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文档简介
目次
前言.................................................................................................................................................ii
1适用范围.......................................................................................................................................1
2规范性引用文件...........................................................................................................................1
3方法原理.......................................................................................................................................1
4干扰和消除...................................................................................................................................1
5试剂和材料...................................................................................................................................1
6仪器和设备...................................................................................................................................2
7样品...............................................................................................................................................3
8分析步骤.......................................................................................................................................3
9结果计算与表示...........................................................................................................................4
10精密度和准确度.........................................................................................................................6
11质量保证和质量控制.................................................................................................................7
12废物处理.....................................................................................................................................7
附录A(规范性附录)方法的检出限和测定下限.......................................................................8
附录B(资料性附录)方法的精密度和准确度...........................................................................9
i
前言
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》,保护环境,保障人体健康,规范土壤和沉积物
中苯氧羧酸类农药的测定方法,制定本标准。
本标准规定了测定土壤和沉积物中苯氧羧酸类农药的高效液相色谱法。
本标准的附录A为规范性附录,附录B为资料性附录。
本标准为首次发布。
本标准由环境监测司和科技标准司组织制订。
本标准起草单位:青岛市环境监测中心站和农业部农产品质量安全监督检验测试中心(青
岛)。
本标准验证单位:天津市环境监测中心、山东省环境监测中心站、淄博市环境监测站、
青岛市农业科学研究院农产品质量标准与检测技术研究所、泰安市环境保护监测站和青岛华
测检测技术有限公司。
本标准生态环境部20□□年□□月□□日批准。
本标准自20□□年□□月□□日起实施。
本标准由生态环境部解释。
ii
土壤和沉积物苯氧羧酸类农药的测定高效液相色谱法
警告:实验中所用的有机溶剂、标准溶液和盐酸均具有一定的毒性和挥发性,试剂配制和样品
前处理过程应在通风柜内进行,操作时应按规定要求佩戴防护器具,避免接触皮肤和衣物。
1适用范围
本标准规定了测定土壤和沉积物中苯氧羧酸类农药的高效液相色谱法。
本标准适用于土壤和沉积物中3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸(麦草畏)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、
2-甲基-4-氯苯氧乙酸(MCPA)、2-(2,4-二氯苯氧基)-丙酸(2,4-DP)、2,4,5-三氯苯氧乙酸(2,4,5-T)、
4-(2,4-二氯苯氧基)-丁酸(2,4-DB)和2-(2,4,5-三氯苯氧基)-丙酸(2,4,5-TP)等7种苯氧羧酸
类农药的测定。其他苯氧羧酸类农药通过验证,也可以采用本标准进行测定。
当样品取样量为20g时,方法检出限为0.005mg/kg~0.009mg/kg,测定下限为0.020mg/kg~0.036
mg/kg。详见附录A。
2规范性引用文件
本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注明日期的引用文件,其有效版本适用于本标
准。
GB17378.3海洋监测规范第3部分:样品采集、贮存与运输
GB17378.5海洋监测规范第5部分:沉积物分析
HJ613土壤干物质和水分的测定重量法
HJ494水质采样技术指导
HJ/T91地表水和污水监测技术规范
HJ/T166土壤环境监测技术规范
3方法原理
样品中苯氧羧酸类农药用乙腈超声提取,提取液经固相萃取柱净化浓缩后,用具有紫外检测器
的高效液相色谱进行分离测定。根据保留时间定性,外标法定量。
4干扰和消除
样品中含有胺苯磺隆、甲嘧磺隆、苄嘧磺隆、吡嘧磺隆、氯嘧磺隆、甲磺隆、烟嘧磺隆、噻吩
磺隆、醚苯磺隆和氯磺隆10种磺酰脲类除草剂,甲草胺、乙草胺和丁草胺3种酰胺类除草剂和三嗪
类除草剂阿特拉津时,只有氯磺隆与2,4-D的色谱峰有部分重叠,可以通过改变色谱条件进行分离;
如果柱效降低,阿特拉津与MCPA的色谱峰将无法达到基线分离。其他除草剂不干扰测定。
5试剂和材料
除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂,实验用水为不含目标物的纯水。
5.1盐酸:ρ(HCl)=1.19g/ml。
5.2磷酸:ρ(H3PO4)=1.87g/ml。
1
5.3氯化钠(NaCl)。
使用前在140℃烘箱中烘4h。
5.4甲酸(HCOOH):色谱纯。
5.5乙腈(CH3CN):农残级。
5.6甲醇(CH3OH):农残级。
5.7二氯甲烷(CH2Cl2):农残级。
5.8丙酮(CH3COCH3):农残级。
5.9甲醇水溶液:2+3。
5.10盐酸溶液:1+1。
5.11洗脱溶液。
取50ml甲醇(5.6)、950ml二氯甲烷(5.7)和20ml甲酸(5.4),混匀。
5.12苯氧羧酸类农药标准贮备液:ρ=1.00mg/ml。
可直接购买有证标准溶液,也可用有证标准物质以丙酮为溶剂配制标准贮备液。标准贮备液,
应在4℃以下避光、冷藏保存或参照制造商的产品说明。
5.13苯氧羧酸类农药标准中间液:ρ=100µg/ml。
准确量取1.00ml苯氧羧酸类农药标准贮备液(5.12)于10ml容量瓶中,用丙酮(5.8)稀释至
标线,在4℃以下避光、冷藏保存。
5.14苯氧羧酸类农药标准使用液:ρ=2.00µg/ml。
准确量取200µl苯氧羧酸类农药标准中间液(5.13)于10ml容量瓶中,用甲醇水溶液(5.9)
稀释至标线,在4℃以下避光、冷藏,可保存40d。
5.15石英砂:900μm(20目)。
使用前在400℃马弗炉中灼烧3h。
5.16固相萃取柱:石墨炭黑和氨基串联固相萃取柱,500mg/6ml。
5.17滤膜:0.22µm聚四氟乙烯膜。
5.18氮气:纯度≥99.99%
6仪器和设备
