原子吸取分光光度计的配置与选型 光度计操作规程

第第页原子吸取分光光度计的配置与选型光度计操作规程原子吸取分光光度计的紧要分析方法有三种一，原子吸取火焰法原子吸取的火焰法作为一种常用的分析方法被广泛的使用，对于一些常见的，含量在确定可测范围内金属元素而言，火焰原子吸取法简单而快捷，结果原子吸取分光光度计的紧要分析方法有三种

一，原子吸取火焰法

原子吸取的火焰法作为一种常用的分析方法被广泛的使用，对于一些常见的，含量在确定可测范围内金属元素而言，火焰原子吸取法简单而快捷，结果的精准度特别高。

二，原子吸取石墨炉法

原子吸取石墨炉法是原子吸取应用中经典的方法，一般的石墨炉可以瞬时升温至3000℃，对于一些含量极低的或者一些高温元素的定量检测特别有效，甚至很多仪器和分析专家认为，之所以原子吸取分光光度计没有被淘汰至今还在广泛的适用正是由于原子吸取的石墨炉法的精度及最小检测极限是目前全部测试方法中几乎无可替代的。

三，原子吸取氢化物法

也称冷原子法，一般用于测定汞、砷之类的元素。

所以在原子吸取分光光度计的选择上，我们首先要选定紧要是用哪一种方法去做金属元素的含量测定，然后依据测定方法去确定原子吸取分光光度计的配置。

如何了解我们需要使用的方法是什么呢？有以下三点必需注意

一，测定的金属元素种类

二，测定的金属元素的大致含量范围

三，测定的金属元素的基体

了解了以上三点以后，我们就可以依据不同的元素，不同的含量，不同的基体去选择不同的配置方案。

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除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个特别紧要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，由于蛋白的吸取峰是280nm。纯洁的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。假如比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯洁的核酸A260/A230的比值大于2.0、A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0、

蛋白质的直接定量（UV法）

这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程特别简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要除去320nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸仿佛，要求A280的吸光值至少大于0.1A，较佳的线性范围在1.0—1.5之间。试验中选择Warburg公式显示样品浓度时，发觉读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要察看A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果特别稳定。漂移的原因是由于Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以确定的系数，只要吸光值有少许更改，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯洁、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是简单受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。

比色法蛋白质定量

蛋白质通常是多种蛋白质的混合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。带您真正认得原子吸取分光光度计

一、原子吸取分光光度计的工作原理：

元素在热解石墨炉中被加热原子化，成为基态原子蒸汽，对空心阴极灯发射的特征辐射进行选择性吸取。在确定浓度范围内，其吸取强度与试液中被的含量成正比。其定量关系可用郎伯—比耳定律，A=—lgI/Io=—lgT=KCL，式中I为透射光强度；I0为发射光强度；T为透射比；L为光通过原子化器光程（长度），每台仪器的L值是固定的；C是被测样品浓度；所以A=KC。

利用待测元素的共振辐射，通过其原子蒸汽，测定其吸光度的装置称为原子吸取分光光光源，原子化器，光学系统和检测系统。它紧要用于痕量元素杂质的分析，具有灵敏度高、精准明确度好和选择性好三大紧要优点。广泛应用于特种气体，金属有机化合物，金属醇盐中微量元素的分析。但是测定每种元素均需要相应的空心阴极灯，这对检测工作带来不便。

二、原子吸取分光光度计的特点：

1、灵敏度高：原子吸取分光光度法测定大多数金属元素的相对灵敏度为1.0×10—8～1.0×10—10g？mL—1,非火焰原子吸取分光光度法的确定灵敏度为1.0×10—12～1.0×10—14g。这是由于原子吸取分光光度法测定的是占原子总数99％以上的基态原子，而原子发射光谱测定的是占原子总数不到1％的激发态原子，所以前者的灵敏度和精准度比后者高的多。

2、精密度好：由于温度的变化对测定影响较小，该法具有良好的稳定性和重现性，精密度好。一般仪器的相对标准偏差为1％～3％，性能好的仪器可达0.1％～0.5%。

3、选择性强：由于原子吸取谱线仅发生在主线系，而且谱线很窄，线重叠几率较发射光谱要小很多，多以光谱干扰较小选择性强，而且光谱干扰简单克服。大多数情况下，共存元素不对原子吸取光谱产生干扰。由于选择性强，使得分析精准快速。分析一个元素只需数十秒至数分钟。

缺点：每测验一种元素就要使用一种元素灯而使得操作麻烦。对于某些多而杂的样品分析，尚存某些干扰问题需要解决。如何进一步提高灵敏度和降低干扰是当前和今后原子吸取分析工讨论的紧要课题。

三、原子吸取分光光度计的应用：

原子吸取分光光度计现巳广泛用于各个分析领域，紧要有四个方面：理论讨论；元素分析；有机物分析；金属化学形态分析

1、在理论讨论中的应用

原子吸取可作为物理和物理化学的一种试验手段，对物质的一些基本性能进行测定和讨论。电热原子化器简单做到掌控蒸发过程和原子化过程，所以用它测定一些基本参数有很多优点。用电热原子化器所测定的一些有元素离开机体的活化能、气态原子扩散系数、解离能、振子强度、光谱线轮廓的变宽、溶解度、蒸气压等。

2、在元素分析中应用

原子吸取光谱分析，由于其灵敏度高、干扰少、分析复合快速，现巳广泛地应用于工业、农业、生化、地质、冶金、食品、环保等各个领域，目前原子吸取巳成为金属元素分析的比较为有力工具之一，而且在很多领域巳作为标准分析方法。原子吸取光谱分析的特点决议了它在地质和冶金分析中的紧要地位，它不仅取代了很多一般的湿法化学分析，而且还与X—射线荧光分析，甚至与中子活化分析有着同等的地位。目前原子吸取法巳用来测定地质样品中40多种元素，并且大部分能够达到充分的灵敏度和很好的精密度。钢铁、合金和高纯金属中多种痕量元素的分析现在也多用原子吸取法。原子吸取在食品分析中越来越广泛。食品和饮料中的20多种元素巳有充分的原子吸取分析方法。生化和临床样品中必需元素和有害元素的分析现巳接受原子吸取法。有关石油产品、陶瓷、农业样品、药物和涂料中金属元素的原子吸取分析的文献报道近些年来越来越多。水体和大气等环境样品的微量金属元素分析巳成为原子吸取分析的紧要领域之一、利用间接原子吸取法尚可测定某些非金属元素。

3、在有机物分析中的应用

利用间接法可以测定多种有机物。8—羟基喹啉（Cu）、醇类（Cr）、醛类（Ag）、酯类（Fe）、酚类（Fe）、联乙酰（Ni）、酞酸（Cu）、脂肪胺（co）、氨基酸（Cu）、维生素C（Ni）、氨茴酸（Co）、雷米封（Cu）、甲酸奎宁（Zn）、有机酸酐（Fe）、苯甲基盘尼西林（Cu）、葡萄糖（Ca）、环氧化物水解酶（PbO、含卤素的有机化合物（Ag）等多种有机物，均通过