2023-2024免疫细胞疗法行业发展白皮书

癌症（包括乳腺癌、结直肠癌、肺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等）死亡率下降了33%，直国内外以PD-1/PD-L1为代表的免疫检查点抑制剂药物的成功上市，已经证明了免疫治疗策略临床转化的潜力和商业价值。而除了用药物解除肿瘤细胞对免疫细胞的抑制，另一个思路在于，直接利用人体内的免疫细胞，将它们在体外进行改造，大量复制后再回输到患目前全球CAR-T（全称为嵌合抗原受体T细胞）产业发展迅速，已有10款CAR-T产品制备成功率不稳定等，这些痛点也给CAR-T产品的临床应用带来重大阻碍，尤其是在欧随着CAR-T市场的爆火、CAR-NK、TIL、TCR-T、CAR-M、Treg等细胞疗法也随即带火，TIL、TCR-T也有数十家，相信随着Iovance的TIL疗法与Adaptimmune的TCR-T疗法申请上市并步入商业化，该领域即将迎来前所未有的聚光灯。相比之下CAR-M、Treg国内仍处在相对早期的阶段，但也有企业敢于做先行者，如布局CAR-M赛道的赛元生物、元迈细胞、鲲石生物、巨世康济，布局Treg的毕诺济生物、伯汇生物、泽安生物以及普米总体而言，细胞疗法这一构想确实令人期待，但面对诸多关键性问题需要谨慎，包括可能实现大范围的“通用”、基因编辑过程中的脱靶效应、以及有效性以及持久性能否匹 2.1CAR-T疗法 2.3CAR-M疗法 4.5逻辑门控CAR-T 4.6工程化装甲CAR-T 附表1：布局实体瘤CAR-T的国内企业 附表2：布局通用型CAR-T的国内企业 附表3：布局NK/CAR-NK的国内企业 附表4：布局CAR-M的国内企业 附表6：布局TCR-T国内企业 2012年,在CarlJune的一项针对儿童B细胞急性淋巴细胞白血病的CAR-T临床试验中,一个名叫Emily的急性白血病患儿在二次复发无药可治的情况下，通过靶向CDI9的CAR-T治疗，三周后肿瘤完全消失。至今Emily依然健康的活着，可以说CAR-T创造了2017年美国FDA批准了两项靶向CD19的CAR-T细胞疗法上市，即诺华的Kmriah和leukemia，ALL)和特定类型的非霍奇金淋巴瘤(non截止2024年第一季度，全球CAR-T获批上市的产品共计11款，其中国内占据5款，海（已上市CAR-T产品历年销售额）FDA受理并获得优先审评资格，PDUFA日期（FDA对新药申请的目标批准日期）定在今年8月4日，用于治疗晚期滑膜肉瘤。这意味着2024年也有据统计，2023年国内细胞治疗领域共有72款免疫细胞疗法获得IND临床申报受理；2024年第一季度的免疫细胞疗法中，有28款免疫细胞疗法取得临床申报进展，IND临床申报受理共计10款，17款获批临床，科济药业的泽沃基奥仑赛注射液获批上市，成为第一季一个比较有趣的现象是，在有临床进展的28条管线中，CAR-T仅占9款，占比较去年有进一步降低的趋势，也侧面证明了免疫细胞疗法不断向细分领域多样化、差异化发展。得益于前沿科技的进步与产品设计与生产技术的不断突破，以及TIL、TCR-T等多种疗法成药路径的走通，免疫细胞药物赛道从CAR-T单一竞品已经转变成CAR-T、TCR-T、TIL、NK、CTL等多种差异化的新型免疫细胞疗法并驾齐驱的发展趋势，今年还涌现了诸如混合活化杀伤（MAK）细胞、PD-1基因编辑T细胞等新型细胞治疗分类，呈现出百家争鸣嵌合抗原受体(CARs），也被称为嵌合免疫感受器、嵌合T细胞受体或人工T细胞受体。科学家从人体中提取T细胞后，对其进行基因改造使之能表达CAR，CAR使T细胞具有靶向特定蛋白的能力，这种表达CAR的T细胞输注入患者体内后，能直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而被激活，从而更有效地靶向和消灭癌细胞。提取的T细胞既可以输注入患者体内的CAR-T细胞就像对抗癌细胞的“活性药物”，当它们接触到细胞上的目标抗原时，CAR-T细胞与之结合并被激活，然后开始增殖并产生细胞毒性。CAR-T细目前，上市的CAR-T细胞疗法都是自体的，已经形成相对标准的制造和治疗过程，包括最初分离和富集T细胞、制备CAR-T细胞（包括T细胞活化、T细胞扩增、使用病毒或非病毒载体系统进行CAR基因转移），然后进行体外CAR-T细胞扩增，以及制成的细胞CAR-T细胞治疗流程(CAR-T细胞的激活和对肿瘤的杀伤原理图)自然杀伤细胞（NK细胞）在人体的先天免疫系统中起着重要的作用，早在上个世代，科研人员就对它们进行了描述，但直到最近的15年，人们才逐渐了解NK细胞在帮助抗击癌症和其它疾病方面的复杂性和治疗潜力。NK细胞是人体先天免疫系统的一部分，NK细胞疗法现已经成为一个炙手可热的领域。目前，各种提高NK细胞效应功能的途径已经被开发。包括基因修饰的NK细胞正在被研究作为改善过继性NK细胞疗法抗肿瘤活性的手段，例如，CAR-NK细胞、具有修饰形式的CD16的NK细胞（例如Fate公司的FT516，在iPSC来源的NK细胞表面表达不可裂解的CD16Fc受体，从而优化了ADCC）、敲除CD38的NK细胞（可以在用针对该蛋白的单克隆抗体治疗期间预防中ADCC相关的自损伤）、和将编码CAR分子的基因元件定点插入iPSC基因组中的iPSC-CAR-NK（具有更强的肿瘤特异性、靶向性和细胞毒性,同时实现低价与通用NK技与其他CAR细胞疗法中使用的细胞类型不同，巨噬细胞在免疫抑制性微环境中更容易浸润肿瘤。作为一种先天免疫细胞，本质上具有广泛的治疗效应功能，包括主动转运到肿瘤部位、直接吞噬肿瘤、重塑肿瘤微环境及呈递抗原等。尽管CAR-M与CAR-T和CAR-NK细胞结构相似，但巨噬细胞的特性赋予了CAR-M细胞独特优势，主要为以下三点：1.T细胞的浸润受到了由肿瘤细胞周围基质构成的物理屏障阻碍，而浸润后T细胞被免疫抑制而无法发挥效应；而巨噬细胞可以轻松侵入肿瘤环境中。肿瘤相关巨噬细胞CAR-M能降低TAM的比例，影响TAM的细胞表型，对肿瘤的治疗有积极作用；2.CAR-M不仅可以吞噬肿瘤细胞，还具有促进抗原提呈能力和增强T细胞杀伤的作用；3.相较于CAR-T，CAR-M的循环时间有限，非肿瘤靶向毒性较小。然而，全球CAR-M疗法研究起步较晚，最早于2020年3月才首次公开亮相。作为细胞治首先，巨噬细胞作为机体对抗病毒/微生物入侵的主力军分困难；其次，由于巨噬细胞在体内的迁移特性，注射后，外源性巨噬细胞通过肺部，将加剧患者自身的损耗，其中巨噬细胞常因放化疗、靶向制剂的应用而耗竭。加之巨噬细胞不会增殖，患者只能接受有限数量的巨噬细胞，自体来源的单核细胞无论在活性及数量上都难以支持CAR-M的应用；另外，由于肿瘤细胞的高度异质性，靶抗原的表达可能不够，目前集中于CD19和HER2。巨噬细胞如果在体内被过度激活，其分泌的IL-1、IL-6等白介素因子很可能会造成细胞因子释放综合征反应。此外，人类实际的肿瘤微环境要比动物模型复杂得多，在小鼠模型中取得了很好的效果的CAR-M，进尽管如此，CAR-M在实体瘤中的潜力仍被看好，随着技术的迭代以上难题正被逐个攻Bio、ThunderBiotech、赛元生物、元迈细胞、鲲石生物、巨世康济等，其中Carisma与Myeloid的CAR-M管线已迈入1期临床，进展较为快速。