6.1液相色谱仪:耐压600bar以上,具紫外检测器或二极管阵列检测器。
6.2色谱柱:填料粒径为2.7µm,柱长15cm,内径4.6mm的C8反相色谱柱,或其它适用于酸性
条件的等效色谱柱。
6.3超声波清洗器:500W以上或其他等效提取装置。
6.4采样瓶:250ml具磨口塞广口棕色玻璃瓶或聚四氟乙烯衬垫螺口棕色玻璃瓶。
6.5减压浓缩装置:旋转蒸发器等。
6.6氮吹仪。
6.7固相萃取装置。
6.8具塞容器:100ml,具塞量筒、分液漏斗等。
6.9一般实验室常用仪器和设备。
2
7样品
7.1样品采集与保存
按照HJ/T166相关规定采集土壤样品,按照HJ/T91和HJ494的相关规定采集地表水沉积物样
品,按照GB17378.3相关规定采集海洋沉积物样品。样品保存在预先清洗洁净的采样瓶(6.4)中,
尽快运回实验室分析,运输过程中应密封、避光。如暂不能分析,应在4℃以下冷藏、避光保存,
保存时间为40d。净化后的提取液(7.3.2)在4℃以下冷藏、避光可保存14d。
7.2样品的制备
除去样品中的异物(石子、叶片等),称取两份样品,一份约10g(精确到0.01g)用于干物质
的测定或含水率的测定,另一份用于试样的制备。
7.3水分的测定
按照HJ613进行土壤样品干物质的测定;按照GB17378.5进行沉积物样品含水率的测定。
7.4试样制备
7.4.1提取
称取20g(精确到0.01g)样品(7.2)于250ml锥形瓶中,加入20ml水,1.5ml盐酸溶液(5.10)
(使水的pH值≤2),准确加入40.0ml乙腈(5.5),超声提取20min,提取液过滤到含有5gNaCl
(5.3)的具塞容器(6.8)中,再加入40.0ml乙腈重复提取一次,合并两次滤液,振摇萃取3min,
放置30min,待水相与乙腈相分层,准确分取20.0ml乙腈溶液于浓缩瓶中,用减压浓缩装置(6.5)
浓缩至1ml左右,待净化。
7.4.2净化
用5ml洗脱溶液(5.11)活化固相萃取柱(5.16)。待洗脱溶液接近固相萃取柱柱床表面时,将
待净化的试样(7.4.1)转移到固相萃取柱上,用5ml洗脱溶液洗涤浓缩瓶,并转移到固相萃取柱中,
再重复操作3次,合并收集所有洗脱液。将洗脱液用减压浓缩装置(6.5)浓缩至2ml左右,然后用氮
气流吹干,加入1.00ml甲醇(5.6)溶解后,再加入水1.50ml混匀,用滤膜(5.17)过滤,待测。
7.5空白试样的制备
用石英砂(5.15)代替样品,按照与试样的制备(7.4)相同的步骤进行空白试样的制备。
8分析步骤
8.1仪器参考条件
流动相A:甲醇,流动相B:磷酸水溶液(用磷酸调pH=3.0),流速:0.5ml/min,柱温:30℃,
检测波长:230nm,进样量:40μl。梯度洗脱程序见表1。
3
表1梯度洗脱条件
时间(min)流动相A(%)流动相B(%)
04060
14060
186535
266535
30~32955
33~424060
注:30~32min用于清洗色谱柱,清洗时间可根据实际样品的复杂程度进行调整。33~42min为色
谱柱的平衡时间。
8.2标准曲线的建立
分别取适量苯氧羧酸类农药标准使用液(5.14),用甲醇水溶液(5.9)稀释,制备至少5个浓度
点的标准系列,目标化合物的质量浓度分别为0.020mg/L、0.050mg/L、0.100mg/L、0.500mg/L、
1.00mg/L、2.00mg/L(此为参考浓度)。按照仪器的参考条件(8.1),由低浓度到高浓度依次进样,
以标准系列溶液中目标化合物的质量浓度(mg/L)为横坐标,对应的峰面积或峰高为纵坐标,建立
标准曲线。
8.3测定
按照与标准曲线的建立(8.2)相同的仪器条件进行试样(7.4.2)的测定。
8.4空白试验
按照与试样测定(8.3)相同的仪器进行空白试样(7.5)的测定。
9结果计算与表示
9.1定性分析
根据样品中目标化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性。必要时,可采用标准添
加法、不同波长下的吸收比或扫描紫外吸收光谱等方法辅助定性或采用高效液相色谱-质谱法对目标
化合物进行确认。
在本标准规定的仪器参考条件(8.1)下,苯氧羧酸类农药的标准色谱图见图1。
4
mAU
236
254
15
7
20
15
10
5
0
1015202530min
1-麦草畏;2-2,4-D;3—MCPA;4—2,4-DP;5—2,4,5-T;6—2,4-DB;7—2,4,5-TP。
图1苯氧羧酸类农药的标准色谱图(ρ=0.500mg/L)
9.2结果计算
土壤中苯氧羧酸类农药的含量(),按照公式()进行计算。
9.2.1wimg/kg1
VV
12i()
wi1
V3mwdm
式中:目标化合物组份的含量,;
wi——img/kg
提取液总体积,;
V1——ml
提取液净化后的定容体积,;
V2——ml
