血液病分子病理诊断XXXX06

血液病分子病理诊断临床应用北京海思特临床检验所

分子病理室2013.061多层次检测平台综合应用细胞遗传学形态学分子生物学流式细胞学

染色体核型分析

荧光原位杂交RT-PCR测序

多重荧光巢式PCR定量PCR直接测序GeneScan2血液病诊断分型

定量监测MRD

白血病预后靶向治疗

耐药及疾病进展监测

范可尼贫血嗜血细胞综合症等血液病分子病理检测融合基因检测基因突变检测血液遗传病检测大多数情况下，某一患者只有一种融合基因阳性3个案t(15;17)witht(9;22)46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21)BMmorphology:APLFCM:M3QPCR:PML/RARA+BCR/ABL(190)+4多重巢式RT-PCR

筛查

定性检测用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。

荧光定量RT-PCR定量检测

内参基因c-abl结果以比值表示，全程动态监测融合基因的拷贝数/内参基因c-ablPCR-测序血液病分子病理检测5筛查每月定量监测3-6月定量监测每月定量监测6CMPD-慢性骨髓增殖性疾病

*WilliamV,StefanN.AuniqueactivatingmutationinJAK2(V617F)isattheoriginofpolycythemiaveraandallowsanewclassificationofmyeloproliferativediseases.Hematology.2005,10-13:195-200

7CML—BCR/ABL约95%的CML5%的儿童ALL15%-30%的成人ALL8CMPD-慢性骨髓增殖性疾病MolecularPathology：themolecularbasisofhumandiseasebyWillamB.Coleman,GregoryJ.Tsongalis9激活JAK2基因使细胞对生长因子敏感性增高

PV、ET、CIMF

不是独立的诊断指标MDS、3%CMMLJAK2V617F缬氨酸苯丙氨酸10MDS-骨髓增生异常综合症分子方面的理论有限，但发现有5q31,7q31，20q12的反复缺失，提示可能这些区域存在肿瘤抑制基因。11白血病-31种融合基因筛查1255%L型5%

V型体外对ATRA的敏感度低40%

S型低分化M3其他融合基因M3:PML-RARAt(5;17)(q32;q21)t(11;17)(q13;q21)t(11;17)(q23;q21)t(15;17)(q22;q21)PML-RARaPLZF-RARaNPM-RARaNuMA-RARa95%<5%dup(17)(q21.3;q23)STAT5b-RARa13AML1/ETO80-90%M2少数M1/M4/M5CBFβ-MYH11M4Eo化疗敏感预后较好14TEL/AML1

前B细胞ALLE2A/PBX15-6%的儿童ALL3%的成人ALL大部分前B细胞ALL15同一患者可能同时存在多种基因突变可与融合基因或其它基因突变同时存在；预后判断；个体化用药基因突变在疾病发展过程中可能会变化AML患者常见基因突变及其预后意义基因位置发生率预后C-KIT4q1220-30%差NPM15q3525-35%好FLT3-ITD13q1220-30%差CEBPA19q13.112.80%好1617AML其他突变18淋巴瘤分子检测IG重排

Ig受体基因重排MRDTCR重排T细胞受体基因重排BCL-1/JHt(11;14)(q13;q32)套细胞淋巴瘤（MCL）少数B细胞增殖性疾病如多发性骨髓瘤BCL-2/JHt(14;18)70-80%的滤泡性淋巴瘤(FL)，大部分为t(14;18)，30%DLBCL19IG和TCR基因重排不一定是谱系的标志

某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉淋巴瘤-TCR，IG重排20多发性骨髓瘤（MM）探针名称位点异常率意义中位生存期（月）P53缺失17p1310-34%预后差24.7IGH重排(4;14)(14;16)50-70%预后差1q21扩增1q2135-45%预后差21.9RB1缺失13q1450%预后中等42.3D13S319缺失13q1445%预后中等IGH重排(11;14)50-70%预后尚可50.521各细胞遗传学亚组MM患者生存期(n=351)24.742.350.5FonsecaR.Blood2003;101:4569-4575.

22各细胞遗传学亚组MM患者生存期（n=159）FonsecaR.Leukemia2006;20,2034-2040.23慢性淋巴细胞白血病CLL探针名称位点及读取异常率意义中位生存期(月)p5317p13缺失7-8%预后很差32ATM11q22.3缺失11-18%预后差7912cen12p11.1-q11三体16-25%预后中等114RB113q14缺失36-64%预后好133D13S2513q14缺失36-64%预后好13324各细胞遗传学亚组CLL患者生存期（n=325）3279114111133DöhnerH,EnglJMed.2000;43:1910-1916.

25酪氨酸激酶抑制剂TKIBCR/ABL融合基因FIP1L1/PDGFRa融合基因基因检测个体化用药26基因检测个体化用药2012NCCN27ABL激酶突变检测ABL激酶区突变c.763G>A(p.E255K)和c.944C>T(p.T315I)。28WT1表达量检测*约75%AML患者可检测到WT1高水平表达，WT1是AML患者常用的MRD检测标志融合基因定量检测MRD监测*CurrentOpinioninOncology2010,22:656–66329WT1(Wilm’stumorgene)1.WT1基因在各类型白血病中均能表达(ALL，AML，CML，MDS).2.表达水平与白血病的进程相关，可作为化疗和骨髓移植后MRD检测敏感指标。3.鉴别白血病与反应性白细胞增高。30初诊B-ALL;MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)WT1(Wilm’stumorgene)弟供姐异基因造血干细胞移植+14d白细胞植活+27d血小板植活31嗜血细胞综合征相关基因突变PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAPLYST、AP3B1、RAB27A范可尼贫血基因突变FANCA60%、FANCC

15%、FANCG

10%

WASP综合征纯红再障RPS19先天性角化不良

DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF2血液遗传病分子检测32PRF110q21-10q22细胞杀伤功能缺陷

嗜血细胞综合征Perforin

33FANCA16q24.3FANCC9q22.3

范可尼贫血基因检测34RPS1919q13.2hotspotofmissensemutations-codons52and62常染色体1岁

女

Exon4发现点突变：c.184C>T(p.R62W)，其他外显子未发现突变纯红再障-RPS19基因检测35DKC1Xq28X-连锁隐性7岁男

DKC1基因Exon11发现错义突变：c.1058C>T(p.A353V)先天性角化不良36

PCRSecquence送检标本要求标本要求EDTA抗凝、快速送达实验室EDTA抗凝、DNAorcDNA灵敏度最高大于15-20%分辨率bpbp报告时间3-5天5-7天37Molecularplatform38

谢谢！39耐药位点