T细胞受体工程化T细胞（TCR-T）治疗是一种新型的过继细胞治疗方法，主要是利用基因编辑技术，将能特异性识别肿瘤抗原的T细胞受体（TCR）基因导入患者T细胞内，具有异质性TCR的T淋巴细胞可以识别肿瘤细胞上的HLA肽复合物，并通过基于免疫酪氨酸的激活基序（ITAM）的磷酸化传递抗原刺激信号，激活T细胞的免疫作用以消除肿瘤（图示说明：TCR的结构）TCR-T技术在发展过程中经历了四次迭代：第一代TCR-T是从患者T细胞中分离出肿瘤抗原特异性识别的T细胞亚群，经体外扩增第二代TCR-T是通过克隆上述肿瘤抗原特异性识别的T细胞，获取其TCR基因序列，再转导至患者的外周T细胞上，这种方法使得TCR-T产业化成为可能；第三代TCR-T是通过优化TCR的亲和力，使其能够更好地识别肿瘤抗原，再将其转导至患者T细胞上，整体提高TCR-T的成药性；第四代TCR-T是靶向肿瘤新抗原（neoantigen）的TCR-T目前主要的优化方向包括TCR-T靶抗原的系统选择、肿瘤抗原异质性的影响以及TCR基因转移的安全性问题。同时，随着概念和技术的发展，产生了新的基因工程方法来增强TCR-T细胞功能并优化抗肿瘤免疫反应。相比与CAR-T，TCR-T能够识别肿瘤内肿瘤浸润淋巴细胞TIL疗法首先需要对患者的肿瘤组织进行基因测序，找到特定的基因突变，然后从肿瘤组织中筛选出能够特异性识别基因突变癌细胞的淋巴细胞，然后在体外对患者在输注前接受了可逆的淋巴细胞清除性化疗方案。该步骤消除了促进生长的细胞因子TIL疗法也面临着三大主要局限。其中一个就是TIL的抗肿瘤作用通常是短暂的，因为肿瘤细胞能够适应并逃避TIL检查机制，通过释放抗炎因子来抑制肿瘤免疫应答。通过科研），没有活性。并且，TIL是一种个性化的过继性细胞疗法，其制备过程较为复杂，同时活性细胞数量的要求也更高，以百千亿计，而CAR-T的剂量大约是1亿个细当然，TIL疗法也拥有许多独特的优势，使其在与CAR-T等明星细胞疗法的竞争中不落下风。TIL疗法的主体免疫细胞来源于患者的肿瘤组织，对比于其它从血液来源的免疫细都需要经过工程化将CAR/TCR转入T细胞中，使其具有特异性靶向肿瘤细胞能力，TIL针对目前TIL疗法存在的难点，研发企业在改进TIL的来源、结合基因编辑技术、优化Tregs细胞是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，主要可以分为自然调节性T细Tregs的作用机制复杂，整体来说可以主要分为4大类型：①分泌抑制性细胞因子（如TGF-β、IL-10等）以及利用穿孔素、颗粒酶杀死细胞；②能够表达CTLA-4和PD-1等介导免疫抑制作用；③参与新陈代谢过程，发挥抑制作用；④通过刺激性和抑制性受体（CTLA-4或LAG3）诱导DC耐受。已有多款Tregs、CAR-Tregs疗法进入临床，这一疗法主要针对的适应症是自身免疫性疾病（如移植物抗宿主病、多发性硬化症、炎症性肠病等）、器官移植和肿瘤免目前为止，在器官移植排斥反应、GVHD等疾病领域，使用Treg细胞治疗的早期临床试验结果显示是非常有前景的。在肿瘤免疫中，效应免疫细胞和Treg细胞犹如鸟之双翼，目前的临床试验表明，CAR-T治疗后最常见的副作用是免疫激活导致的细胞因子风暴大量释放细胞因子，由细胞因子产生连锁反应。其来源包括靶细胞本身和被募集至肿瘤部位的免疫细胞。这种连锁反应会导致免疫细胞的过度活化，例如巨噬细胞，通过正反馈调MCP-1释放，其中IL-6是CRS主要的炎症介质，可导致患者出现诸多副作用如：过度炎（细胞因子风暴（CRS）产生机理）此外，在CRS症状期间或后期，还易引发免疫效应细胞相关神经毒性综合征（Immunesyndrome,ICANS）。CAR-T细胞能突破血脑屏障，而周细胞表达CD19被CD19CAR-T攻击，加剧血脑屏障的破坏，大量CAR-T进入中枢神经系统，引发更严重的神经毒性。患者最初会出现震颤、意识水平变化、书写困难、轻度表达性失语、运动减弱、癫痫等症状，其中表达性失语是ICANS的特异性症状。（CD19CAR-T攻击周细胞引起神经毒性的机制）目前对于是否可以用于预防CRS或降低CAR-T细胞的功效尚不清楚。早期ICANS症状常表现为局部的神经系统受损，可采用抗癫痫预防措施。2级或以上ICANS可使用皮质激素或地塞米松，是ICANS治疗的主要手段，遵循最低治疗剂量、最短治疗时间、快速减量的原则。病情特别严重者可予甲泼尼龙每天1g的方案冲击治疗肿瘤细胞与正常细胞有很多共同点，CAR-T疗法在攻击肿瘤细胞时会出现难以控制的攻严重时危机患者生命。脱靶效应的产生限制了CAR-T疗法的发展，研究人员也在探讨1）双（多）特异性CAR-T细胞研发能同时靶向两种抗原的CAR分子，最常见的例子即串行(tandem)CAR-T细胞，即tanCAR-T，即将靶向两种抗原的识别域（可能通过linker，比如G4S）连接起来。或者利用能靶向不同抗原的CAR/TCR作为共刺激信号，这种方法通常会依赖一些相对复杂的胞2）mCAR-T细胞mCAR-T细胞的CAR受体额外多出了一个掩蔽肽和蛋白酶敏感接头。掩蔽肽会遮住抗原识别域，经蛋白酶水解后切去掩蔽肽，才可将其暴露。该方法利用了肿瘤微环境中富含蛋白酶的特点，提高了靶向精度，避免了脱靶效应，且其抗肿瘤效果与一般CAR-T细胞相3）NASCAR-T细胞NASCAR全称“肿瘤靶向性等位基因敏感CAR”，是针对一种较常发生在肿瘤/癌转化且通常涉及抑癌基因，可以利用LOH很好地将正常细胞与癌细胞区分开来。针对LOH的发生进行编程则能够提高CAR-T细胞的精确性，这就是将CAR和异质性CAR(iCAR)同时引入CAR-T细胞，其中iCAR携带类似PD-1或CTLA-4的胞内域。在通过CRISPR技术人为制造的含有LOH的癌细胞系中，NASCAR-T细胞显示出良好抗肿瘤效能。4）逻辑门控CAR-T很多研究人员试图应用布尔逻辑门控（BooleanLogicGate,包含AND,OR,NOT）方法对CAR-T细胞进行预防毒性。布尔逻辑门控技术的T细胞有两种CAR，针对两种肿瘤特异性抗原（TAA两种CAR带有不同的传导信号激发因子。只有两种CAR同时结合两种TAA，才能共激发对肿瘤杀伤效应的信号转导称为AND；一旦结合一种正常细胞表达的抗原就不激发称为NOT；结合一种TAA就激发称为OR。这种逻辑门CAR-T可以保护只表达一种目标抗原的正常组织，扩大CAR-T细胞靶向的分子范围，在实体瘤的治疗中能够提高特异性和安全性，具有很大的发展前景。此外，这项工作表明，细胞的内部信号机目前临床应用的大多数CAR-T细胞都含有源自鼠单克隆抗体(mAb)(92)的抗原识别结构域。患者的免疫系统可能识别出这些小鼠的成分是外来的而导致过敏反应，通常出现在反复使用CAR-T细胞的患者身上。降低CAR-T细胞免疫原性的两个主要策略包括：1）在构建CAR时使用完整的人类序列取代鼠序列，首次使用全人源CD19导向的CAR-T细胞治疗时，产生的anti-CAR特异性T细胞反应比接受含有小鼠来源scFv的CAR-T细胞显移植物抗宿主病(GVHD)是指异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）后，受者在重建供者免疫的过程中，来源于供者的淋巴细胞攻击受者脏器，导致多系统损害的全身性疾病，会影响皮肤、食管、胃肠，肝脏等，严重时危及生命，常由供、受者HLA抗原不匹配而引起。目前管理同种异体CAR-T细胞并降低GvHD的风险策略有：使用来自干细胞移植供体的同种异体CAR-T细胞、使用病毒特异性记忆T细胞、使用非αβT细胞和基因编辑使αβT细胞中的TCR缺失。1)使用干细胞移植供体同种异体CAR-T细胞可以在不增加GvHD风险的情况下增强移植2)T细胞可以提供针对病毒性疾病的保护且没有GvHD临床症状。目前从健康供体中过继3)设计完全避免使用αβT细胞的细胞类型来携带CAR。在临床前模型中，用CD19定向CAR改造的iNKT细胞通过靶向表达在淋巴瘤细胞上的CD19和CD1d具有很强的抗淋巴瘤特性。鉴于同种异体iNKT细胞抗GVHD的保护作用，CARiNKT细胞具有极大的研4)基因编辑。克服GvHD最简单的方法是把回输T细胞的DNA中表达TCR受体的基因（TCRα亚基或β亚基）敲除。