药物的鉴别-鉴别方法（药物制剂检查课件）

020103薄层色谱法高效液相色谱法气相色谱鉴别法一、色谱鉴别法色谱鉴别法是指利用不同物质在不同的色谱条件下，比移值（Rf）或保留时间（tR)不同进行鉴别的方法。采用和对照品在相同的色谱条件下进行分离，然后对比，根据比移值（Rf）或保留时间（tR）等是否一致来判定样品是否符合标准。因此，色谱法可用于多组分中的药物鉴别。一、色谱鉴别法

薄层色谱法鉴别原理为同一种药物在同样条件下的薄层色谱行为相同。一般采用对照品（或标准品）比较法，将供试品和对照品（或标准品）按药典规定，用同种溶剂配成同样浓度的溶液，在同一薄层板上点样、展开、显色，要求供试品斑点应与对照品（或标准品）斑点的位置（Rf）和颜色一致。薄层色谱法简单易行，适用于鉴别药物及其制剂的真伪；其应用范围日益扩大，特别是高效薄层色谱应用于中药鉴别方面。1、薄层色谱法

在薄层色谱鉴别时需注意，点样基线距底边10～15mm，高效板一般基线离底边8～10mm。点样时小心，不要损伤薄层表面；点样的直径一般不大于3mm，高效板一般不大于2mm；点间距离可视斑点扩散情况调整，并保证相邻斑点互不干扰，一般不少于8mm，高效板供试品间隔不少于5mm。展开前如果需要溶剂蒸气预平衡，可在展开缸中加人适量的展开剂，密闭保持15～30min。溶剂蒸气预平衡后，迅速将点好供试品的薄层板放入展开缸中，进入展开剂的深度为距原点5mm为宜，展开剂不得没过原点，密闭，静置。除另有规定外，一般上行展开8～15cm，高效薄层板上行展开5～8cm。溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干，待检测。1、薄层色谱法1、薄层色谱法供试品显色的方法：①含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。②有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在365nm紫外光灯下观察荧光色谱。③对于可见光下无色、但在紫外光下有吸收的成分可用荧光薄层板（如硅胶GF254板）检测。硅胶GF254板是在硅胶中掺入了少量荧光物质而制成的板，在254nm紫外灯下，整个薄层板呈黄绿色荧光，被测物质由于荧光灭作用而呈现暗斑。

1、薄层色谱法

如葡萄糖酸钙鉴别项下要求“取本品50g，加水5mL，温水浴溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取葡萄糖酸钙对照品，同法制成每1mL中10mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醇–水–浓氨溶液–乙酸乙酯（50：30：10：10）为展开剂，展开，晾干，置110℃加热20min后，放冷，喷以钼酸铵–硫酸铈试液（取钼酸铵2.5g，加1mol/L硫酸溶液50mL使溶解，再加硫酸铈1.0g，加1mol/L硫酸溶解并稀释至100mL，摇匀），再在110℃加热10min后，取出放冷，10nin后检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相”。2、高效液相色谱法

一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验，要求供试品和对照品色谱峰的保留时间（tR）一致。含量测定方法为内标法时，要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰的保留时间与内标物的保留试剂比值应相同。2、高效液相色谱法高效液相色谱和气相色谱鉴别法操作比较复杂，耗时长，一般在检查或含量测定项下已采用色谱法的情况下，才采用这两种方法做鉴别。如紫杉醇鉴别项下要求“在含量测定项下的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致”。含量测定项下规定“取本品约12mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取紫杉醇对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得”。药物鉴别常用鉴别方法药物一般鉴别鉴别方法化学鉴别法光谱鉴别法色谱鉴别法显微鉴别法生物鉴别法药物一般鉴别050607药物化法鉴别方法显色反应鉴别法沉淀生成鉴别法荧光反应鉴别法气体生成反应鉴别法制备衍生物测定熔点法药物一般鉴别050607药物光谱鉴别方法紫外光谱鉴别法红外光谱鉴别法近红色外光谱鉴别法原子吸收鉴别法核磁共振法药物一般鉴别050607药物色谱鉴别方法薄层色谱鉴别法高效液相色谱鉴别法气相色谱鉴别法纸色谱法药物的鉴别红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法特点：红外光谱是一种特征性强、专属性高、应用较广的鉴别方法。适用性：固体、液体、气体样品。特别适合于用结构复杂、结构间差别小的同类药物的鉴别与区分。