由标准曲线计算得到的试样中目标化合物组份的质量浓度,;
i——img/L
提取液的分取体积,;
V3——ml
m——样品重量(湿重),g;
样品干物质含量,。
wdm——%
9.2.2沉积物中苯氧羧酸类农药的含量(),按照公式()进行计算。
wimg/kg2
VV
w12i(2)
iVm(1w)
3H2O
式中:目标化合物组份的含量,;
wi——img/kg
提取液总体积,;
V1——ml
提取液净化后的定容体积,;
V2——ml
由标准曲线计算得到的试样中目标化合物组份的质量浓度,;
i——img/L
提取液的分取体积,;
V3——ml
m——样品重量(湿重),g;
w
H2O——样品含水率,%。
5
9.3结果表示
当测定结果小于1.00mg/kg时,保留至小数点后三位;当测定结果大于等于1.00mg/kg时,保
留三位有效数字。
10精密度和准确度
10.1精密度
6个实验室分别对空白加标7种苯氧羧酸类农药浓度为0.040mg/kg、0.200mg/kg、0.800mg/kg
的样品进行了6次重复测定,7种苯氧羧酸类农药的实验室内相对标准偏差分别为:2.2%~15%,
2.6%~14%,0.8%~8.6%;实验室间相对标准偏差分别为:5.6%~15%,6.0%~9.1%,1.8%~5.7%;
重复性限r分别为:0.006mg/kg~0.014mg/kg,0.025mg/kg~0.049mg/kg,0.039mg/kg~0.114mg/kg;
再现性限R分别为:0.009mg/kg~0.019mg/kg,0.041mg/kg~0.066mg/kg,0.066mg/kg~0.160
mg/kg。
6个实验室分别对沉积物加标7种苯氧羧酸类农药浓度为0.040mg/kg、0.200mg/kg的样品进行
了6次重复测定,7种苯氧羧酸类农药的实验室内相对标准偏差分别为:1.4%~19%,1.7%~14%;
实验室间相对标准偏差分别为:6.0%~11%,3.5%~12%;重复性限r分别为:0.008mg/kg~0.015
mg/kg,0.022mg/kg~0.044mg/kg;再现性限R分别为:0.011mg/kg~0.015mg/kg,0.029mg/kg~
0.061mg/kg。
6个实验室分别对土壤加标7种苯氧羧酸类农药浓度为0.040mg/kg、0.200mg/kg、0.800mg/kg
的样品进行了6次重复测定,7种苯氧羧酸类农药的实验室内相对标准偏差分别为:3.6%~23%,
3.4%~12%、3.1%~14%,;实验室间相对标准偏差分别为:3.8%~11%,6.5%~12%,3.4%~12%;
重复性限r分别为:0.008mg/kg~0.015mg/kg,0.041mg/kg~0.050mg/kg,0.154mg/kg~0.182mg/kg;
再现性限R分别为:0.010mg/kg~0.015mg/kg,0.07mg/kg~0.074mg/kg,0.171mg/kg~0.287mg/kg。
10.2准确度
6个实验室分别对空白加标7种苯氧羧酸类农药浓度为0.040mg/kg、0.200mg/kg、0.800mg/kg
的样品进行了分析测定,7种苯氧羧酸类农药的加标回收率分别为:81.9%~118%,82.4%~110%,
86.9%~106%;加标回收率最终值为:93.5%±27.6%~109%±13.2%,90.9%±16.2%~100%±12.2%,
91.4%±8.2%~99.4%±4.8%。
6个实验室分别对沉积物加标7种苯氧羧酸类农药浓度为0.040mg/kg、0.200mg/kg的样品进行
了分析测定,7种苯氧羧酸类农药的加标回收率分别为:84.7%~116%,71.1%~103%;加标回收率
最终值分别为:97.7%±21.6%~107%±15.8%,82.4%±19.2%~93.2%±6.2%。
6个实验室分别对土壤加标7种苯氧羧酸类农药浓度为0.040mg/kg、0.200mg/kg、0.800mg/kg
的样品进行了分析测定,7种苯氧羧酸类农药的加标回收率分别为:78.1%~113%,84.5%~117%,
70.5%~104%;加标回收率最终值分别为:93.8%±10.8%~103%±13.0%,96.2%±17.4%~
102%±10.2%,87.5%±20.6%~98.9%±7.6%。
精密度和准确度结果参见附录B。
6
11质量保证和质量控制
11.1空白试验
每20个样品或每批次(少于20个样品)应至少做2个实验室空白,空白中目标化合物的浓度
应低于方法检出限。
11.2校准
校准曲线的相关系数≥0.999。每20个样品或每批次(少于20个样品)应测定一个校准曲线中
间浓度点标准溶液,测定结果与曲线该点浓度的相对误差应在±15%以内。
11.3平行样
每10个样品或每批次(少于10个样品)应做一个平行样,样品含量小于0.1mg/kg,平行样的
相对偏差≤30%,样品含量大于0.1mg/kg,平行样的相对偏差≤25%。