由于αβTCR是T细胞同种异体反应的决定因素，因此使用基因编辑手段如：ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9来防止功能性TCR在αβT细胞因为目前CAR-T这种个性化疗法在客观上无法批量化制备产品，同时还需单批次的检测放行，因此GMP制备平台需要充分考虑和规避单批次生产放行带来的批次间混淆或交叉的风险，质控和检测成本上也无法形成规模化摊销，这使得这一治疗策略固有成本相对高而对于现有的通过了临床和监管检验的自体CAR-T产品，则要从其生产工艺方面入手。CAR-T细胞复杂的生产流程对GMP和生产工艺有着极高的要求，这种GMP厂房的复杂程度远高于传统的GMP厂房，建设和运营成本也更高。另外，目前整个生产工艺过程中基于手工工艺的开放式生产带来的占地面积大、污染风险、产品一致性差异、耗时长且细因此，CAR-T细胞的生产需要全程自动化、封闭式的工艺系统。事实上，在CAR-T产品上市之后，两家拥有商业化CAR-T产品的公司(诺华和吉利德/Kite)都经历了从手动到自动化、封闭式的工艺转变，布局先进的细胞疗法制造设施网络形成自己的竞争优势，减少周转时间利于患者获得及时治疗。目前，行业内一些领先的服务商已经能够提供这样的（CAR-T生产过程的质量控制要素）细胞治疗产品与传统肿瘤药物有着很大区别，使得CAR-T这类基因/细胞疗法的高价设定具有许多额外的复合因素。首先，CAR-T是“活“的药物，是体外修饰过的活细胞，回输到病人体内后在杀伤肿瘤的同时自身还会扩增，从而可以更强劲和长效地清除肿瘤细胞。CAR-T细胞疗法从临床研究走向商业化，不仅要向监管机构证明其安全性和有效性，作为“活“的药物，对制造工艺的要求、供应链管理的复杂性等都远远超出传统药物，原其次，目前获批的CAR-T产品都是自体CAR-T细胞，属于完全个性化的定制疗法（每个患者都是单个生产批次，无法进行批量生产），传统药自体CAR-T生产中难以实现。CAR-T细胞疗法的生产成本主要由设备、原材料、人工三方面构成。其中，CAR-T细胞制备涉及T细胞分离、激活等步骤，需用到血细胞分离淘洗机等多种设备、试剂及耗材，关键设备及试剂供应商多来自跨国公司。其次，生产环节中质粒、病毒和细胞三部分原材载体是CAR-T细胞生产过程中的关键原材料，但慢病毒因成本高、收率低、活性容易丧失等因素，致使CAR-T制备过程及质量控制需注入大量资金及人力投入。目前，全球仅有Oxford等少量头部CDMO企业具有病毒载体制备的核心技术和稳定的规模化生产工艺，且原材料出厂价非常昂贵。国内上市的CAR-T产品，原材料也要靠进口，生产成本高，CAR-T细胞制备对工艺要求极高，每一步骤都是“精细活”，耗时耗力，难以扩大，实验室工作人员也须经长时间的培训才能上岗，总体人员运行成本远超传统药物的生产。定制化自体CAR-T产品需要专人进行制备，每个患者在单采血后要等待制备周期结束才可在整个制药行业中CAR-T细胞治疗产业的供应链体系最为复杂，对生产的稳定性和快速交付的要求更高。CAR-T细胞治疗企业会自建物流监管信息化系统，并通过该系统全程监控CAR-T细胞治疗产品的物流过程。为了确保产品的安全和质量，企业采用专人运输来往于物流过程中，平均每例运输成本需花费上万元。具体而言，企业需要在全国各地医院将每个病人的单采血用冷链运输至CAR-T制备工厂，这一过程必须48小时之内完成，以确保样本的质量和安全。制备好的CAR-T细胞产品则需要以液氮运输至医院。为确保物流过程的安全和可控，物流系统必须具备即时温度查看和地理位置监控等功能，以便随除此之外，研发成本也是CAR-T治疗产品价格高昂的关键因素。一般创新药研发周期长达10年，从早期研发、临床试验和工艺优化，到最终提供给患者使用，整个费用高达数总结来说，CAR-T细胞疗法的定制化生产、昂贵的上游原材料和生产设备、复杂的供应链体系，以及高昂的研发费用等综合因素，成为CAR-T细胞治疗产品价格居高不下的核在成本既定的客观情况下，支付模式的探索或将是提高CAR-T这种相对昂贵的治疗药物的可及性重要策略。已经上市的CAR-T疗法在商业上取得的积极进展，一部分也得益于（部分国家对CAR-T治疗支付模式的尝试)在我国的医疗体系中，国家医保作为最大的买方，对于创新药的支付提升起到了重要的作用。制药公司在研发新药时需要投入巨大的资金和资源，希望通过药品销售来回收研发成本并支撑企业的可持续发展。患者则期望能够及时获得创新药物的治疗，以挽救生命和提高生活质量。国家医保在维持资金正常运转的同时需兼顾公平性，确保医保支付的可持续近年来，国家医保体系的覆盖范围和保障水平不断提升，纳入了越来越多的高值肿罕见病药等新产品。这对患者来说是一个重要的利好消息。由于高值肿瘤药和罕见病药通常价格昂贵，对患者产生很重的经济负担。然而，通过纳入国家医保，患者可以目前，CAR-T细胞治疗产品虽尚未纳入国家医保。但是，随着医保体系的持续创新，通过谈判和价格优惠等方式，未来有望将CAR-T细胞疗法纳入医保支付体系。令人欣喜的是，近年来惠民保、商业保险等的出现为CAR-T细胞治疗药物的支付问题提供了新思路，CAR-T细胞疗法的可及性有望逐步改善。据了解，目前近40个省市的惠民保、50余项商业险均将CAR-T细胞治疗纳入保障，备案的治疗中心已达81家。（商业保险对CAR-T治疗的覆盖情况)从2020年底全国开始出现了各类“惠民保”产品，后来银保监会将其命名为城市定制型商业健康保险。2021年在各方面力量的作用下，惠民保很快将CAR-T细胞治疗药品纳入已服务20余件2022版“沪惠保”的CAR-T理赔案件。惠民保这种介于商业健康险和基本医疗保险、大病保险之间的创新支付补充手段，在一定程度上提高了CAR-T细胞治疗平安健康险药保（升级版）在基础药品清单原18种药品目录基础上，免费增加了CAR-T而“按疗效付费”这一创新的支付商业模式也在2024年走入了大众视野，企业正积极与合服务平台宸汐健康联合推出“奕凯达中国首款淋巴瘤按符合条件的患者在使用奕凯达治疗后，若未能达到完全缓解（CR原本120万一针的CAR-T治疗将获得最高60万元人民币的返还，便宜了一半。据悉，该计划将是中国首个按疗效价值支付的淋巴瘤药品的创新支付模式，奕凯达也将成为中国首款按疗效价值支付肿瘤疾病不仅是医疗问题，更是社会问题。被商业保险以及地方惠民保纳入保障中，对我国肿瘤患者来说无疑是一个非常欣喜的消息。随着国家医保政的商业保险支付体系的出现，以及国家医保、惠民保、商业保险、社会资本等手段的有机结合，加上企业的降本增效措施，相信CAR-T细胞疗法将不再是一个天价药物,未来会除了目前已上市的CAR-T产品，大部分临床管线(约75%)也都是自体的，正是这种单批单人模式的出售驱动了复杂且昂贵的制造和供应链。并且这种自体的方式短时间内不会被取代，因此，即使病毒载体和生产工艺上的大规模生产制造问题得以解决，CAR-T产品在CAR-T生产设施和医院之间运输分离和制造好的细胞需要一个复杂的冷链。目前，海外CAR-T现有物流方式以CAR-T公司与专业的冷链物流公司建立合作关系为主，部分CAR-T公司拥有内部物流团队。国内冷链物流配送的代表公司：顺丰、生生物流、持成冷链物流、腾翼搏时、蚁米医学专递、世宇广通、力丰物流、纵深垠等。但由于国内目前未有上市产品，该领域仍处于起步阶段，今后冷链运输的第三方资质确认、与医院的有效无人机运输药品的新突破，为冷链物流打开了新思路。有些细胞治疗产品需要在超低温下冷冻运输，而有些则只需要冷藏的新鲜运输。总部位于意大利的生物技术公司Anemocyte与RPSAerospace公司合作开发了一种遥控无人机系统，可以安全地将最终的细胞和基因考虑到有些药物，特别是CAR-T细胞的最终产品要求低温保存运输，需要在飞行过程中持续较低的温度(如-80℃)来运输全套细胞和基因治疗产品。