病理技术专业知识

（一）单纯固定液甲醛：浓度：40%，气体渗透力强，固定均匀，组织收缩小，不能使白蛋白和核蛋白沉淀保存脂类，必须用冷冻切片。是糖的保护剂可固定高尔基体，线粒体重铬酸钾浓度：1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。固定高尔基体和线粒体有良好效果。酸性染料着色好，碱性染料着色差固定的组织需经流水冲洗12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。苦味酸黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和溶液储藏穿透慢，组织收缩明显，无明显硬化。能沉淀一切蛋白质4．对脂肪和类脂无固定作用。5.可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋6.固定期间不宜超过24h，7.固定的组织应尽快放入70%乙醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。升汞1.浓度为5%-7%的水溶液，针状结晶2．穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显3,对蛋白质有固定作用，4.对类脂和糖类无固定作用5.临用时加冰醋酸醋酸1.刺激性气味的无色液体，低于15℃为冰醋酸5%的醋酸PH为2-8，可克制细菌和酶的活性，可防止自溶。2.穿透力强3不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4不能固定脂肪和内酯，不能保存糖5.固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体6,缺陷是组织膨胀明显，特别对于胶原纤维和纤维蛋白铬酸为三氧化铬的水溶液，浓度0.5%-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2穿透力弱，一般组织需固定12-24h，固定的组织有收缩，3能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。4对脂肪无固定作用5固定线粒体和高尔基复合体6.宜避光保存，以防蛋白质溶解。7.必须彻底流水冲洗（≥24h）。锇酸（四氧化锇）1.淡黄色结晶，剧毒，浓度1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2.渗透力极弱，易使组织变硬，延长固定期间，组织的脆性增长，对染色不利。3.固定均匀，不沉淀蛋白质。4．为脂类固定剂5.合用于线粒体和内质网的固定6.为电镜研究的必须固定剂。7.固定目的不同，配方和浓度根据需要改变8.固定后对碱性染料亲和力强，细胞核的染色效果好9.应在临用前前几天配制以保证充足溶解。丙酮1．易挥发，易燃的无色液体，可与水，醇，氯仿，醚混合2.渗透力强，对核的固定差3.可使蛋白质沉淀4.作用基本与乙醇相同，但对糖原无固定作用5．广泛用于酶组织化学中各种酶的固定乙醇1.无色液体，，还原剂，可与水无限相溶，有固定兼脱水作用用于固定的浓度为80%-95%2．渗透力弱，固定速度较慢，易使组织变脆，无水乙醇固定期，穿透速度快，渗透力差，使组织收缩3.，能沉淀白蛋白，球蛋白，核蛋白4.用于糖原的固定5.50%以上乙醇可溶解脂肪和类脂体，并可溶解血红蛋白，对其他色素也有破坏。三氯醋酸1.为无色易潮解的结晶体，水溶液为强酸性，易溶于醇和醚，应密封保存2.也是一种良好的脱钙剂（二）混合固定液B-5固定液（醋酸钠-升汞-甲醛）1．多用于固定淋巴组织，2.染色前应进行脱汞解决3.配方：无水醋酸钠1.25g，升汞6g，甲醛10ml，蒸馏水90ml.Bouin液1.