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第第页土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenoloxidase，S-PPO）试剂盒说明书土壤多酚氧化酶（SolidPolyphenoloxidase，SPPO）试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做预测定测定意义：SPPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。测定原理：SPPO能够催化邻苯三酚产生有色物质，后者在430nm有特征光吸收。自备用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、yi醚50mL（不允许快递）和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前取一瓶，加入7mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存一周。试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存；试剂三：yi醚50mL×1瓶，4℃保存；（自备）样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至430nm，蒸馏水调零。2、加样表试剂名称测定管风干土样（g）0.02试剂一（μL）120振荡混匀，30℃恒温培养1h试剂二（μL）50试剂三（μL）430振荡数次，室温静置30min，取200μL上层液于430nm处测定吸光值A。（注意：1、因yi醚粘度小，易掉液，吸取前需先将枪头在上层液里润洗2~3次，再转移测定；2、yi醚易挥发，转移到96孔板后立即测定，最好一个一个测定）。SPPO活力计算a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y=8.97x0.003；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值A。单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。SPPO活力（mg/d/g土样）＝(A+0.003)÷8.97×V反总÷W÷T=80×(A+0.003)T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积0.6mL；W：样本质量，0.02g。b.用96孔板测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y=4.485x0.003；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值A。单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。SPPO活力（mg/d/g土样）＝(A+0.003)÷4.485×V反总÷W÷T=160×

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