要达到需要低温保存的药品和疫苗的概念验证研究获得成功。默沙东公司发起了这一研究，而造了全电动无人机并且负责对无人机的操作。无人机上的冷链输送技术能够将温度控制在-70℃,这是存储和运输特定疫苗和药品所需要的温度。AT&T公司的云端技术让研究另外，由于管理CAR-T的监管链和身份链至关重要，CAR-T制造商除了与全球专业物流血液单采到在医院交付产品之间的时间。考虑到疾病的快速进展，目前的2-3周“静脉转静脉”的时间是有问题的，并可能影响晚期患者接受CAR-T治疗的资格。也正是由于CAR-T治疗过程的漫长和在后勤上的挑战。在美国，只有少数经过认证的学术医疗中心（AMC）可提供商业化的CAR-T治疗，通常要求病人长途跋涉才能得到治疗。此外，CAR-T治疗和护理的复杂性需要多个利益相关方的合作，包括治疗医师、护士、药剂师、血液单采实验室技术员，移植管理员和财务协调员。总之，围绕这些利益相关者提供CAR-T这种高度定制化的治疗，这个过程还涉及大量的支持人员，包括现场医疗团早在首款CAR-T产品获批上市之前，诺华细胞和基因治疗部门负责人UsmanAzam博士就在一次会谈中表示，诺华计划采用类似医疗器械的市场销售策略来推广其CAR-T产品。这一销售策略将有助于应对该疗法的复杂流通环节和高昂的治疗价格。在这种模式下，销目前国内CAR-T已经进入商业化的关键时期，后续的商业模式搭建将成为行业主要的关州）与科济药业控股有限公司的全资子公司恺兴生命签订了产品独家商业化合作协议。华程碑付款。华东医药为赛恺泽成立了专业的团队，充分调动资源，使赛恺泽团队与庞大销售团队结合，在聚焦重点医疗机构的同时，也可实现患者的导流，造福更多中国多国际医院和驯鹿生物就已经在伊基奥仑赛注射液CAR-T临床培训、研讨交流等方面建立了良好的合作关系。伊基奥仑赛注射液由驯鹿生物和信达生物合作研发，是中的BCMACAR-T疗法，同时也是全球首款全人源靶向BCMACAR-T疗法！通过上海嘉会国际医院与驯鹿生物的此次战略合作，双方还将整合各自的业务发展及技术平台等优势，基于以CAR-T技术为核心的细胞免疫治疗方式，紧密合作建立对标国际标准的细胞免疫诊疗中心，共同探索围绕CAR-T的保险支付与惠及方式等新模式，纵深推进CAR-T国际诊疗平台的长期可持续发现在上市的CAR-T都为自体CAR-T，将患者的T细胞经过基因工程手段体外修饰改造后，回输患者体内，但是治疗全程需要私人定制，生产成本极为昂贵，制备时间长达一个月左右，而且患者自身的T细胞通常存在质量缺陷，一定程度上限制了CAR-T疗法的应用。成大量CAR-T细胞，满足大量患者的需求，价格仅为自体CAR-T的十分之一，且可多次给药，能够提高CAR-T疗法的可及性。现阶段通用型CAR-T（UCAR-T）在血液恶性肿瘤中的应用主要针对“r/r”，既复发性和难治性，面对NHL、AML、B-ALL与MM等容易复发的肿瘤，不能在患者体内扩增是劣势，可多次输注则是UCAR-T独有的优势。高剂量/多次输注是常被用于延长UCAR-T在机体内续存时间的策略，通过稳定宿主体内UCAR-T数量，以维持杀灭肿瘤细胞时间。实际应用中，类似策略带来的疗效增益和风险几乎同时增加，安全性与有效性问题有待优化。所遇问题如下：①移植物抗宿主病(GVHD)与宿主抗移植物反应（HvGD）；②输注后感染；③多次清除淋巴化疗风险；④疗效通常不及自体CAR-T。A.通过非/基因编辑技术：因UCAR-T细胞较自体CAR-T细胞对淋巴细胞清除化疗更为依赖，因此仅敲除TCR、HLA、MCH这类分子不能完全保证UCAR-T在宿主体内的长期存活，现阶段UCAR-T创新药企业多使用基于CRISPR/Cas9技术的编辑平台，非基因编辑技术包括shRNA，慢病毒也在应用，通过非/基因编辑技术增强CAR结构设计来改善B.使用其他亚型T细胞：选择不同亚型的T细胞作为UCAR-T的制备材料，可能是另一种改善持久性的思路。现阶段虽然存在提取分离困难的问题，但此类候选药物已在早期阶Therapeutics宣布TT11X（TessaTT11X全称为同种异体CD30-CAREBVST）用于治疗复发性或难治性（R/R）霍奇金淋巴瘤患者的临床研究获得了积极的安全性和有效性数据，18（异体/自体CD30-CAREBVST）B.2γδT细胞：仅占外周血T细胞的1%-5%，在上皮组织中较多，能够以非MHC限制001在2022ISCT公布的临床前试验结果中，ADI-001在体外和体内实验中，均可显著抑制多种人源淋巴瘤细胞系的增殖，目前Ⅰ期临床试验同步开展中；据悉，森朗生物的UCAR-T管线筹备，其通用型CAR-γδT技术正处于临床前研究阶段，该技术有望使用一份100mL健康供体来源T细胞制备15份UCAR-T产品，可满足至少10名患者使用。B.3Ⅰ型自然杀伤性T（iNKT此类细胞表面同时具备TCR和NK细胞受体，Agenus目前有一款未经修饰的iNKT候选药物agenT-797正在进行针对r/rMM的Ⅰ期临床试验（NCT04754100）。B.4黏膜相关恒定T细胞（MAIT）：在人外周血和各组织中均含量丰富，含有恒定的TCR-α链，可通过MHCI相关蛋白-1（MR1）识别抗原，无须通过抗原递呈细胞，具注UCAR-T均需要进行清淋，以确保异体来源细胞移植效率，但有4名r/rNHL受试者因此发生意外，22名受试者中的17名治疗后6个月后复发。出于安全性考虑，PBCAR0191的临床研究调整了清淋剂量及PBCAR0191剂量，最新公布的针对DLBCL的临床数据中，客观缓解率达到100%，73%完全缓解，50%的患者缓解持续时间超过6个月。D.寻找新靶点：现阶段UCAR-T对新TAA/TSA的研发主要由实体肿瘤推动，如ALLO-316，其作为Allogene首款实体瘤靶向CD70的UCAR-T候选物，在2023AACR大会上，凭借此技术展现了疾病控制率DCR100%的惊人表现，证明了通用CAR-T治疗实体瘤极体瘤之间的治疗边界，成为首款“跨界”UCAR-T疗法。通用型细胞疗法已逐渐成为当前细胞治疗的前沿研发方向之一。相比设法解决CAR-T产品所固有的制造、GvHD等问题，直接利用CAR-T疗法的研发思路，将NK细胞无HLA限制性、更安全、更广谱高效杀瘤活性的生物学特性转变为细胞疗法的基础，辅以iPSC技术的优势，从而具有更强的肿瘤特异性、靶向性和细胞毒性,同时实现低价、通用的iPSC-CAR-NK细胞疗法成为了新的研究趋势。与利妥昔单抗联合用于治疗活动性狼疮性肾炎（LN）患者的系统性红斑狼疮（SLE）的IND申请，这标志着同种异体NK细胞疗法首次用于治疗自身免疫性疾病，是通用型细胞这是一种靶向CD19的同种异体CAR-NK细胞，作为复发/难治性B急性淋巴细胞白血病此外，通用型TIL疗法也将会是革命性的治疗形式，为肿瘤患者带来前所未有的希望。TIL疗法利用患者自身的T细胞，通过培养和扩增患者体内存在的肿瘤特异性T细胞，然后再将这些T细胞重新注入患者体内，以攻击和杀死肿瘤细胞。然而，这种方法非常耗时且成本高昂。因此，研发中的通用型TIL疗法可能会探索其他途径，如使用捐赠者的TIL细胞或通过基因编辑技术改造其他免疫细胞转化为TIL细胞，从而低成本获得足够数量和另外，研发通用型TIL疗法还需要解决免疫耐受性逸机制，患者的免疫系统对肿瘤细胞的反应可能会受到限制。因此，研究人员需要探索如何增强TIL细胞的活性和亲和力，以及如何对抗肿瘤细控标准，以确保每个患者都能获得高质量的TIL细胞产品。而最重要的一点便是通用TIL胞（UR-TIL或UR-CTL），UR-TIL比较独特的一点是其无需从患者的肿瘤中获取标本，临床应用领域不受限制，可以以通用即用型产品的形式批量生产。在临床试验中，接受UR-TIL治疗的癌症患者，不需要在TIL输注前进行非清髓性化疗，输注后仅需要低剂量通用型TCR-T的开发，难度相较于通用CAR-T要更高，且往往只能实现小范围通用。