有一定毒性，应避免吸入或与皮肤接触2.固定液偏酸，对抗原有一定损害，使组织收缩，不适宜标本的长期保存3.固定效果好，组织细胞结构完整。细胞核着色鲜明，细胞质着色较差。4.对脂肪固定效果好，尤合用于含脂肪的淋巴结，乳腺组织和脂肪瘤标本5.合用于结缔组织染色，特别是三色染色更为抱负。6.配方：饱和苦味酸水溶液：甲醛水溶液：冰醋酸=15：5:：1Carnoy液1．有防止乙醇的硬化和收缩作用，增长渗透力，外膜致密的组织可用其固定2.固定速度快，3mm厚组织块1h内即可固定，大块组织不超过4h。3，固定细胞质和细胞核，对于染色体固定佳，显示DNA，RNA效果好。4.常用于糖原和尼氏体的固定5．不能保存脂类，不合用脂肪染色。6.配方：冰醋酸10ml，氯仿30ml，无水乙醇60mlMuller液1.作用缓慢，固定均匀，组织收缩小2.多用于媒染和硬化神经组织3.固定过程中，需常更换新鲜的液体4.配方：重铬酸钾2-2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100mlOrth液1.渗透力强，组织收缩小2.应临时配置，在暗处固定，固定24h左右，固定液变为黑色时不可用，固定后流水冲洗12-24h。3.固定胚胎组织，神经组织。脂肪组织4.配方：重铬酸钾2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100ml，37%-40%的甲醛10ml（用时加入）PFG液1.合用于多种肽类抗原的固定，多用于免疫电镜研究2.对细胞抗原性和结构保存好3.配方：对苯醌20g，多聚甲醛15g，25%戊二醛40ml，0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液1000ml。PLP和PLPD液1.均含过碘酸盐2.对细胞抗原性和结构保存好，合用于富含糖类组织的固定Rossman液1.对糖原固定好，固定12-24h，用95%的乙醇洗2.配方：无水乙醇苦味酸饱和液90ml，甲醛10mlZenker液1．用于固定多种组织，对于病毒包涵体固定效果也较好2.使细胞核和细胞质染色清楚，常用于三色染色，对免疫球蛋白染色最佳3.不合用含血量较多的标本，如充血的脾脏和肺梗死等标本4.不能用金属容器盛放，且固定后不能用金属镊夹取。4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液1.合用于光镜免疫组织化学法，2.动物先用此液灌注固定，取材后再用该液浸泡固定3.可用于标本的较长时间的保存4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氧化钠1.合用于光镜和电镜免疫组织化学法，2.用于免疫电镜时，应加入新鲜配置的戊二醛。使其终浓度为0.5-1%3.性质温和，可长期保存组织。4．配置后PH值应调至7.2-7.4,4保存甲醛-钙液.合用于固定脂肪组织和组织化学染色乙醇-甲醛液有脱水作用，对皮下组织中肥大细胞的固定好乙醚-乙醇液渗透性强，固定效果好，用于细胞涂片的固定。去除甲醛色素：Verocay液脱汞盐结晶：Lugol液脱黑色素：0.25%高锰酸钾蓝化作用：稀氨水组织的脱水（一）乙醇乙醇脱水的浓度：70%—80%—90%—95%—100%进行糖原和尿酸盐结晶染色的标本应直接用无水乙醇固定，更换一次无水乙醇脱水即可。（二）丙酮与乙醇作用相似，但对组织块的收缩作用比乙醇更严重，快速脱水或固定兼脱水时应用，脱水时间为1-3h.丙酮可作为染色后的脱水剂，用于DNA和RNA染色。（三）异丙醇是乙醇的良好替代品，不含水，可代替无水乙醇使用，对火棉胶和染料不溶，因此不能用于火棉胶包埋和染料配制。（四）正丁醇和叔丁醇（电镜标本制作时常用作中间脱水剂。）