓取实验动物及其动物实验的操作实验兔的抓取与给药实验动物及其动物实验的操作豚鼠的抓取

实验动物及其动物实验的操作实验狗的抓取与固定实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作

实验动物误伤的处理实验动物咬伤救治在伤口上方扎止血带，然后用高猛酸钾或双氧水冲洗伤口，并用5％石炭酸或硝酸烧灼腐蚀伤处。如被实验犬咬伤，首先要把脏血挤出，别让血存在伤口里，否则容易引起感染。如果伤口小，则可以先用肥皂水清洗伤口，然后用清水冲干净，最后涂上一些碘酒。伤口若比较大或自己不好处理，最好去医院处理。同时24小时内到防疫站注射疫苗。标本处理：动物血液及组织标本立即按实验要求进行分离、冻存或固定等处理后存放。动物实验标本及废弃物的处理废弃物处理国务院《医疗废物管理条例》卫生部令《医疗卫生机构医疗废物管理办法》卫生部文件《医疗废物分类目录》病原体的培养基、标本和菌种、毒种保存液等高危险废物，在交医疗废物集中处置前应就地高压消毒。动物实验标本及废弃物的处理实验动物使用的各种废弃物可按《医疗废物分类目录》进行相应分类，并严格按照《医疗废物管理条例》的规定进行处理。根据实验动物使用的废弃物的特征可分为感染性废弃物：如被动物血液、体液污染的物品病理性废弃物：实验动物尸体等废弃物损伤性废弃物：废弃的锐器。药物性废弃物：变质或者被污染的废弃的药品化学性废弃物：具有毒性、腐蚀性、易燃易爆性的废弃的化学物品动物实验标本及废弃物的处理实验动物使用的废弃物收集●将实验动物使用废弃物分别置于动物废弃物专用包装袋或者容器内。●感染性废弃物、病理性废弃物、损伤性废弃物、药物性废弃物及化学性废弃物不能混合收集。●盛装实验动物使用废弃物的每个包装袋、容器外表面应当有警示标识，注明：单位、日期、类别等。●废弃物经包装、密封后存放于暂时贮存设施，不得露天存放；暂时贮存的时间不得超过２天，由爱卫办或防疫部门统一运输、处理。动物实验标本及废弃物的处理实验动物使用废弃物暂时贮存设施、设备要求：●远离人员活动区和生活垃圾存放场所，方便实验动物使用废弃物运送人员及运送工具、车辆出入。●有严密的封闭措施，设专（兼）职人员管理，防止非工作人员接触动物废弃物。●有防渗漏、防雨水冲刷、防阳光直射、防蚊蝇、防蟑螂、防盗以及预防儿童接触等安全措施。●易于清洁和消毒。动物实验标本及废弃物的处理●如需暂时贮存病理性废弃物，则应当具备低温贮存或者防腐条件。●设有明显的动物废弃物警示和“禁止吸烟、饮食”标识。●病原体感染性动物实验的废弃物，需经过高压或消毒液初步处理后再分装收集、再统一由爱卫办或防疫部门运输后进一步处理。1、人畜共患病毒性疾病：流行性出血热、淋巴性脉络丛脑膜炎病毒感染、口蹄疫、埃博拉病毒感染、灵长类痘病毒病、麻疹、鸡新城疫、A型肝炎、猴免疫缺陷综合征、狂犬病、流感、节肢动物携带性病毒感染。

2、人畜共患立克次氏体病：Q热、猫抓热。

附：重要的人畜共患病附：重要的人畜共患病3、人畜共患细菌性疾病：

布氏杆菌病、李斯特菌、猴结核病、鸚鹉热、鼠咬热、鼠疫、钩端螺旋体病、沙门氏菌病、志贺氏菌病、肠炎耶森氏菌病。4、人畜共患病原虫性疾病：弓形虫病、梨形虫病、隐孢子虫病、阿米巴原虫病、大肠纤毛虫病。