目前通用CAR-T疗法的设计已经有比较成熟的技术和方法，但这些策略并不完全适用于需要与HLA相互作用来激活T细胞的TCR-T疗法。通用型TCR-T需要通过基因编辑敲除内源性的TCR来构建能够识别多种肿瘤细胞的通用抗原，或者设计具有广泛适应性的TCR结构，并且采取一定手段来避免TCR错配这种降低外源TCR阳性率、增加脱靶风险的现象。因此，为了避免免疫排斥，相应的研发公司大多选择γδT细胞这种原本就具有通用潜力、不会引起免疫排斥的细胞，甚至将目光投向了TCR-NK细胞疗法。例如，为了利用γδ-TCR的独特靶向特性，Gadeta开发了TEG平台，该平台可以制备Immunotherapy、Syena等公司正在致力于开发TCR-NK细胞疗法，并且已经有产品已经进入临床，但其疗效仍然有待验证。尽管目前已经有多家企业正在开发不同形式的通用TCR-T疗法，但仍然面临着诸多挑战，而恺佧生物深度布局了TCR疗法相关产品，可量身定制TCR、TCRrelateddrug以及MHC多肽复合物等表达服务，全力助力TCR疗法企在血液瘤领域，CD19、BCMA、CD22等已经过验证有效的靶点仍是研发的热点，但一些新的靶点研发如GPRC5D、CLEC12A、CD7等显著增长。在实体瘤领域，CAR-T在研管线的靶点集中于HER2、MSLN、GPC3等，Claudin18.2等靶点研发热度逐渐上升。国内也有不少企业在靶点上做了差异化布局。科济药业的CT0180是一种被设计为表达靶向GPC3抗体融合T细胞受体(aTCR)的融合蛋白的自体T细胞产品。临床前研究显示，在小鼠异种移植模型中，CT0180可有效识别和杀死GPC3阳性肝细胞癌细胞并大幅抑制HCC肿瘤生长，体内及体外的细胞因子释放低于GPC3CAR-T细胞，提升了过继性细胞2020年1月，波睿达生物的CD30CAR-T的IND申请获得临床批件，是国内首个被批准临床试验默许的以CD30为靶点的CAR-T产品，用于治疗18~70岁的CD30+复发/难治2022年4月，斯丹赛自主研发的靶向抗原鸟苷酸环化酶2C（GUCY2C）的GCC19CART获美国FDA授予快速通道资格，用于治疗复发难治转移型结直肠癌（R/RmCRC）。一项临床研究显示，接受GCC19CART治疗的2级剂量组ORR为50%（4/8）。经正式获批，用于治疗晚期肝癌。此外，还有科济药业、传奇生物等企业也在实体瘤领域易慕峰的IMC001是一款靶向EpCAM的CAR-T产品，在临床前研究中显示出具有良好潜线患者接受IMC001细胞治疗。个获得CDE受理的CEACAR-T疗法。这一药物的IND申请此前已经获得过CDE批准，茂行生物研发了一款靶向B7H3的异体通用型CAR-T细胞注射液（B7H3UCAR-T细胞目前正在苏州大学附属独墅湖医院开展一项研究者发起的单中心、单臂、开放性研究。截），）；客观缓解率（ORR）为42.9%(3/7)，疾病控制率（DCR）为100%（7/7复发后的12个月生存率为85.7%，显著高于历史数据的14%；3例患者死亡，中位OS未达到，平均OS此外，还有多个新靶点被报道。莫菲特癌症中心的研究人员宣布发现了一种名为OR2H1的CAR-T细胞的新潜在靶点，并初步证明了该靶点在肺癌和卵巢肿瘤中的作用。OR2H1在多个组织学的实体瘤亚群中表达，而几乎不存在于正常细胞中。同时，该中心也将推进该靶点CAR-T疗法的研究。武汉波睿达生物张同存教授在国际权威期刊《血液学与肿用CD99这一肿瘤细胞膜表面广谱抗原优化CAR-T细胞疗法用于T-ALL急性淋巴细胞白2023ASCO中还报道了几项创新靶点的研究进展。研究人员开发的一种新型基于纳米抗体的靶向CAR-T细胞的GUCY2C被应用于治疗三线治疗失败的晚期结直肠癌患者。还有一项旨在评估MUC1靶向CAR-T—疗法联合PD-1敲除疗法治疗晚期食管癌的安全性和耐目前已经上市和正在进行上市评审的几款候选CAR-T产品均针对单个靶点，并集中在靶向CD19和BCMA，这些产品目前都在各自对应的适应症上展现出良好的疗效。但是，任何一种治疗策略总是难以做到尽善尽美，例如在目前走在前面的单靶点CD19CAR-T和BCMACAR-T中，CAR-T细胞功能抑制和抗原逃逸导致的复发、CAR-T的有限持久性等也限制了部分患者的临床疗效和应用。为了最大限度地减少因靶点逃逸而复发的风险，临床试验中正在积极探索双靶点CAR-T识别一种以上肿瘤相关抗原的策略。这种策略可以通过使用两种具有不同抗原结合特异性的混合CAR-T细胞或能够靶向两种不同抗原的单个CAR-T细胞来实现。目前，在血液系统恶性肿瘤的临床前模型和临床试验中，双靶点CAR-T细胞治疗的抗原至少有三种组合：CD19/CD20、CD19/CD22以及BCMA/CD38。2023年1月19日，合源生物“HY004细胞注射液”的新药临床申请获得受理。HY004是合源生物的CD19/CD22双靶点CAR-T，适应症为急性淋巴细胞白血病（ALL），此前处在探索性临床阶段，开展了一项只有2人样本的IIT研2023年5月30日，思为康的“靶向BCMA-CD19的安全型嵌合抗原受体T细胞注射液”2023年8月2日，上海医药集团研发的“靶向CD19和CD22的嵌合抗原受体自体T细胞注射液”的新药临床试验（IND）申请获CDE受理。2023年，国内外企业都将双靶点CAR-T适应症逐步扩展到了自免领域，自身免疫性疾病于治疗系统性红斑狼疮的双靶点CD19/CD20CAR-T疗法IMPT-514的IND申请。无独有偶，同年5月15日亘喜生物宣布在中国启动一项全新的、评估旗下BCMA/CD19双靶点CAR-T细胞疗法GC012F治疗系统性红斑狼疮的临床试验（IIT）。而在2月，该产品刚被CDE批准IND申请，用于治疗复发/难治性多发性骨髓瘤（RRMM）。双靶点在免疫细胞疗法的领域布局不止于此。2022年ASH年会上，先博生物首次公布了自主研发的拥有全球知识产权的新一代双靶点通用型CAR-NK的研发成果。先博生物利用自主专利的CAR设计开发同时靶向BCMA和GPRC5D的双靶通用型NK细胞治疗产品，有望在通用、可及性、CRS、以及疾病复发方面提供新的治疗手段。近两年，体内构建CAR-T的研究开始慢慢增多，直到如今成为了颇受看好的技术方向。体内基因工程CAR-T细胞免疫疗法是将编码CAR基因的载体单次注射到患者体内，使T细胞可以在一两天内对新基因进行解码并产生CAR，这意味着可以省略提取并且在体外对T细胞进行基因改造的过程，仅需一次注射即可直接在患者体内生成CAR-T细胞，简化了CAR-T疗法的制备流程与治疗流程的同时还可以规避移植物与宿主间的反应以及制造相关的复杂问题，降低治疗风险和成本。有研究表明，体内制备CAR-T有望为目前在研的通用型CAR-T疗法提供潜在的替代方案。但这种疗法同样面临着一定难点：缺乏合适的载体平台。整体而言，同传统的体外制备CAR-T一样，目前体内制备使用较多的载体仍可以分为病毒载体与非病毒载体两大类。病毒载体仍是目前体外制备CAR-T最主要的方式之一。总体而言，使用病毒载体就是将体外转染这一步放在了体内。不过，体内使用病毒载体面临着一定的安全性问题，以及是否需要化疗预处理和是否可以重复给药。尽管AAV载体在基因治疗中被广泛使用，这种载体由于其有效载荷较低、缺乏靶向性，并未成为体内CAR-T制备的主要载体，慢病毒使用病毒载体的公司和技术平台包括：UmojaBiopharma的慢病毒载体递送的VivoVecCAR-T、MustangBio的体内基因工程CAR-T细胞、EXUMABiotech的皮下给药慢病毒构建体的体内CAR-T/TaNK、AbintusBio与纪念斯隆·凯特琳癌症中心（MSK）合作的InVivoCAR-X等。