正丁醇：无色液体，脱水能力较弱，可与水，乙醇和石蜡混合，因此，这种这种脱水的组织块可直接浸蜡包埋，叔丁醇：无毒，可与水，乙醇和二甲苯混合，与正丁醇相比，它不易使组织收缩或变硬，并且脱水后可不经透明直接浸蜡，（五）还氧已环还氧已环能于水和乙醇混合，也能溶解石蜡，可代替乙醇进行脱水，也可代替二甲苯进行透明，不引起组织收缩和硬化，用于制备植物标本较好，易挥发，价格昂贵。（六）四氢呋喃易于水，乙醇，丙醇和苯类混溶，对组织渗透快，易挥发，无毒，可用作封片溶剂，对染料不溶。（七）环己酮环己酮无毒，与苯，二甲苯，氯仿和石蜡混合，可代替无水乙醇脱水后直接浸蜡，组织块不会变硬。（八）松脂醇可取代无水乙醇用作脱水剂和随后的浸透与包埋。树脂包埋法合用于：不脱钙骨髓活检组织，肝、肾穿刺活检和淋巴结组织等。常用的特殊染色技术一结缔组织染色Mallory三色Masson三色胶原纤维，网状纤维蓝色绿色软骨，粘液，淀粉样淡蓝色神经胶质纤维，肌纤维红色红色髓鞘，红细胞橘红色橘红色显示胶原纤维，网状纤维，弹性纤维三联染色胶原纤维：红，网状纤维：黑，弹性纤维：绿色肌肉和红细胞：淡黄色二胶原纤维染色（一）显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法1试剂：Ponceau（丽春红）染色液：丽春红水溶液10-15ml，苦味酸饱和水溶液85-90mlVictoriablue(维多利亚蓝)：维多利亚蓝，70%乙醇2结果：胶原纤维：红，细胞核和血细胞：绿色肌肉：黄色3注意事项：①：Ponceau染色后。不能与水接触，直接用无水乙醇冲洗脱水②：胶原纤维切片的厚度需6um,③:Victoriablue染色液应盛染色缸内，进行染色。（二）天狼星红苦味酸染色法1.试剂：天狼星红饱和苦味酸液：0.5%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液,90ml天青石蓝液：天青石兰，铁明矾，蒸馏水，甘油，浓盐酸2结果：胶原纤维：红，细胞核和血细胞：绿色其他：黄色3注意事项：①：细胞核复染可以用Harris苏木精淡染②：必须用偏光显微镜观测三网状纤维染色（一）Gomori银染色法1.结果：网状纤维：黑色胶原纤维：红，背景：黄色3注意事项：①氨性银溶液：必须器皿洗干净，滴加氨水不能过量，冰箱保存②氧化液存放时间不能过长，以免失去氧化作用③丽春红复染用滴染方便，无水乙醇冲洗要倾斜（二）James染色法1.结果：网状纤维：黑色胶原纤维：红，背景：淡黄色3注意事项：①5%硝酸银使用时不能滴染②二氨银配制时，氨水要一滴一滴的加，以免浓氨水加的太多③甲醛液要新配制四：弹性纤维染色（一）维多利亚蓝染色结果：弹力纤维：蓝色细胞核：红色注意事项：配制的溶液放置2周成熟后使用（二）Gomori醛复红染色法1试剂：醛复红染液：碱性复红0.5g，浓盐酸1ml，70%乙醇100ml，三聚乙醛1ml室温下静置1-2日，待变为紫色即成熟，于冰箱保存备用。橘黄G染液：2：对特殊的蛋白质及含硫酸根的粘多糖有很强的亲和力，和弹力纤维结合很紧。对肥大细胞颗粒，脂褐素，HBsAg,胃主细胞，胰岛的β细胞，脑垂体的嗜碱性细胞也能很好着色。3固定液：以甲醛生理盐水固定的染色效果最佳。结果：弹力纤维深紫色粘液紫色五显示弹性，胶原纤维的双重组合染色结果：弹力纤维：蓝绿色胶原纤维：红色背景：淡黄色注意事项：维多利亚蓝液可每次反复使用，溶液在室温中保存可用数年。六肌肉组织染色（一）横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）1.结果：横纹肌蓝色胶原纤维，网状纤维：黄色或玫瑰红色心肌（缺血缺氧）：紫蓝色或棕黄色2．注意事项：①．此液经阳光解决数周后至数月才成熟，置冰箱内保存可使用数年时间。②．可加入0.15高锰酸钾，加快促使成熟③．