应用：主要用于组分单一、结构明确的原料药；药物制剂经提取后也可以采用红外光谱法加以鉴别；也常用于晶型鉴别。方法：在用红外光谱进行鉴别试验时，中国药典采用标准图谱对照法，美国药典采用对照品法。红外线光谱鉴别法原理：由于物质吸收红外辐射，药物的分子振动能级（同时伴随转动能级）跃迁而产生的红外光谱。每一种化合物都有自己的特征红外光谱，所以把红外光谱分析形象的称为物质分子的“指纹”分析。红外线光谱鉴别法红外线光谱鉴别法

原料药鉴别除另有规定外，按照《药品红外光谱集》规定方法制备样品。固体制样技术中的多晶现象。应按该药品光谱图中备注的方法或各品种正文中规定的方法进行预处理，再绘制光谱进行比对。如未规定该品供试药用的晶型或预处理方法，则可使用对照品，采用适当的溶剂对供试品与对照品在相同条件下进行重结晶，再进行光谱对比。如已规定特定的药用晶型，则应采用相应晶型的对照品对比。当固体制样技术不能满足鉴别需要时，可改用溶液法测定光谱。红外线光谱鉴别法

制剂的鉴别与原料药相比，制剂鉴别一般需采取提取分离、经适当干燥后再压片绘制图谱。提取时应选择适宜的溶剂，减少辅料的干扰，避免晶型转变制剂中辅料和晶型的问题。辅料无干扰，待测物晶型无变化，可与原料药标准光谱比对。辅料无干扰，但待测成分晶型有变化，可用对照品同法处理后光谱对比。

待测物晶型无变化，而辅料有干扰，可参照原料药标准光谱，在指纹区选择3~5个不受辅料干扰的待测。实测谱带波数误差应小于0.5%。待测物晶型有变化，辅料也有干扰，不宜采用红外鉴别。紫外光谱鉴别法直接用有机溶剂提取主成分，去除辅料干扰后做红外图谱与对照图谱比较。对于有机酸的碱盐或有机碱的酸盐，可加酸液或碱液来使有机酸或碱游离沉淀，直接取沉淀干燥，或采用有机溶剂提取有机酸或碱并干燥后做红外图谱与相应的有机酸碱的对照图谱比较。对于主成分为有机酸的药物，可先加碱使主成分溶解，再加过量的酸使主成分游离并产点，干燥后做红外图谱与对照图谱比较。常用方法对未加辅料或辅料干扰小的制剂，可直接取样品做红外图谱比较。红外线光谱鉴别法直接用有机溶剂提取主成分示例布洛芬片（丙酮提取）环磷酰胺片（乙醚提取）氯氮平片（三氯甲烷提取）盐酸四环素片（热乙醇提取）螺内酯片（三氯甲烷提取）红外线光谱鉴别法有机酸的碱盐或有机碱的酸盐，加酸液或碱液游离沉淀示例磷酸氯喹片的IR鉴别采用先加水溶解，加碱（氢氧化钠试液）使氯喹游离，用乙醚提取干燥并制作红外图谱与氯喹的对照图谱比较。红外线光谱鉴别法有机酸可先加碱使主成分游离，再加过量酸使主成分游离沉淀再做红外图谱比较。示例吉非贝奇胶囊的鉴别采用先加碱使吉非贝齐溶解，滤过，滤液加酸酸化，主成分沉淀，干燥后做红外图谱与对照图谱比较。红外线光谱鉴别法直接取样品做红外图谱比较示例氨甲环酸胶囊的鉴别直接取内容做红外光谱图。红外线光谱鉴别法注意事项