体内制备CAR-T希望能够达到一次注射永久治疗的结果，但对于永久转染CAR基因的技术平台来说，转移基因错位插入宿主染色质导致转录失调而产生的遗传毒性是一个迫在眉睫的安全性问题，同时也需要实现CAR活性的控制，降低细胞因子释放综合征（CRS）或免疫效应器细胞相关神经毒性综合征（ICANS）的风险，在使用慢病毒载体在小鼠模型中生成CAR-T细胞时，就出现过类似CRS的症状。如果使用瞬时性的载体，则需要考虑CAR活性是否可以维持足够长的时间以实现持久的肿瘤清除，另外，使用这种瞬时性载体时CAR活性带来的毒性或许可以有所下降，但合成和病毒载体体内给药后细胞因子水平增加，可能会影响重复给药，重复给药也可能进一还有一个需要注意的问题是，宿主对给药载体的免疫反应会影响药物的安全性和疗效。病毒载体具有明显的免疫原性，LNP等纳米颗粒中引入用于受体靶向的蛋白质成分可能会增目前有不少关于体内制备CAR-T的研究型论文发表，使用合适的载体平台确实可以实现CAR-T细胞的体内生成并且清除肿瘤，可以说是CAR-T疗法的一个新的里程碑。然而，这种疗法仍存在着一定的安全性与有效性问题。几款体内基也是对体内制备CAR-T疗法后续发展的一种提醒：需要在临床前试验中进一步彻底确认增多，解决宿主免疫和载体制造等问题，实现体内制备CAR-T的技术突破意味着成本更低、获得治疗更快的CAR-T疗法，这种治疗方式的可及性将大大增加。这一方向或将是CAR-T疗法的另一研究趋势，期待着细胞与基因治疗领域能够早日进入“体内时代”。慢病毒载体往往稳定性和效率较高，成为了绝大多数CAR-T细胞生产依赖的技术。然而传统的病毒载体缺点显而易见，成本高、工艺繁琐，制备周期较长，开发一种更为高效便宜的非病毒基因递送系统是CAR-T“飞入寻常百姓家”的大势所趋。非病毒载体技术所使用的质粒DNA或mRNA生产工艺简化、质量控制容易，且具有显著DNA或mRNAmRNA为辅，CRISPR技术也能应用于慢病毒载体。Body”的文章在Science上发表，宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院的研码CAR的mRNA-LNP递送小鼠体内，成功在体内实现CAR-T细胞的生成并成功修复了了一种在体内生成的瞬时工程化CAR-T细胞疗法，通过注射脂质纳米颗粒（LNP）递送的mRNA，重编程T细胞，使其识别心脏纤维化细胞，进而减少纤维化，恢复心力衰竭小鼠模型的心脏功能。公司在2022年9月获得了辉瑞、拜耳、诺华、礼来和BMS这五大此外，国内远泰生物也在开发mRNA-LNP体内制备CAR-T/NK的工艺技术；优卡迪创现体内制备CAR-T疗法，不过递送的是含有人源白细胞介素6（IL-6）的短发夹RNA（shRNA）与CAR基因的整合质粒。mRNA载体应用于CAR-T治疗具有4大优势：1）T细胞无需激活，仅需1天快速实现CAR-T的制备；2）转染效率比较高，通常是90%以上；3）瞬时表达，风险小，特别适使用SHREAD的递送系统，这种基于腺病毒蛋白衣壳设计的载体具有更高的容量并且不携带病毒基因，表面覆盖的抗体片段可以防止衣壳被免疫系统识别和降解，表面可以装饰Fusogen（一种能够介导人体内细胞间和细胞内融合的天然蛋白质）的Fusosome，靶向目卡罗来纳大学教堂山分校和北卡罗来纳州立大学的研究人员开发出一种可植入的支架MASTER（用于T细胞修饰和释放多功能藻酸盐支架植入物可以在体内快速生产和释放CAR-T细胞，并将制造时间缩短到1天以内。研究人员从体内分离出T细胞，将未激活的T细胞与含有CAR基因的病毒载体一起装入MASTER移植物中，MASTER中含有白细胞介素因子及刺激T细胞活化物质等。通过手术将移植物植入体内后，能够将T细胞激活、重编程、扩增步骤整合在体内完成。在临床前试验中，体内制备的CAR-T疗法展现出了更强的持久性。精准区分肿瘤和正常细胞是CAR-T细胞疗法治疗肿瘤的关键挑战之一，大多数的癌症疗法可能会对正常细胞的靶向、造成非肿瘤杀伤，引起难以控制的毒性。在几乎不存在肿瘤特异性抗原的实体瘤中，CAR-T疗法的应用更为艰巨。研究人员正在通过逻辑门策略控制CAR-T细胞活动，旨在提高CAR-T细胞治疗的安全性、有效性和实体瘤的适用性。肿瘤细胞的激活剂和保护正常细胞的阻断剂，将免疫细胞的强大武器直接对准肿瘤。激活剂识别肿瘤细胞上触发其杀伤的抗原，而阻断剂识别正常细胞上的抗原，保护它们免受攻击。利用肿瘤细胞中基因的缺失，称为杂合性丧失（LOH提供了精准分别肿瘤与正常组织的可能。这种创新性设计旨在解决实体瘤癌症药物的基本挑战：选择性杀死肿瘤细胞Tmod™机制的原理A2B530是从A2Bio专有的Tmod™平台开发的首个CAR-T细胞疗法，由靶向癌胚抗原（CEA）的激活剂和靶向HLA-A*02的阻断剂组成。A2B530的双受体设计旨在选择性杀死表达CEA并永久失去HLA-A*02基因的肿瘤组织。HLA-A*02阻断剂可防止CAR介导的对所有表达HLA-A*02细胞，包括正常细胞的杀伤。但在HLA-A*02杂合性丢失的肿瘤细胞中，HLA-A*02阻断剂将不会被激活，从而允许CEA特异性CAR杀伤肿瘤细胞。研究结果表明，CEATmod不仅可以在体外和体内选择性地杀死HLA-A*02癌细胞，而且能够避免伤害表达HLA-A*02的正常细胞，这表示Tmod™等双受体系统可用于选择性、安全地靶向在肿瘤细胞和正常组织上都有表达的抗原，有望攻克危及生命、难以治疗的实CAR（LINKCAR该系统使用近端信号分子与膜结合的抗原结合域（如单链可变片段逻辑门CAR-T细胞的原理“LINK”的分裂CAR设计中包含两种不同的scFvs，LAT和SLP-76，以产生“与”门CAR-T细胞，把ZAP-70下游的LAT、SLP-76安装在识别不同肿瘤抗原的scFv上，让CAR-T只对同时表达两个抗原的靶细胞产生响应。LINKCAR-T细胞依靠对恶性和正常细胞上组合表达模式的精确分析，利用逻辑门可以保护只表达一种目标抗原的正常组织，在能够将T细胞激活、重编程、扩增步骤整合在体内完成。在临床前试验中，体内制备的CAR-T疗法展现出了更强的持久性。synNOTH中的逻辑门控能克服实体瘤中缺乏特殊的肿瘤特异性抗原的难题。synNOTH系统中存在识别一种TAA的syntheticNotch受需要同时存在两个细胞表面抗原才能激活CAR-T细胞。该CAR-T疗法T细胞表面的特殊synNotch蛋白能够识别GD2抗原，从而指示T细胞激活CAR-T特性，识别第二种抗原B7H3。这意味着T细胞只能杀死同时具有GD2和B7H3两种抗原的细胞。synNotch系统已被用于靶向表达抗原ROR1的肿瘤细胞，该抗原也存在于正常的骨髓基质细胞和其他组织中。较之于单独靶向ROR1的传统CAR-T细胞，门控上皮细胞粘附分子(EpCAM)或B7-H3作为二级抗原的表达可增加肿瘤细胞特异性，减少动物模型的毒性风险。但是，这种逻辑门控CAR-T细胞的缓慢激活可能会降低这类方法的抗肿瘤性，而与逻辑门控效应类似的通过靶向多种抗原或通过其他刺激或抑制手段来提高特异性的策略也SUPRACAR-T疗法通过“非与”逻辑门的设计，可以让临床医生在整个治疗过程中随时关闭，极大降低了CAR-T产生致命副作用的风险。与传统CAR-T疗法相比，SUPRACAR-T被设计为两部分，一部分是在T细胞内稳定表达的通用受体（zipCAR另一部“肿瘤受体”能随即激活“通用受体”，让T细胞对癌细胞进行攻击。这使得SUPRACAR-T能够同时做到治疗多种癌症、可关闭、可调节，集三大特性于一身。研究人员设计了“非与”的逻辑门使SUPRACAR系统成为“细胞筛选器”，只能特异性EEzipFv能成功结合zipCAR并激活T细胞大量产生强烈的细胞毒性。“非与”的逻辑门有效地提高了SUPRACAR的安全性。