T-SHAAV 021-2024 混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的测定一高效液相色谱法

ICS65.120CCSB46团体标准T/SHAAV021—2024混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的测定高效液相色谱法Determinationofsaccharinsodium,neotameandneohesperidindihydrochalconeinsweeteneroffeedadditiveblender-Highperformanceliquidchromatography2024-04-10发布2024-04-10实施上海畜牧兽医学会发布T/SHAAV021-2024前言 II1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5试剂与材料 6仪器与设备 7试样制备与保存 8测定步骤 9结果计算与表述 10精密度 2附录A(资料性) T/SHAAV021-2024前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由上海市畜牧兽医学会提出并归口。本文件起草单位:上海美农生物科技股份有限公司、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院饲料研究所、江苏立华牧业股份有限公司、挑战集团、通威股份有限公司、上海禾丰饲料有限公司。本文件主要起草人:李洋洋、杨海锋、司文帅、刘惠芳、黄志英、刘海燕、李俊、陈磊。本文件首批承诺执行单位名单:上海美农生物科技股份有限公司、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院饲料研究所、江苏立华牧业股份有限公司、挑战集团、通威股份有限公司、上海禾丰饲料有限公司。T/SHAAV021-2024混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的测定高效液相色谱法本文件规定了混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的高效液相色谱测定方法。本文件适用于混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的测定。本方法糖精钠检出限为200mg/kg、纽甜检出限为50mg/kg、新甲基橙皮苷二氢查耳酮检出限为20mg/kg,糖精钠定量限为400mgikg、纽甜定量限为100mg/kg、新甲基橙皮苷二氢查耳酮定量限为40mg'kg.2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件该日期对应的版本适用于本文件;是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBT6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理混合型饲料添加剂甜味剂充分溶解在30%的乙腈水溶液后用配有紫外(UV)检测器或二极管阵列 (DAD)检测器的高效液相色谱仪测定,外标法定量计算出糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。5试剂与材料除非有特殊说明,本测定方法中所用试剂均为分析纯,水为GBT6682规定的一级水。5.1乙腈(色谱级)。5.2磷酸氢二铵。5.3磷酸。5.4糖精钠标准品(CAS:6155-57-3):纯度≥99%。5.5纽甜标准品(CAS:165450-17-9):纯度≥98%。5.6新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品(CAS:20702-77-6):纯度≥99.5%。5.70.02molL磷酸氢二铵缓冲溶液:称取2.64g磷酸氢二铵,加入700mL水,用磷酸调PH至2.5,定容到1000mL容量瓶中,用0.45μm滤膜抽滤。5.8糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液:称取0.1g(精确至0.00001g)预先在120℃烘箱烘干4h的糖精钠标准品(5.4)、0.1g(精确至0.00001g)纽甜标准品(5.5)、0.1g(精确至0.00001g)新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品(5.6)于100mL容量瓶中,加入30%乙腈水溶液定容,摇匀静置。此溶液糖精钠浓度为1mg/mL,纽甜浓度约为1mg'mL、新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度为1mg/mL。5.9糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准工作溶液:分别吸取0.1mL,0.5mL,1mL,5mL,10mL糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液至10mL容量瓶中,用30%乙腈水溶液定容,临用现配。T/SHAAV021-20245.10水性微孔滤膜:孔径0.45μm6仪器与设备6.1分析天平:感量0.00001g,感量0.o00lgo6.2超声波震荡器。6.3高效液相色谱仪:配有紫外(UV)检测器或二极管阵列(DAD)检测器。7试样制备与保存按GBiT20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛,充分混匀,装入磨口瓶中,避光保存,备用。8测定步骤8.1样品溶液制备称取试样0.5g(精确至0.o00lg)于50mL烧杯中,加入适量30%乙腈水溶液超声波震荡提取10min;将提取液移入100mL容量瓶中使用30%乙腈水溶液定容,摇匀静置。提取液经0.45um滤膜过滤后用于色谱分析。8.2高效液相色谱参考条件a)色谱柱:C8柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒度5m;b)流动相:乙腈+0.02mol/L磷酸氢二铵缓冲溶液=35+65;C)流速:lmL/min;d)检测波长:糖精钠、新甲基橙皮苷二氢查耳酮检测波长283nm;纽甜检测波长210nmoe)柱温:30c;f)进样体积:10L。8.3标准系列工作溶液和试样溶液测定分别吸取糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准工作溶液和试样溶液,按8.2的色谱条件进行色谱分析测定。测定时,样品溶液与标准工作溶液等体积进样测定,并保证样品溶液中的响应值均应在标准工作曲线的线性范围内,试样溶液中待测物超出线性范围时适当稀释后再用于色谱分析。糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液的高效液相色谱图参见附录A。9结果计算与表述试样中糖精钠、纽甜和新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量rw,以质量分数"%"表示,按下式计算:CXVXnmx1000式中:C由标准曲线得出的试样中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的浓度,