95%乙醇分化时应注旨在切片上保存一定的红色，然后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。初期心肌病变组织染色（一）Nagar—Olsen结果：缺氧心肌，红细胞红色正常心肌黄色或黄棕色细胞核蓝色（二）Poley显示缺氧心肌染色法结果：缺氧心肌红色胞核紫色其他：绿色七：糖类染色糖原染色：过碘酸-Schiff(PAS)染色法1结果：糖原及其他PAS反映阳性物质红色细胞核蓝色2.注意事项：过碘酸是一种氧化剂染色前将Schiff试剂取出后，适应室温后再进行染色八．粘液物质（粘多糖）染色中性粘多糖多见于：胃粘膜的表面上皮，十二指肠腺，颌下腺，前列腺上皮，结肠的杯状细胞。强硫酸化粘多糖多见于：皮肤，动脉和肺、软骨、角膜及肥大细胞弱硫酸化粘多糖多见于：颌下腺、结肠、气管、支气管的杯状细胞粘液物染色用于：肿瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤，软骨粘液样纤维瘤、横纹肌肉瘤、动脉粥样硬化和胶原病及慢性胃炎的肠化（一）Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法1结果：中性粘液物质红色酸性粘液物质蓝色混合性粘液物质紫红色2注意事项：切片中不能涂白胶或火棉胶Schiff试剂保存于冰箱中备用，滴染法，用过的不能回收使用。阿尔辛蓝染色30分钟，或更长（二）Schiff阿尔辛蓝地衣红染色法1结果：胃粘膜肠化生上皮和胃肠肿瘤的酸性粘多糖：蓝色中性粘多糖：棕色2.注意事项：①高锰酸钾氧化液必须新配制使用②地衣红染色液冰箱保存，可反复使用③地衣红染色时间4h,阿尔辛蓝染色5分钟，时间不能长。九黑色素染色黑色素见于：恶性黑色素瘤，淋巴结肿瘤，色素性神经瘤，皮肤性淋巴结炎，皮肤异色病，红斑狼疮，扁平苔藓，神经性黑色素病变，假性黑变病色素的大肠，阑尾，小肠（一）Masson—Fontana黑色素浸银染色法结果：黑色素及嗜银细胞颗粒黑色胶原纤维红色背景浅黄色（二）Lillie亚铁染色法结果：黑色素暗绿色背景浅绿肌纤维和背景黄色注意事项：硫酸亚铁和铁氰化钾染色液需临用时配制，不能存放，也可使含铁血黄素呈阳性，可用结合铁反映法来鉴别十含铁血黄素染色Perlsblue(普鲁士南)反映显示三价铁结果：含铁血黄素蓝色其他组织浅红色注意事项：①器皿应洁净，操作中避免与铁接触，洗涤需用蒸馏水②陈旧标本染色效果不好，必要时可用0.25%高锰酸钾解决切片20-60分钟，再用草酸漂白。③组织固定不能使用酸性固定液。十一胆色素染色：三氯醋酸染色方法结果：胆色素绿色其他复染的红色或黄色注意事项：不合用的固定液：Helly，Zenker等含铬固定液纤维蛋白染色（一）MSB染色法（马休黄猩红蓝法）结果：纤维蛋白红色陈旧性纤维蛋白紫色细胞核蓝色红细胞黄色注意事项：可以使用Masson三色法进行对照染色亮结晶猩红6R染料可用酸性复红代替。（二）Gram甲紫染色法结果：纤维蛋白蓝黑色，背景红色淀粉样物质染色（一）刚果红染色法结果：淀粉样物质：红色细胞核蓝色注意事项：苏木精染色的细胞核不能深淀粉样物质可以结合偏光的方法得到良好的效果，其色彩呈绿色双折光性。无水乙醇有脱色作用，脱水后即用冷风干燥，再透明封固（二）Jurgens甲紫染色法：结果：淀粉样物质红色或紫红色细胞核蓝色真菌染色（一）Grocott六胺银染色结果：菌丝和孢子黑褐色，细胞核红色背景淡绿色（二）高碘酸复红染色法结果：真菌紫红色，红细胞浅黄色细菌染色一Gram碱性复红结晶紫染色法：结果：G+蓝色G—，细胞核红色，注意事项：①苯胺油苯酚复红液是一种不稳定的混合液，染色液表面易产生氧化结晶，染色应适当加热防止氧化物质污染切片。