11.4空白加标和基体加标
每20个样品或每批次(少于20个样品)应做一个空白加标样,加标回收率在75%~130%之间。
每10个样品应做一个基体加标,基体加标回收率应控制在65%~130%范围内。
12废物处理
实验中产生的有机废液应集中收集和保管,委托有资质的单位进行处理。
7
附录A
(规范性附录)
方法的检出限和测定下限
表A.1给出7种苯氧羧酸类农药的名称、简称、CAS号及方法的检出限和测定下限。
表A.1方法的检出限和测定下限
出峰顺序化合物名称化合物简称CAS号方法检出限(mg/kg)定量下限(mg/kg)
13,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸麦草畏1918-00-90.0080.032
22,4-二氯苯氧乙酸2,4-D94-75-70.0050.020
32-甲基-4-氯苯氧乙酸MCPA94-74-60.0070.028
42-(2,4-二氯苯氧基)-丙酸2,4-DP120-36-50.0080.032
52,4,5-三氯苯氧乙酸2,4,5-T93-76-50.0090.036
64-(2,4-二氯苯氧基)-丁酸2,4-DB94-82-60.0070.028
72-(2,4,5-三氯苯氧基)-丙酸2,4,5-TP93-72-10.0090.036
8
附录B
(资料性附录)
方法的精密度和准确度
表B.1和表B.2分别给出了方法的精密度和准确度。
表B.1方法的精密度
化合物平均值实验室内相对实验室间相对重复性限r再现性限R
样品类型
名称(mg/kg)标准偏差(%)标准偏差(%)(mg/kg)(mg/kg)
0.0402.2~7.05.80.0070.009
麦草畏0.2003.0~5.86.00.0250.041
0.8000.8~3.02.50.0390.066
0.0403.1~8.27.10.0070.011
2,4-D0.2004.8~6.96.10.0310.044
0.8001.1~4.71.80.0660.072
0.0405.1~13150.0110.019
MCPA0.2005.4~8.38.90.0330.054
0.8001.8~7.14.00.0940.122
0.0402.6~125.60.0100.011
空白
2,4-DP0.2004.6~8.18.50.0320.053
加标
0.8002.1~8.63.60.0960.118
0.04011~15110.0140.018
2,4,5-T0.2005.5~149.00.0490.066
0.8004.1~6.75.70.1150.160
0.0403.5~6.37.30.0060.010
2,4-DB0.2002.6~7.56.70.0290.045
0.8001.3~7.24.70.0710.121
0.0403.0~128.20.0090.013
2,4,5-TP0.2006.1~129.10.0450.063
0.8003.1~7.04.50.1060.133
麦草畏3.5~9.27.10.0080.011
2,4-D3.1~16110.0100.015
0.040
MCPA4.1~168.40.0120.014
水库底泥2,4-DP3.1~167.70.0120.014
2,4,5-T3.1~196.10.0150.015
2,4-DB2.8~166.00.0100.012
2,4,5-TP1.4~187.70.0120.014
麦草畏3.5~14120.0320.061
黄河口2,4-D2.5~7.28.20.0220.044
0.200
沉积物MCPA3.7~137.30.0440.055
2,4-DP1.7~8.23.50.0250.029
9
化合物平均值实验室内相对实验室间相对重复性限r再现性限R
样品类型
名称(mg/kg)标准偏差(%)标准偏差(%)(mg/kg)(mg/kg)
2,4,5-T3.3~125.90.0370.045
2,4-DB3.2~8.03.40.0290.032
2,4,5-TP2.6~5.98.30.0240.047
麦草畏5.2~113.80.0100.010
2,4-D4.9~16110.0090.014
MCPA4.4~235.60.0150.015
江西
2,4-DP0.0403.8~197.90.0120.014
红土
2,4,5-T6.8~157.70.0120.013
2,4-DB5.5~8.66.40.0090.011
2,4,5-TP3.6~117.80.0080.011
麦草畏5.6~129.50.0490.069
2,4-D3.5~105.00.0410.047
MCPA6.9~127.60.0470.060
青岛潮棕
2,4-DP0.2003.4~119.70.0430.065
土
2,4,5-T5.8~119.00.0500.067