压片法对红外光谱的影响。供试片的制备条件可能影响图谱形状及各谱带强度。采用溴化钾作为压片基质需注意样品盐酸呀是否与溴化钾发生离子交换反应，否则，盐酸盐样品制片时必须采用氯化钾基质。供试品制备时研磨程度的差异或吸水程度等原因，均会影响光谱的形状，如二氧化碳和水汽等大气干扰，必要时，应采取干燥氮气吹扫等措施改善。应校正不同仪器间分辨率及不同操作条件的差异，如狭缝程序、扫描速度等，可采用聚苯乙烯薄膜的光谱图比对。红外线光谱鉴别法红外光谱法不适用于存在多晶现象又无可重复转晶的药物。对组成相对稳定的多组分原料药鉴别时，不能采用全光谱比对，可选择主要成分的若干个特征谱进行比对。对照图谱为《药品红外光谱集》第一卷（1995版）、第二卷（2000版）、第三卷（2005版）、第四卷（2010版），若同一化合物在不同卷上均有收载时，应以后卷收载为准。紫外光谱鉴别法药物的鉴别

紫外光谱鉴别法药物的分子结构中含有共轭体系、芳香环、杂环等发色团，可在紫外光区产生特征的吸收光谱，可将吸收光谱的形状、吸收峰的数目、最大吸收波长（吸收峰）的位置、最小吸收波长（吸收谷的位置）、吸收强度、及吸收系数等作为鉴别依据。原理：紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法特点：

紫外吸收光谱鉴别的专属性不强，宜采用不同的方法增加方法的专属性；紫外光谱鉴别法规定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收值规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收度比值法常用方法经化学处理后，测定反应产物的吸收光谱紫外光谱鉴别法例如：可采用在指定溶

剂中测定2~3

个特定波长处

的吸收度比值；增加方法的专属

性；紫外光谱鉴别法氟胞嘧啶紫外光谱鉴别本品8µ/ml的盐酸溶液(9→100≈0.1mol/L)，最大吸收波长286nm，吸光度约为0.57最小吸收波长244nm紫外光谱鉴别法方法：规定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长

示例一布洛芬的鉴别取本品→→加00..44%%NaOH溶液→→制成00..25mg//ml的溶液液→照紫外--可见吸收光谱法测定结果：在265nm与273nm的波长处有最大吸收，在245nm与271nm的波长处有最小吸收，在256nm的波长处有一肩峰紫外光谱鉴别法布洛芬的紫外光谱：紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法：示例二氯贝丁酯的鉴别取本品→加无水乙醇→制成0.10mg/ml的溶液1，和10µg/ml的溶液2→照紫外--可见分光光度法结果：溶液22在226nm的波长处有最大吸收，溶液11在280nm与288nm的波长处有最大吸收讨论氯贝丁酯在紫外光区有数个吸收峰，但由于不同吸收峰处的吸收系数差距大，采用单一浓度不易观察到全部吸收峰，可采用两种浓度的供试液分别检测其最大吸收波长紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法：方法：规定一定浓度的供试品溶液在最大吸收波长处的吸收度值示例头孢噻吩钠的鉴别取本品→→加水制成20μμgg//ml的溶液结果：在237nm的波长处测定其吸光度为0.65~0.72紫外光谱鉴别法方法：规定吸收波长和吸收系数法示例贝诺酯的鉴别取含量测定项下溶液，照紫外--可见分光光度法测定，在240nm的波长处有最大吸收，在240nm的波长处测定吸收度，按干燥品计算，吸收系数为730~760。紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法方法：规定吸收波长和吸收度比值法示例地蒽酚的鉴别取含量测定项下溶液，于240~400nm波长范围内测定吸光度，在257nm、289nm与356nm的波长处有最大吸收。在257nm与289nm处的吸光度比值应为1.06~1.10；在356nm与289nm处的吸光度比值应为0.90~0.94。讨论该法不仅规定了测定波长范围，同时规定了两个波长处的吸光度比值，进一步增强了方法的专属性。紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法方法：经化学处理后，测定反应产物的吸收光谱示例苯妥英钠的鉴别取本品约g10mg→加高锰酸钾10mg，氢氧化钠0.25g与水10ml→小火加热n5min→放冷→取上清液5ml→加正庚烷20ml，振摇提取，静置分层→取正庚烷提取液→照紫外--可见分光光度法测定结果：在248nm的波长处有最大吸收。讨论