②二甲苯苯胺油分化后，必须用二甲苯洗除③结晶紫溶于乙醇，草酸铵溶于蒸馏水二Ziehl—Neelsen抗酸杆菌染色法结果：抗酸杆菌红色背景灰蓝色注意事项：①苯酚复红液，必须加温37℃-40℃,时，秩序染色15-20分钟②亚甲蓝复染后用95%乙醇快速分化，防止过度脱色三Warthin—starry胃幽门螺杆菌染色法结果：胃幽门螺杆菌呈棕黑色或黑色，背景淡黄色注意事项：1%硝酸银液内1h左右（温箱56℃）四螺旋体染色Giemsa染色法结果螺旋体及细菌呈蓝到淡紫色，细胞质呈蓝色，红细胞呈橘黄色注意事项：放入Giemsa染色工作液中需要8-18h或更长五HBsAg染色（一）Shikata地衣红染色法结果：HBsAg阳性呈棕色注意事项①高锰酸钾须新配制②地衣红染色液PH应为1.2-1.6（二）醛复红改良染色法结果：HBsAg阳性呈紫色，结缔组织呈红色，红细胞及基质呈黄色（三）维多利亚蓝染色法结果：HBsAg阳性呈蓝绿色，细胞核红色注意事项：①维多利亚蓝染液中需放置12-24h.神经组织染色神经细胞尼氏小体染色法（一）焦油紫染色法结果：尼氏小体紫色胶质细胞淡紫色背景无色(二)Einarson棓酸青蓝染色法结果：尼氏小体黑蓝，紫色核蓝色背景浅灰色（三）甲苯胺蓝染色法：结果：尼氏小体深蓝色核淡蓝色背景无色神经纤维染色方法（一）Hol,mes神经纤维染色方法结果：神经纤维黑色背景灰紫色（二）Bielschowsky神经纤维染色结果：神经纤维黑色背景紫色（三）VonBraunmubl神经纤维，扣结，老年斑染色方法结果：神经纤维和扣结黑色老年斑黑色背景浅灰色（四）Eager退变神经纤维的染色方法结果：退变神经纤维黑色背景浅棕色神经髓鞘染色方法（一）Weigert髓鞘染色方法结果：髓鞘黑紫色，背景：淡灰色（二）Weil髓鞘染色方法结果：髓鞘蓝黑色，背景：淡灰色（三）Kultshitzky髓鞘染色方法结果：结果：髓鞘蓝黑色，背景：淡黄色（四）Luolfastblue髓鞘染色方法结果：髓鞘蓝色核仁紫色尼氏小体紫色（五）变色酸2R--亮绿髓鞘染色方法结果：神经髓鞘呈深红色；轴索和间质呈绿色，脱髓鞘纤维不着色。注：变色酸2R染液浓度在0.3﹪～0.6﹪为好，可根据质量不同而增减。染色液置4℃冰箱内保存，可反复使用，用前回温。（六）Marchi退变髓鞘染色方法结果：退变髓鞘黑色背景浅棕色（七）锇酸α—萘胺结果：变性髓鞘及脂肪：黑色正常髓鞘红色红细胞淡红色结缔组织蓝色神经胶质细胞染色方法（一）Cajal星形细胞染色方法（冷冻切片）结果：原浆形及纤维性星形细胞紫黑色（二）Naounenko和Feigin改良的Cajal染色方法（石蜡切片）结果：星形细胞紫黑色背景粉红色（三）Weil及Davenport小胶质细胞及少胶质细胞染色方法结果：神经胶质细胞及少突胶质细胞黑色背景黄棕色（四）Naoumenko及Feigin小胶质细胞石蜡切片染色方法结果：小胶质细胞：黑色背景灰色神经内分泌细胞染色亲银反映（一）lillie—Masson二胺银染色方法结果：亲银细胞颗粒黑色细胞核红色背景淡灰黄色（二）Gomori—Burtner六胺银法结果：亲银细胞黑色背景细胞浅红色嗜银反映：（一）DeGrandi改良硝酸银反映法结果：嗜银细胞颗粒棕黑色胞核红色（二）碱性重氮反映：结果：嗜银细胞颗粒橘红色至红色细胞核蓝色胞质黄色嗜铬细胞染色（一）Giemsa改良染色方法结果：嗜铬细胞红色至紫红色皮质细胞蓝色红细胞粉红色（二）Wiesel染色方法结果：嗜铬细胞黄绿色细胞核红色其他蓝色肥大细胞染色一甲苯胺蓝改良染色方法结果：肥大细胞：红紫色细胞核蓝色二醛复红法结果：肥大细胞颗粒深紫色红细胞橘黄色其他黄色DNA染色（Feulgen法）结果：DNA紫红色细胞质及其他成分绿色①②③④⑤⑥染色方法胶原纤维，网状纤维软骨，粘液，淀粉样神经胶质纤维，肌纤维髓鞘，红细胞结缔组织染色Mallory三色蓝淡蓝红黄Masson三色绿红黄显示胶原纤维，网状纤维，弹性纤维三联染色胶原纤维网状纤维弹性纤维肌肉和红细胞红黑绿黄胶原