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文档简介
50DB34
34/T
1421水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定-酶联免疫吸附法Quick
Screening
residues
metabolite
2011
2011
安徽省质量技术监督局
DB34/T
2011前 言
DB34/T
2011水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定-酶联免疫吸附法
范围Malachite
green，MGLeucomalachitegreen，LMGELISALC/MS-MS
规范性引用文件
原理本方法基于竞争性酶联免疫方法原理。样品中
MG
LMG
经提取液和乙腈等提取纯化后，LMG
过氧化剂被氧化为
MG，与
MG-生物素竞争微孔板上包被的
MG
抗体，没有结合的
MG-生物素在洗板中
在洗板中被去除。结合的酶使随后加入的
HRP
MG
LMG
含量越少，则结合结果用酶标仪在波长
450
MG
LMG
试剂和材料
实验室用试剂：所用试剂除另有规定外，均为分析纯。水为符合
GB/T
6682
ng/mL、0.15
ng/mL。
应在有效期内。超过
个月不使用，生物素耦合物、辣根过氧化物酶标记的链亲和素以及标准品应保存在
提取液
90
mL
DB34/T
2011
min
100
4.5.10
素稀释液（4.3.9）稀释
100
倍。4.5.11 洗液。使用前
10
20
倍。4.5.12
4.5.13
仪器和设备
L～100
L；100
L～1000
L；
50
L～300
L。
5.10
聚四氟乙烯离心管：5
mL，50
测定方法6.1
制备与保存
3016-2004
食用样品取可食部分，匀质到粉碎均匀（糊状），装入干净容器，标明标记，
-20℃
保存。
苗种样品直接匀质到粉碎均匀（糊状），装入干净容器，标明标记，
-20℃
6.2
提取与纯化
操作之前将试剂盒中所有试剂在室温（20℃～25℃）下放置
h～2
h。
称取
2.00
g（±0.0001
50
mL
B（4.3.3）和
6.0
mL
min
或者振摇
20
min。4000
离心
10
2.0
mL
上清液到预先加入
300
mg
离心管中，2500r/min
10
减压蒸馏或者
50℃～60℃水浴氮气吹干。加入
100
的氧化剂液（4.3.5），涡旋振荡
min，4000
离心
15
400
样品提取液
后，4000
24
稀释倍数：1.5。DB34/T
20116.3
酶联免疫测定
min。
洗板，方法同
迅速在每孔中加入
100
10
min～15
min。6.3.10 迅速在每孔中加入
100
450
6.4
结果计算6.4.1
计算相对吸光度值
×
....................................
A
B
B0
--
ng/mL
6.4.2
绘制标准曲线以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度的对数值（log10）为横坐标绘制标准曲线。每次实验均需重6.4.3
样品结果计算
×
.......................................
X
/kg）C
n
方法的检出限、回收率、重复性7.1
检出限
/kg。DB34/T
20117.2
回收率
/kg～4
/kg
浓度水平时，回收率为
70％
120％。7.3
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