DBS22 007-2013 食品安全地方标准 水产品中炔诺酮的测定 ELISA法

DBS22 ELISA

吉林省卫生厅

DBS22/007—2013前 言本标准起草单位：长春市水产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：闫先春、杨炳坤、杨立军、王雅倩、修磊。IDBS22/007—2013食品安全地方标准水产品中炔诺酮的测定

法1

范围本标准规定了水产品中炔诺酮的酶联免疫测定方法。本标准适用于水产品中炔诺酮的快速筛选检测。本标准的检出限为2

。2

规范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T

6682 SC/T

3016 水产品抽样方法3

原理利用抗原抗体的特异性反应，样本中残留的炔诺酮和预包被的偶联抗原竞争炔诺酮抗体，加入酶标二抗显色后，样本吸光值与其所含残留物炔诺酮的含量成负相关，外标法定量。4

试剂与材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T

6682一级水的标准。4.1 亚硝基铁氰化钠（C5FeN6Na2O.2H2O）。4.2 硫酸锌(ZnSO4.7H2O)

。4.3 乙腈。4.4 氢氧化钠。4.5 0.36

moL/L

亚硝基铁氰化钠溶液:称取

g

mL

4.6 1

moL/L

28.8

g

硫酸锌加

100

mL

水溶解混匀。4.7 0.1

moL/L

氢氧化钠溶液:称取

0.4

g

100

mL

水溶解混匀。4.8 乙腈-0.1

氢氧化钠溶液:量取

84

mL

16

mL

0.1

moL/L

氢氧化钠溶液中混匀。4.9 试剂盒提供试剂包括：96

终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。4.10刻度移液管：10

mL。4.11 洗耳球。4.12 玻璃试管：10

mL。4.13 聚苯乙烯离心管：2

1DBS22/007—20135

仪器与设备5.1

酶标仪或酶联免疫分光光度计(450

nm)

。5.2

天平：感量

0.01

g。5.3

洗板机。5.4

旋转蒸发仪/氮气吹干装置。5.5

均质器。5.6

振荡器。5.7

涡旋仪。5.8

离心机(4000r/min)

。5.9

微量移液器：单道

µL～200

µ

µ

µL、多道

250

µL。6

测定方法6.1 制备与保存6.1.1 抽样：按

3016-2004

的方法进行。6.1.2

记，放入-18℃冰柜中冷冻保存。6.2 提取纯化6.2.1 称取

2.0±0.05

g

50

7

mL

乙腈-0.1

moL/L

氢氧化钠溶液（4.8），加入

硝基铁氰化钠溶液（4.5），1

500

µL，用振荡器振荡

min，3000

10

6.2.2 取

1

mL

10

mL

50℃～60℃水浴氮气流下吹干；6.2.3 取

1

mL

1︰4体积比进行稀释（取

100

µL

样本液+400

µL

复溶工作液），涡动混匀；取

50

µL

用于分析。6.3 测定6.3.1 将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20℃～25℃）平衡

30

min，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。6.3.2 取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入自封袋，保存于

2℃～8℃。6.3.3 洗涤工作液在使用前也需回温。6.3.4 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做

2

本孔所在的位置。6.3.5

50

50/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置

37℃

30

。6.3.64.9）250

4～5

次，每次间隔

10

s6.3.7 加酶标二抗：加入酶标二抗

孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于

37℃环境中反应30

，取出重复洗板步骤

6.3.6.6.3.8

50

℃

15

。2DBS22/007—20136.3.9 测定：加入终止液

50

/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于

450

nm处，在

5

内读完数据，测定每孔

OD

值。7

结果计算以

100%，即公式（1）：=

AA0

………（1）式中：E———%；A———标准液或样品液吸光度值；A———空白样品吸