纤维染色胶原纤维细胞核和血细胞肌肉显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法红绿黄天狼星红苦味酸染色法红绿黄网状纤维染色网状纤维胶原纤维背景Gomori银染色法黑红黄James染色法黑红淡黄弹性纤维染色弹力纤维细胞核粘液背景维多利亚蓝染色蓝红Gomori醛复红染色深紫紫显示弹性，胶原纤维的双重组合染色蓝绿色胶原纤维红色淡黄色横纹肌组织染色横纹肌胶原纤维，网状纤维心肌（缺血缺氧）Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝黄色或玫瑰红色紫蓝色或棕黄色初期心肌病变组织染色缺氧心肌，红细胞正常心肌细胞核其他Nagar—Olsen红黄或黄棕色蓝Poley缺氧心肌染色法红紫绿糖类染色糖原及其他PAS反映阳性物质细胞核过碘酸-Schiff(PAS)红蓝粘液物质（粘多糖）染色中性粘液物酸性粘液物混合性粘液物Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）红蓝紫红Schiff阿尔辛蓝地衣红棕蓝黑色素染色黑色素及嗜银细胞颗粒胶原纤维背景肌纤维Masson—Fontana浸银染色黑红浅黄Lillie亚铁染色暗绿色浅绿黄含铁血黄素染色含铁血黄素其他Perlsblue(普鲁士南)蓝浅红胆色素胆色素其他不合用的固定液：Helly，Zenker等含铬固定液三氯醋酸染色方法绿红或黄纤维蛋白染色纤维蛋白陈旧性纤维蛋白细胞核红细胞背景MSB染色法（马休黄猩红蓝法）红紫蓝黄Gram甲紫染色法蓝黑红淀粉样物质染色淀粉样物质细胞核刚果红染色法红蓝Jurgens甲紫染色法红或紫红色蓝真菌染色菌丝和孢子背景细胞核红细胞Grocott六胺银染色黑褐淡绿红高碘酸复红染色法紫红浅黄色细菌染色幽门菌抗酸杆菌G+G—背景Gram碱性复红结晶紫染色法蓝红Ziehl—Neelsen抗酸杆菌染色法红灰蓝色Warthin—starry胃幽门螺杆菌染色法棕黑或黑淡黄色染色方法项目螺旋体染色螺旋体细菌细胞质红细胞Giemsa染色法蓝到淡紫色蓝橘黄色HBsAg染色HBsAg颗粒细胞核红细胞结缔组织Shikata地衣红染色棕色醛复红改良染色法紫色黄红维多利亚蓝染色法蓝绿色红神经细胞尼氏小体染色法尼氏小体核背景胶质细胞焦油紫染色法紫无色淡紫Einarson棓酸青蓝黑蓝—紫色蓝浅灰色甲苯胺蓝染色法深蓝色淡蓝无色神经纤维染色方法神经纤维背景老年斑扣结Holmes神经纤维黑灰紫Bielschowsky神经黑紫VonBraunmubl神经纤维，扣结，老年黑浅灰色黑Eager退变神经纤维黑色浅棕色神经髓鞘染色方法髓鞘背景核仁尼氏小体Weigert髓鞘染色方黑紫淡灰Weil髓鞘染色方法蓝黑淡灰Kultshitzky髓鞘染蓝黑淡黄Luolfastblue蓝紫紫髓鞘脱髓鞘纤背景轴索间质变色酸2R--亮绿髓鞘深红不着色绿色Marchi退变髓鞘染色方法黑色（退变）浅棕色锇酸α—萘胺黑色（变性）红色（正常）红细胞（淡红）结缔组织（蓝色）神经胶质细胞染色方法原浆形及纤维性星形细胞神经胶质细胞少突胶质背景小胶质细胞Cajal星形细胞（冷冻）紫黑色改良的Cajal染色紫黑色粉红Weil及Davenport小胶质细胞及少胶质细胞黑色黄棕Naoumenko及Feigin小胶质细胞灰黑色神经内分泌细胞染色亲（嗜）细胞颗粒细胞核背景胞质亲银反映lillie—Masson二胺银黑红淡灰黄GomoriBurtner六胺银法黑浅红嗜银反映DeGrandi改良硝酸银反映棕黑色红碱性重氮反映橘红色至红色蓝色黄色嗜铬细胞染色嗜铬细胞皮质细胞红细胞细胞核Giemsa改良红色至紫红色蓝粉红Wiesel染色方法黄绿色蓝（其他）红色肥大细胞染色肥大细胞细胞核红细胞其他甲苯胺蓝改良红紫色蓝色醛复红法深紫色橘黄黄DNA染色DNA细胞质Feulgen法紫红色绿色免疫细胞化学技术标记物应具有以下的特点：①能与抗体形成比较牢固的共价键结合②不影响抗体与抗原的结合③放大的效益高④发光火显色反映要在抗原与抗体结合的原位并且鲜明，有良好的对比。