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文档简介
DBS22 ELISA
吉林省卫生厅
DBS22/007—2013前 言本标准起草单位:长春市水产品质量安全检测中心。本标准主要起草人:闫先春、杨炳坤、杨立军、王雅倩、修磊。IDBS22/007—2013食品安全地方标准水产品中炔诺酮的测定
法1
范围本标准规定了水产品中炔诺酮的酶联免疫测定方法。本标准适用于水产品中炔诺酮的快速筛选检测。本标准的检出限为2
。2
规范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T
6682 SC/T
3016 水产品抽样方法3
原理利用抗原抗体的特异性反应,样本中残留的炔诺酮和预包被的偶联抗原竞争炔诺酮抗体,加入酶标二抗显色后,样本吸光值与其所含残留物炔诺酮的含量成负相关,外标法定量。4
试剂与材料除另有规定外,所用试剂均为分析纯,试验用水符合GB/T
6682一级水的标准。4.1 亚硝基铁氰化钠(C5FeN6Na2O.2H2O)。4.2 硫酸锌(ZnSO4.7H2O)
。4.3 乙腈。4.4 氢氧化钠。4.5 0.36
moL/L
亚硝基铁氰化钠溶液:称取
g
mL
4.6 1
moL/L
28.8
g
硫酸锌加
100
mL
水溶解混匀。4.7 0.1
moL/L
氢氧化钠溶液:称取
0.4
g
100
mL
水溶解混匀。4.8 乙腈-0.1
氢氧化钠溶液:量取
84
mL
16
mL
0.1
moL/L
氢氧化钠溶液中混匀。4.9 试剂盒提供试剂包括:96
终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。4.10刻度移液管:10
mL。4.11 洗耳球。4.12 玻璃试管:10
mL。4.13 聚苯乙烯离心管:2
1DBS22/007—20135
仪器与设备5.1
酶标仪或酶联免疫分光光度计(450
nm)
。5.2
天平:感量
0.01
g。5.3
洗板机。5.4
旋转蒸发仪/氮气吹干装置。5.5
均质器。5.6
振荡器。5.7
涡旋仪。5.8
离心机(4000r/min)
。5.9
微量移液器:单道
µL~200
µ
µ
µL、多道
250
µL。6
测定方法6.1 制备与保存6.1.1 抽样:按
3016-2004
的方法进行。6.1.2
记,放入-18℃冰柜中冷冻保存。6.2 提取纯化6.2.1 称取
2.0±0.05
g
50
7
mL
乙腈-0.1
moL/L
氢氧化钠溶液(4.8),加入
硝基铁氰化钠溶液(4.5),1
500
µL,用振荡器振荡
min,3000
10
6.2.2 取
1
mL
10
mL
50℃~60℃水浴氮气流下吹干;6.2.3 取
1
mL
1︰4体积比进行稀释(取
100
µL
样本液+400
µL
复溶工作液),涡动混匀;取
50
µL
用于分析。6.3 测定6.3.1 将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20℃~25℃)平衡
30
min,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。6.3.2 取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放入自封袋,保存于
2℃~8℃。6.3.3 洗涤工作液在使用前也需回温。6.3.4 编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做
2
本孔所在的位置。6.3.5
50
50/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置
37℃
30
。6.3.64.9)250
4~5
次,每次间隔
10
s6.3.7 加酶标二抗:加入酶标二抗
孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置于
37℃环境中反应30
,取出重复洗板步骤
6.3.6.6.3.8
50
℃
15
。2DBS22/007—20136.3.9 测定:加入终止液
50
/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于
450
nm处,在
5
内读完数据,测定每孔
OD
值。7
结果计算以
100%,即公式(1):=
AA0
………(1)式中:E———%;A———标准液或样品液吸光度值;A———空白样品吸
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