2,4-DB4.9~10120.0410.074
2,4,5-TP3.7~108.10.0440.061
麦草畏4.6~9.94.30.1550.171
2,4-D6.1~9.53.90.1640.172
MCPA3.1~126.90.1710.211
黑龙江
2,4-DP0.8004.8~144.90.1820.195
黑土
2,4,5-T3.8~11130.1660.287
2,4-DB3.7~116.80.1540.195
2,4,5-TP4.7~14120.1590.271
10
表B.2方法的准确度
加标浓度
样品类型化合物简称加标回收率范围(%)P%S(%)P2S(%)
(mg/kg)PP
0.040101~1181096.6109±13.2
麦草畏
0.20094.8~1101006.1100±12.2
0.80096.6~10399.42.499.4±4.8
0.04097.1~1171067.6106±15.2
2,4-D0.20092.1~10698.56.098.5±12.0
0.80097.2~10298.91.798.9±3.4
0.04083.5~11593.513.893.5±27.6
MCPA0.20083.9~10690.98.190.9±16.2
0.80091.3~10196.83.796.8±7.4
0.04095.5~1101025.8102±11.6
石英砂
2,4-DP0.20082.8~10293.98.093.9±16.0
加标
0.80093.2~10396.93.496.9±6.8
0.04081.9~11397.211.097.2±22.0
2,4,5-T0.20083.7~10495.78.695.7±17.2
0.80087.9~10494.75.394.7±10.6
0.04097.5~1181087.8108±15.6
2,4-DB0.20090.5~10897.86.697.8±13.2
0.80094.0~10696.84.696.8±9.2
0.04092.1~1141039.0103±18.0
2,4,5-TP0.20082.4~10692.58.692.5±17.2
0.80086.9~99.191.44.191.4±8.2
麦草畏95.6~1161077.9107±15.8
2,4-D84.7~11397.710.897.7±21.6
MCPA89.6~11098.58.098.5±16.0
水库底
2,4-DP93.6~1161048.0104±16.0
泥
2,4,5-T0.0488.2~10697.95.897.9±11.6
2,4-DB97.7~1151066.4106±12.8
2,4,5-TP90.9~1161058.1105±16.2
麦草畏71.1~95.482.49.682.4±19.2
2,4-D80.6~95.686.17.086.1±14.0
MCPA85.3~10392.36.892.3±13.6
黄河口0.200
2,4-DP88.0~96.890.73.290.7±6.4
底泥
2,4,5-T78.8~94.587.15.287.1±10.4
2,4-DB90.7~98.493.23.193.2±6.2
2,4,5-TP81.1~10289.77.289.7±14.4
麦草畏101~1111054.0105±8.0
江西红2,4-D0.04078.1~11095.610.295.6±20.4
土MCPA87.6~10093.85.493.8±10.8
2,4-DP90.7~11299.87.899.8±15.6
11
加标浓度
样品类型化合物简称加标回收率范围(%)P%S(%)P2S(%)
(mg/kg)PP
2,4,5-T82.0~10494.97.294.9±14.4
2,4-DB96.5~1131036.5103±13.0
2,4,5-TP89.9~11196.27.696.2±15.2
麦草畏91.5~1161009.7100±19.4
2,4-D*95.6~1091025.1102±10.2
MCPA90.2~10998.07.398.0±14.6
青岛潮0.200
2,4-DP86.5~11497.49.697.4±19.2
棕土
2,4,5-T84.5~11096.28.796.2±17.4
2,4-DB85.5~11797.711.397.7±22.6
2,4,5-TP91.9~1151008.2100±16.4
麦草畏95.1~10498.93.898.9±7.6
2,4-D90.5~99.294.33.294.3±6.4
MCPA80.7~99.891.97.191.9±14.2
黑龙江
2,4-DP0.80084.0~96.492.14.892.1±9.6
黑土
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