抱负的标记酶：①酶的活性高并且稳定②终产物稳定，不扩散，有良好的定位③酶与抗体和结合不影响Ag—Ab的特异性反映④在组织与体液中不存在内源性的酶底物效果好又应用最多的是辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶异硫氰酸荧光素：为明亮的黄绿色荧光四甲基异硫氰酸罗丹明：为橙红色荧光免疫组织化学重要染色方法的原理（一）直接法（又称一步法）特异性高，敏感性低原理：用已知的特异性抗体与荧光素或酶结合，直接与待测组织中的抗原反映。特点：将荧光素或酶标记在第一抗体上（二）间接法（又称夹心法）原理：第一步：以未标记的特异性抗体（第一抗体）与组织或细胞中的抗原反映，洗去未与抗原结合的第一抗体后，第二步：再以荧光素或酶标记的第二抗体与第一抗体结合，如何进行显色或荧光检查。特点：将荧光素或酶标记在第二抗体上优点：①不用标记第一抗体②第一抗体的工作稀释度高③敏感性增强④应用范围更广⑤特异性低于直接法（三）未标记抗体法1酶桥法酶桥法使用的三种抗体中的第1，第3两种抗体为同种动物所产生。在染色的关键是第2抗体（桥抗体）必须以较高的浓度过量使用优点：提高了反映的敏感性，缺陷：背景染色较重。2PAP法将游离酶和抗酶抗体在使用前先制成稳定的酶—抗酶抗体复合物，在稀释后使用。PAP法的关键在于①PAP复合物中的抗酶抗体必须与第一抗体为同种动物所产生。②第2抗体（桥抗体）必须过量（四）亲和素—生物素方法1亲和素—生物素—过氧化物酶复合物技术（ABC）通过ABC复合物中亲和素桥梁的作用，将ABC复合物与生物素化的抗体结合在一起，达成检测抗原的目的。与PAP法比较，ABC法最大的优点是敏感性高，是PAP法的20-40倍另一方面是背景清楚。SP法与ABC法比较，特异性更高2酶标亲和素—生物素技术（BALAB）制备生物素化抗体和酶标亲和素，运用生物素—亲和素的亲和作用，将酶标亲和素连接到抗原抗体复合物上，以显示被检测的抗原。3桥联亲和素—生物素技术（BAB，BRAB）是用生物素分别标记抗体和酶，然后以亲和素为桥，将两者连接在一起对照常用的对照方法涉及：阳性对照，阴性对照，阻断实验，，空白对照，替代对照，自身对照，吸取实验阳性细胞的染色特性：阳性细胞染色分布有3种类型：胞质，细胞核，细胞膜表面阳性细胞可分为灶性和弥漫性染色强度不一可定位于单个细胞，且与阴性细胞互相交杂分布。切片边沿，刀痕或皱褶区域，坏死或挤压的细胞区，胶原结缔组织等表现为相同的染色强度，不能判断为阳性免疫荧光细胞化学染色方法荧光抗体法：用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法荧光抗原法：用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法对照：抗原对照，抗血清对照，灭活补体对照。染色结果判读对照实验：①吸取实验：应用尚无文献报道的抗血清/自己制备的抗血清进行IHC染色时，需用相应的饱和抗原吸取血清后，在孵育标本。判断结果的可信性（结果应为阴性）②交叉实验③替代实验④置换实验⑤阳性对照动物实验技术实验动物的抓取一小鼠用左手拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，其余三指和手掌心夹住背部皮肤和尾部小鼠的灌胃针长4-5cm,直径1mm.插入深度为3-4cm,常用灌胃量0.2-0.8ml皮内注射量：最多不得超过0.05ml.