AB-2100是ArsenalBio利用PrimeR™逻辑门技术开发的管线，即靶向PSMA和CA9的CAR-T疗法，用于治疗肾细胞癌。AB-2100逻辑门控疗法只有在同时识别并结合过继T细胞表面表达的PSMA和CA9才能激活T细胞，杀伤肿瘤，提升肿瘤识别特异性。研究表明，有超过70%的原发性和转移性透明细胞肾细胞癌（ccRCC）上共表达PSMA和CA9。CAR-T细胞活性以针对ccRCC细胞，提高AB-2100在体内的特异性。在ccRCC异种移植模型中，AB-2100能够以低剂量实现肿瘤的消除。在目前公布的摘要中，Arsena了使用逻辑门控可以弥补常规CAR-T治疗的不足，克服了异种移植模型中肿瘤微环境中的多种抑制机制，有望在实体瘤的CAR-T治疗中减轻副作用，提高特异性。然而逻辑门控CAR-T也并非“灵丹妙药”，存在着一定的局限性。CAR-T细胞的复杂化伴随着的是制造工艺的升级与出错风险的增加，势必对CAR-T的生产成本与安全性提出新的考验。同时，AND逻辑门控需要共同识别两种抗原，防止误伤正常细胞的同时也给肿瘤的免疫逃逸留出了空间。因此，控制CAR-T复杂程度、选择合适的目标靶点是企业研发逻辑门CAR-T首要关注的问题。CAR-T疗法攻克实体瘤是目前极受关注的领域。肿瘤微环境中存在着厚实的细胞外基质，影响了T细胞的浸润，同时肿瘤自身还存在免疫逃逸的机制，分泌的抑制分子还会阻碍T细胞的活性和杀伤力，对CAR-T疗法攻克实体瘤提出了严峻的挑战。为克服此类挑战，通过转基因表达细胞因子或工程化的细胞因子受体来增强T细策略逐渐走进大众视野，这种手段不仅能提高CAR-T细胞的扩增和持久性，而且还能增强它们在免疫抑制性TME中的功能。细胞因子主要是由免疫细胞和某些非免疫细胞刺激后分泌的一种小分子可溶性蛋白质，与受体结合后可以调节细胞生长、分化及效应，调控免疫应答。目前，已有一些工程化设计以改善TME环境、防止CAR-T耗竭，促进T细胞的增殖活化以及杀伤功能，且已取得CAR-T细胞需要三种信号来维持细胞增殖：第二信号由T细胞在其膜上的共刺激信号去释放细胞增殖分化，并使T细胞分泌大量炎第三信号由细胞因子的特定亚群来提供，用于维持细胞的长期存活，但T细胞发育增殖、维持其细胞内环境稳定，将外围的T细胞和DC细胞有效地招募过来并能增强但是这种全身性的方案会使人体因细胞因子过量引起免疫系统过度反应，产生CRS（细胞贝勒医学院通过基因工程改造了一种IL7受体(C7R)，它可以提供自主的第三信号，而不体自身的第三信号选择性地增强。当CAR-T细胞接收到全部的三种信号后，它们具有多CAR-T细胞进入实体瘤微环境难点的之一，是微环境触发应激因子并激活细胞凋亡信号CAR-T细胞对免疫抑制性肿瘤环境的抵抗力。具有修饰的IL-7受体的CAR-T细胞显示更少的细胞凋亡信号通路，能够在TME中有更多的活性T细胞，因此工程化IL-7受体的CAR-T细胞对消除肿瘤具有持续性。瘤小鼠模型中，将IL-7以及CCL-19基因导入CAR-T细胞制备能，7×19CAR-T细胞在体内存活时间更长并且能够有效地帮助DC细胞以及T细胞浸润传奇生物将有权开发结合了Noile-ImmunePRIME（诱导增殖和增强迁移）核心技术的分泌IL-7和CCL19的CAR-T和TCR-T细胞疗法。PRIME技术旨在改善CAR-T和TCR-T从而促进炎症信号的传递，可诱导分泌IFN-γ,显著增强Th1型免疫反应，因此IL-18在CAR-T细胞中表达能够增强CAR-T细胞增殖和抗肿瘤活性，同时还可减少CAR-T细胞该研究探讨了一种新型的基因工程细胞疗法，通过将编码IL-12和IL-18的mRNA转染到T细胞中，使其具有更强的抗肿瘤能力，抑制肿瘤细胞具有多种免疫逃逸机制，有望解决研究人员还设计了一种抗干扰的IL-18变体进一步增强治疗效果。细胞分泌的一种蛋白质所结合，从而延长IL这种变体的mRNA转染到T细胞中，可以增强其抗肿瘤能力，极具潜力攻克实体瘤。并可介导这些细胞的增殖和存活的功能。此外，IL-15能激活、维持和扩增CD8+记忆性强CAR-T细胞活性，优先扩增抗肿瘤免疫效应细胞，同时通过消除IL-2Rα结合将Treg抗原靶向还能够控制保留肿瘤附近的细胞因子，同时保持针对特定细胞群的活性。通过将蛋白质设计与复杂的细胞工程相结合，能够构建增强TME内CAR-T细胞功能的遗传模块，优先扩增CAR-T细胞和内源性抗肿瘤免疫效应细胞，实现实体瘤安全有效持久的治疗结瘤微环境(TME)中精细调节细胞因子信号的方法，能够直接协调来自工程CAR-T和内源性免疫细胞在TME中产生的免疫反应，克服了TME免疫抑制性对于CAR-T治疗实体瘤的影响。OutSmart平台通过提供IL-2和IL-15活性的单一载体遗传模块去增强CAR-T细存活，刺激TME中的免疫效应细胞，并减少与全身性IL-2暴露相关的潜在副作用。抗原靶向还能够控制保留肿瘤附近的细胞因子，同时保持针对特定细质设计与复杂的细胞工程相结合，能够构建增强TME内CAR-T细胞功能的遗传模块，优先扩增CAR-T细胞和内源性抗肿瘤免疫效应细胞，实现实体瘤安全有效持久的治转化生长因子-β（TGF-β)是一种最有效和多效性的调节性细胞因子，它几乎控制着肿瘤引起的免疫反应的每个阶段，从初级淋巴器官中的淋巴细胞发育到细胞的启动，以及针对肿瘤自身的效应器功能。TGF-β在健康组织中的不同功能使寻找C-CAR031是一种针对肝细胞癌（HCC）的自体抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3）的装甲型CAR-T疗法，由阿斯利康的转化生长因子-β受体II（TGFβRII）显性负装甲发现平台设计，并由西比曼生物在中国生产。2024年，C-CAR031获得CDE临床默示许可，针对GPC3+晚期/复发性肝细胞癌。联合开发协议。西比曼和阿斯利康将在中国共同开发和商业化C-CAR031，西比曼将获得一笔首付款。西比曼还将有资格获得阿斯利康在中国以外地区独立开发、生产和商业化AZD5851时的里程碑付款和全球开发的特许权使用费。在2023年的美国癌症研究协会（AACR）年会上，西比曼生物发布了其C-CAR031产品的首次人体（FIH）I期临床试验数据，结果显示：在6例晚期肝细胞癌的探索剂量组（DL2剂量组）中3例受试者达到了确认的部分缓解（PR）、2例受试者达到了疾病稳定；到数据截止日，所有部分缓解（PR）的受试者仍然保持持续缓解，整体安全性良好。cancer”的文章，报道了阿斯利康研发团队设计的一种装载显性失活TGFβII型受体(dnTGFβRII)靶向STEAP2的CAR-T细胞(代号AZD0754)，以探究其治疗前列腺癌的活性。体内外研究数据显示，具有人鼠交叉反应的STEAP2CAR-T细胞，在动物模型中(包括皮下细胞系移植瘤、骨转移的原位模型、和患者来源的异种移抗肿瘤活性，而不引起毒性，这表明AZD0754可能为转移性去势抵抗性前列腺癌(CRPC)1）合成酶武装的杀伤（SEAKER）细胞过开发的一种新型的“微药剂”CAR-T细胞——合成酶武装的杀伤（SEAKER）细胞。SEAKER细胞既有免疫细胞靶向肿瘤细胞的能力，也能共表达一种合成酶，从而在肿瘤部位激活全身递送的前药，产生局部强效抗癌作用。CoImmune公司正在将SEAKER细胞因小鼠模型中特异性靶向实体瘤黑色素瘤，证明了SEAKER平台适用于许多过继细胞疗法。2）氧化锰纳米酶武装的CAR-NK细胞2024年3月，山东大学高立芬与桑元华教授团队合作，发表了题为《MnoxNanoenzymeMicroenvironment》的研究该研究通过构建氧化锰纳米酶武装的CAR-NK细胞，利用CAR-NK细胞对氧化锰纳米酶靶向肿瘤的递送功能，原位缓解肿瘤内部缺氧环境，进而改善肿瘤免疫抑制微环境，大幅提升了CAR-NK细胞的疗效，为攻克实体肿瘤治疗难题提具体而言，研究人员开发了一种具有过氧化物酶活性的智能生物可降解空心二氧化锰纳米粒子（MnOX该纳米粒子可催化TME中过量的H2O2产生氧气，缓解实体瘤的缺氧状况。