(高清版)GBT 40832-2021 芒果叶中芒果苷的测定 高效液相色谱法

芒果叶中芒果苷的测定高效液相色谱法2021-10-11发布2022-05-01实施I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国标准化研究院提出并归口。本文件起草单位：中国热带农业科学院分析测试中心、深圳市品牌建设促进中心、重庆两江创享医药检验认证科技有限公司、中国标准化研究院、食药环检验研究院(山东)集团有限公司、中山内得农业科技有限公司、大连依利特分析仪器有限公司、华测检测认证集团股份有限公司、江苏康华信息科技有限公司、中关村国际医药检验认证科技有限公司。1芒果叶中芒果苷的测定高效液相色谱法本文件描述了芒果叶中芒果苷含量的高效液相色谱法测定方法。本文件适用于芒果叶中芒果苷含量的测定。对含有芒果苷产品的含量检测可参照使用。本文件检出限为0.75mg/g,定量限为2.50mg/g。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。样品中加入70%甲醇溶液，经超声辅助提取，高效液相色谱法分离及在258nm下测定，根据保留时间定性，外标法定量。5试剂与材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682中一级水的要求。5.1试剂5.2溶液配制5.2.170%(体积分数)甲醇溶液：量取700mL甲醇，加300mL超纯水，混匀。5.2.2流动相A:0.1%甲酸溶液，1L超纯水中加入1mL甲酸，充分混匀。5.3标准品芒果苷(C₉HO₁,CAS号：4773-96-0):纯度≥98%25.4标准溶液配置5.4.1芒果苷标准储备溶液(200μg/mL):称取10mg(精确至0.0001g)芒果苷，置于50mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度线，配制成200μg/mL的标准储备溶液，-18℃冰箱避光保存，有效期3个月。5.4.2芒果苷中间浓度标准溶液：准确移取0.5mL芒果苷标准储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至定容刻度线，摇匀，得到芒果苷中间浓度标准溶液(质量浓度10μg/mL)。5.4.3芒果苷系列标准工作溶液：分别准确移取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL芒果苷中间浓度标准溶液于不同的10mL容量瓶中，用70%甲醇溶液稀释、定容，摇匀，得到芒果苷系列标准工作溶液(质量浓度分别为0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL)。5.5材料5.5.5聚四氟乙烯(PTFE)微孔滤膜(孔径0.22μm,直径13mm)或者相当者。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪：配紫外(UV)检测器或二极管阵列检测器(DAD或PDA)。6.2电子天平：感量0.0001g和0.01g。6.3超声波振荡仪：功率不低于250W,或相当的设备。6.4组织捣碎机。6.5高速组织匀浆机。7试样制备与保存新鲜芒果叶片充分打碎、混匀，置于洁净容器中，密封并做好标记，于一18℃冰箱避光保存。8测定步骤芒果叶试样解冻，称取1g(精确至0.01g),置于100mL离心管中，加入提取溶剂70%甲醇溶液60mL,18000r/min高速匀浆1min,将样品转移到250mL具塞磨口三角瓶中，另取60mL提取溶剂洗涤离心管和刀头，并将溶剂转移至三角瓶中。将三角瓶瓶塞盖上，室温下超声提取30min,取出，静置，使分层。将上清液转入250mL容量瓶中。三角瓶中再加入70%甲醇溶液100mL,超声30min,对样品进行二次提取，提取液合并至250mL容量瓶，用70%甲醇溶液定容，摇匀，得到芒果叶样品提取液。吸取样品提取液1.0mL,放入100mL容量瓶中，用70%甲醇溶液定容，摇匀。取适量体积样品溶GB/T40832—20218.2测定8.2.1高效液相色谱参考条件高效液相色谱参考条件如下：b)流动相：乙腈：甲酸水溶液(0.1%)=15:85(体积比);8.2.2标准曲线绘制分别取适量的芒果苷系列标准工作溶液(0.1μg/mL～2.0μg/mL),按照8.2.1列出的条件进行液相色谱分析测定。以标准溶液质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，建立标准工作曲线。芒果苷标准溶液色谱图参见附录A中的图A.1。将试样溶液按照8.2.1列出的条件进行液相色谱分析测定，根据标准样品的保留时间定性。试样溶液中芒果苷的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析，外标法定量。9结果计算9.1结果计算试样中目标物的含量按式(1)计算： (1)X——试样中芒果苷的质量分数，单位为毫克每克(mg/g)p——样品溶液中芒果苷的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);V——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL);n——稀释倍数；m——试样质量，单位为克(g);1000——换算系数。9.2结果表示测定结果以