皮下注射部位：背部肌内注射：股部腹腔注射：0.1-0.2ml/10g静脉注射：多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张，4号细针一次注射量为0.05-0.1ml/10g，尽也许从尾端开始向尾根部移动注射，脑内注射：0.02-0.03ml注射针垂直刺入2-3mm,二大鼠大鼠捉持方法与小鼠相似。大鼠容易被激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套。另一种方法：张开左手虎口，迅速将拇指，食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中端，并使其保持仰卧位，之后调整左手拇指位置，紧抵在下颌骨上。大鼠的灌胃针长6-8cm,直径1.2mm.插入深度为4-6cm,常用灌胃量1-4ml皮内注射量：最多不得超过0.1ml.皮下注射部位：背部，左侧下腹部肌内注射：股部腹腔注射：1-2ml/100g静脉注射：多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张，4号细针一次注射量为0.05-0.1ml/10g，尽也许从尾端开始向尾根部移动注射，脑内注射：0.03-0.05ml注射针垂直刺入2-3mm,三家兔一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿势。切不可用手握持双耳提起兔子家兔的固定：盒式固定：常用于经口给药，兔耳血管注射、采血或观测兔耳血管变化等。台式固定：常用于颈部，胸部手术，兔静脉采血或测量血压，呼吸等实验架式固定：常用作热原值实验一次灌胃能耐受的最大容积兔为80-150ml猫为50-150ml皮内注射量：最多不得超过0.1ml.皮下注射部位：背部或耳根部肌内注射：两侧臀部或股部肌肉腹腔注射：5ml,部位：下腹部近腹白线左右两侧约1cm处。静脉注射：耳缘静脉注射脑内注射：0.05-0.1ml注射针垂直刺入3mm,兔，猫致死法：空气栓塞法：静脉内注入20-40ml空气即可致死。四犬要用特制的钳式长柄犬夹夹住颈部，使犬头向上，颈部拉直，再套上犬链。急性实验用犬，可用犬夹夹住犬颈部后，将它压倒在地，由助手将其四肢固定好。实验需要麻醉时，把麻醉完善后的犬固定在手术台或实验台上，应及时解去嘴上的带子，以利动物呼吸，避免由于鼻腔被粘液阻塞而导致窒息。一次灌胃量不能超过200ml皮下注射部位：大腿外侧肌内注射：两侧臀部或股部肌肉腹腔注射：5-10ml，部位：脐后腹白线侧1-2cm静脉注射：前肢，皮下，头静脉或后肢小隐静脉注射大鼠和小鼠的采血方法1尾尖采血2眼眶后静脉丛采血3摘眼球采血4断头采血5颈静脉和颈动脉采血6股静脉和股动脉采血7心脏采血:用左手触摸左侧第3-5肋间处，选择心脏冲动最明显处穿刺，一般选择胸骨左缘外1cm第4肋间用6号半针头的注射器，垂直刺入心脏，可随针接触心脏的感觉随时调整刺入方向和深度豚鼠采血方法1心脏采血2耳缘采血3足静脉采血兔的采血方法1耳（中央）动脉采血2耳缘静脉采血3外颈静脉采血4颈动脉采血5股静脉采血6心脏采血（不超过20-25ml）犬的采血方法1前后肢皮下静脉采血2股动脉采血3心脏采血4颈静脉采血5耳缘静脉采血羊的采血方法1颈静脉采血2前后肢皮下静脉采血一般一次可取50-100ml实验动物用药量的拟定1药物剂量按mg/kg或g/kg计算2用药量未知时可先用致死量的1/10—1/5进行尝试。3动物的耐受性比人大。假设人的用药量为1，小鼠，大鼠尾25—50，兔、豚鼠为15-20，犬、猫为5-104给药途径不同，所用剂量也不同5根据动物年龄不同给不同的剂量。实验动物处死措施大鼠和小鼠：1脊椎脱臼法2断头法3击打法4急性大失血法5化学致死法犬、猫、兔、豚鼠1空气栓塞法2急性失血法3破坏延髓法4开放性气胸法5化学药物致死法实验动物表面麻醉常用：利多卡因对大鼠进行吸入麻醉应选用：乙醚实验动物的编号，标记和被毛去