之后，用CD56抗体修饰的MnOX纳米酶可以特异性结合CAR-NK细胞。基于CD56抗体与CAR-NK细胞的特异性结合，MnOX-CD56纳米酶可以作为CAR-NK细胞的“生物背包”。CAR-NK细胞对肿瘤的靶向能力可以有效实现对MnOX纳米酶的高效递送，同时MnOX纳米酶改善的TME提高了CAR-NK细胞的生存和杀伤能力，所以设计的MnOX-CD56纳米酶武装CAR-NK细胞在癌症治疗中具有协同增强作用。使用CAR-T细胞来表达PD-1抗体从而帮助CAR-T细胞解除抑制，同时助力PD-1抗体受体T细胞注射液（BZD1901)，顺利通过国家药审中心的审评审批，3月24日正式获批开展I/II期临床研究。据悉，这款药物是全球首款自分泌纳米抗体的CAR-T药物（即纳米抗体武装化细胞药物该药物用于治疗间皮素阳性晚期实体肿瘤（约50%实体肿瘤目前，在CAR-T细胞治疗的多个临床试验中，研究人员已经确定了严重CRS和/或神经毒性的一些危险因素，也包括一些预测性生物标志物，这些生物标志物能够事先确定哪些患者在CAR-T细胞治疗期间可能经历严重的CRS和/或神经毒性，从而促进对这些毒性的早期干预管理，这也是保障安全性的最后一步。由于CRS的自然特征是显著的全身性目前已有多个研究机构证明了，CAR-T细胞输注后血清细胞因子水平与CRS严重程度呈来自FredHutch癌症研究中心的科学家已经确定了预测CRS严重程度的生物标志物。该研究团队发现，出现CRS和神经毒性两种类型的严重副作用与血管内皮细胞加剧活动以应对损伤的迹象相关联。一些具有严重神经毒性的患者的血脑屏障已经瓦解了，血液细胞因子和CAR-T细胞可以自由进入大脑内部。而激活血管内皮细胞的生物标志物则可以帮助确定哪些患者具有CRS和神经毒性的最大风险。基于接受JCAR014（CD19CAR-T）治疗的133例癌症患者的病例研究，研究人员确定了患者在入组临床时的基线健康状况和实验治疗本身变化相关的五个独立因素，通过这些信息，他们针对可能会进一步发展成严重CRS的患者，开发了一种识别方法。即在接受CAR-T细胞输注后的第一天半，出现102华氏度(≥38°C摄氏度）的发烧情况和高水平的一种被特定的免疫信号化学物质（被称为MCP-1的细胞因子）则被视为危险信号。另外，Teachey等人的一项公开研究表明，可以用包括三种细胞因子在内的前瞻性选择逻辑回归模型来准确预测哪些患者会经历严重CRS。特别是针对儿科患者，在CAR-T细胞输注的72小时内，基于对IFN-γ、IL-13、MIP1α浓度评估的建模分析高度准确，其中2018年4月30日，来自宾夕法尼亚大学Abramson癌症中心的科学家团队在NatureMedicine上发表的一项最新研究表明：拥有表达CD8和CD27以及CD45RO的缺失标记的早期记忆T细胞的CLL患者对CAR-T细胞治疗有部分或完全的临床反应，缺乏者则无应答。研究小组比较了对治疗有完全、部分或无反应的患者T细胞的基因表达谱和表型。分析表明，在完全响应者中持续存在和扩增的CAR-T细胞，富集了调节早期记忆T细胞和效应T细胞并具有IL-6/STAT3信号的基因，而非响应者表达的基因涉及晚期T细胞分化、糖酵解、耗竭和细胞凋亡。这些特征使得一组较弱的T细胞能够持续扩增和对抗癌症。早期T细胞中IL-6/STAT3信号通路的水平升高，在先前的研究中显示出使T细胞保持持久性，其与CAR-T细胞治疗患者的临床反应相关。为了验证生物标记物的发现，研究人员在CAR-T细胞治疗前后筛选了一组8名CLL患者的早期记忆T细胞，并以100％的特异了一篇关于在CLL中T细胞代谢稳态受损对CAR-T细胞治疗潜在影响的探索性研究的结果。结果表明，线粒体质量可能是CLL患者CAR-T结果的标志物。该实验中，CLL患者的CD8+T细胞增加了线粒体氧化磷酸化和ATP产生水平。刺激后，这些细胞也减少了葡萄糖摄取和线粒体生物发生，表明功能受损。在接受CAR-T细胞的CLL患者中，CD8+T细胞的线粒体大小增加与良好反应相关。因此，线粒体大小可能是CLL患者CAR-T结果原先大多数的CAR-T产品往往用于二线或者三线治疗失败后的癌症患者，而如今已经出现可在早期二线治疗的CAR-T产品，证明CAR-T技术的安全性越来越高，不再是患者垂死之际的放手一搏，而成为可以信赖、尽早治愈的良方。CAR-T疗法被用于癌症的前线治疗，不仅意味着更多患者能够在早期接受到更优的治疗方案，还意味着受众人群与市场需求的扩大，制药企业能够获得更加丰厚的市场回报，加速了商业化的发展液（商品名：奕凯达）新适应症上市申请获得国家药监局附条件批准，其适应症为一线免疫化疗无效或在一线免疫化疗后12个月内复发的成人大B细胞淋巴瘤。此前，国内尚无用于治疗一线免疫化疗无效或在一线免疫化疗后12个月内复发的成人大B细胞淋巴瘤的CAR-T细胞治疗产品，阿基仑赛的此次获批也意味着其成为了国内首个获批二线治疗的CAR-T疗法。于KarMMa-3临床试验的结果，批准靶向BCMA的CAR-T细胞疗法Abecma用于治疗复发或难治性多发性骨髓瘤成年患者，这些患者在接受包括免疫调节剂（IMiD）、蛋白酶体抑制剂（PI）和抗CD38单克隆抗体的两种或更多先前治疗后疾病出现进展。此次批准扩大了Abecma的适应症范围，成为多发性骨二线后又迎来了欧盟委员会的批准，用于治疗复发和难治性多发性骨髓瘤成人患者，这些患者既往至少接受过一线治疗，在最后一次治疗出现疾病进展并且对来那度胺耐药。这意味着，BCMACAR-T疗法正式迈入血液肿瘤前线用药，多发性骨髓瘤的治疗格局有望迎更为重要的是，CARVYKTI®成功获批二线治疗，有望打开企业与患者双赢的新局面。对企业来说，提线治疗能覆盖更多患者，从四线后到二线起，患者覆盖比例从15%增至95%，预计患者基数将扩大6倍，给CARVYKTI®销售额的增长留下了巨大的想象空间。从患者获益角度，前线治疗的患者往往表现出较低的耐药度，同时拥有更好的免疫细胞活从CARVYKTI®临床研究布局来看，传奇生物的“野心”也不仅满足于二线获批。正在进行的CARTTITUDE-5是全球首个一线治疗的关键头对头3期临床试验；CARTTITUDE-6更是直接对照骨髓移植，在前线治疗方面全面布局。目前，投资界与医药界均在密切关注CARTITUDE-5的进展情况，若后续数据结果表现积极，有望成为一线MM适应症的标准疗法，CARVYKTI®的市场应用空间将更加广阔。在细胞疗法的快速发展中，治疗的适应症已突破了肿瘤的范围，越来越多的细胞治疗企业开始布局极具前景的自免赛道。而占据了上市CAR-T6席之多的CD19靶点，是研究者首要关注的靶点，已上市的CD19CAR-T都为治疗血液瘤，而如今已有不少企业用此靶点研发出了能治疗自身免疫性疾病的CAR-T产品，或许能成为下一代自身免疫性疾病的治疗极优解。CD19CAR-T的适应症在不同疾病领域的扩展，能在降低研发成本的同时，为商业化发展开辟了更宽敞的道路。其中关联性最强的疾病为系统性红斑狼疮（SLE），此外还有硬皮病、肌炎、肾病、视神经脊髓炎谱系障碍等。除此之外，CAR-NK与CAR-M也逐渐有向自免扩展的趋势。2023年，首个通用型NK疗法AB-101获批IND以治疗系统性红斑狼疮，国内企业也达成了CAR-M靶向治疗自身免疫疾病的战略临床合作。CAR-T用于治疗系统性红斑狼疮（SLE）纯属偶然。医生在使用CAR-T疗法治疗同时易成为CAR-T细胞治疗的靶点，因为在SLE中疾病驱动的B细胞数量要少得多，因此，CAR-T治疗SLE这一自身免疫疾病可能只需要更低的剂量，将大大减少CAR-T细胞治疗用于治疗中重度难治性系统性红斑狼疮SLE。此次获批意味着CAR-T免疫细胞疗法