1、病原体：汉坦病毒。传染源——带病毒黑线姬鼠和褐家鼠，实验大鼠也偶尔传播。

2、传播途径——污染尘埃飞扬形成气溶胶吸入感染。带病毒的血、尿污染人皮肤破损处，也使人患病。（一）流行性出血热（肾综合征出血热HFRS）3、易感者——人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔。4、症状——潜伏期14天；动物无明显症状；人感染后出现高热、出血、休克、肾功能受损和循环衰竭，严重者死亡。（一）流行性出血热（肾综合征出血热HFRS）（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎1、病原体：淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒。传染源——带病毒野小鼠或实验小鼠为传染源。2、传播途径——带病毒小鼠的分泌物、排泄物污染，吸血昆虫传播，胎盘垂直传播。（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎3、易感者——人，小鼠、猴、豚鼠、大鼠、地鼠、兔、狗、鸡等。4、症状——人感染后表现类似流感样症状，有三种表现：大脑型、内脏型、迟发型。（三）口蹄疫1、病原体：口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease，FMDV)。引起口蹄疫的以患病动物的口、蹄部出现水疱性病症为特征的传染性疫病。传染源—患病的偶蹄动物。2、传播途径——接触传播（三）口蹄疫3、易感者——偶蹄类动物、人4、症状——发烧，呕吐，口腔组织发生红色溃疡腐烂(表面腐蚀性水疱)，偶有皮肤小水疱。值得注意的是，该症状与另外一种病毒疾病“手足口病”的症状类似。（四）布鲁杆菌病

1、病原体：布鲁氏杆菌。传染源—主要是感染的羊、牛及猪，其次是犬。2、传播途径——经皮肤粘膜接触传染、经消化道传染、经呼吸道、其它如苍蝇携带，蜱叮咬也可传播本病。（四）布鲁杆菌病3、易感者——人、羊、牛、猪、犬等。4、症状——长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等为特点，女性易引起流产和死胎。临床上分型为：多性期；慢性活动型；慢性期相对稳定型。

动物福利（welfare，well-being

）就是让动物在康乐的状态下生存，康乐就是健康快乐，包括身体健康和“心理健康”，即身心健康。也可以认为是对动物需求的满足，而动物的需求包括以下三方面：

一、何为动物福利？实验动物福利动物福利为动物的健康提供良好的保证措施。为动物的舒适提供必要的条件强调心里需要。为动物的生命延续提供所需要的营养和生存条件。维持生命需要维持健康需要维持舒适需要实验动物福利动物福利观点：人类可以合理地利用动物资源造福人类和社会，实验动物是科学研究、社会进步和人类健康不可缺少的实验材料。因此提倡在动物饲养与使用中实施动物福利，给予动物必要的人文关怀。——积极倡导“3R”原则。动物福利与“动物权利”、“动物解放”等观点是有本质区别的。实验动物福利“3R”原则：善待实验动物，推行3R方案，即Replacement（替代）、

Reduction（减少）和Refinement（优化）。替代：1.在实验动物替代方面，利用离体培养的器官、组织和细胞代替整体动物，在单克隆抗体产生、病毒疫苗制备、效力和安全试验、细胞膜研究等项目中已广泛使用。2.用低等动物代替高等动物。3.用物理、化学和信息技术方法代替动物实验，这些替代方法的研究和应用，都减少了实验动物用量。实验动物福利实验动物福利减少：在减少动物用量方面的措施有：合并使用动物，如利用死亡的动物进行外科手术实验；利用病理解剖实验摘取动物的器官等；改进统计学设计，以少量动物获得大量统计学资料；使用高质量的实验动物，同样可以起到以质量代替数量的作用等。优化：在动物实验的优化方面：通过改良仪器设备，减少动物的痛苦；改善实验室条件，减少对动物的刺激，避免应激反应；优化实验方法，尽量减少实验动物用量，给予动物人道处死、施行安死术。二、为什么实行动物福利1、动物福利的科学价值

良好的福利使实验动物“身心健康”，使实验动物真正标准化，从而使科学研究结果数据准确、可靠，更好地为人类服务。2、动物福利的道德价值

动物福利是建立在人类文明道德伦理基础上的，爱护动物、善待动物是人类的责任，是人类文明道德的需要，也是人与大自然和谐发展的需要。实验动物福利实验动物福利3、动物福利的经济价值

在肉品生产中，良好的福利可减少动物应激，避免DFD(DarkFirmandDry，慢性应激