中药制剂分析 第二章 中药制剂分析供试品的制备

1第一节取样2第二节

样品的提取3第三节

样品的净化4第四节

浓缩与衍生化5第五节不同剂型中药制剂的供试品制备特点第二章中药制剂分析

供试品的制备第一节取样点击添加文本说明点击添加文本说明点击添加文本说明点击添加文本说明点击添加文本说明1一、抽样

（一）常用术语

批，批号，抽样单元，最小包装等点击添加本章标题（二）抽样步骤（1）拟定抽样计划，准备取样器皿和盛装器具等。（2）外包装的检查：取样前，应注意品名、产地、规格等级及包件式样是否一致；检查包装的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等情况；凡有异常情况的包件，拍照后单独取样检验，并做好详细记录。（3）确定抽样单元随机抽样法按照随机的原则，即保证总体中每个单位都有同等机会被抽中的原则。强调抽样的代表性和覆盖面。（4）用适宜的器具抽取单元样品，制作最终样品，分3份，分别装入盛样器具并签封。（5）将被拆分的抽样单元重新包封，并贴签标记。固体制剂：液体制剂：直接移取：用于均匀性好的液体样品。分层取样：用于混浊液和粘度大的溶液(如糖浆剂等)均匀性较差的液体样品。采样时，可用吸管从容器中分层取样，再将取出的样品混匀。当样品有沉淀时，要摇匀后再取样。抽取样品法：适用于药品包装为箱或袋四分法取样：适用于样品量不大的粉末状、

小块状以及小颗粒状样品的取样（三）取样方法（四）取样量各类中药制剂的取样量至少够3次检测的用量，贵重药可酌情取样，每个全检量至少3个最小包装。（1）粉状中药制剂（颗粒剂、散剂）一般取样100g。（2）液体中药制剂（口服液、酊剂、酒剂、糖浆剂）一般取样200mL，同时应注意容器底部是否有沉淀，如有彻底摇匀，均匀取样。（3）固体中成药（片剂、丸剂、胶囊剂等）一般取样100g。二、样品的粉碎1、粉碎的目的：2、粉碎设备：⑴保证样品均匀而有代表性，提高测定结果的精密度和准确度；⑵使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。粉碎机、铜冲、研钵等，生物组织样品可用高速匀浆机或玻璃匀浆器。注意：粒度大小合适防止污染或损失

过筛时应全部通过筛网三、样品前处理前的取样量要求：1．固体制剂：一般为测定样品所需量的10～20倍，颗粒剂和散剂可采用“四分法”直至最后剩余量能满足供检验用样品量；其他固体制剂按药典规定抽样。含量测定时，一般称取试样0.1g以上，可用感量0.1mg的天平；取样0.1g以下，则需用感量为0.01mg的天平。均匀性和代表性。根据分析目的合理取样。2．半流体制剂：不易混匀的，可取供试品适量，精密称定，精密加入一定量的硅藻土，研磨使成疏散的固体粉末，用“四分法”取样；或者取供试品适量，精密称定，加入适宜的溶剂稀释并定容至一定体积，按液体样品取样。3．液体制剂：取样时，底部沉淀，振摇均匀后取样；一般用移液管或刻度吸管精密移取即可。供试样品检测完毕后，应保留一半数量作为留样观察，合格者保留一年，并对该中药样品的质量情况作定期检查。如有发霉变质或质量变化时，则随机抽样，以便及时检测，分析原因，改善工艺和稳定产品质量。第二节样品的提取一、提取方法固体样品常用的提取方法：液体和固体样品：均可使用的水蒸气蒸馏法。浸渍法、回流提取法、连续回流提取法、超声提取法等；

（一）浸渍法冷浸（10℃~30℃）温浸（30℃~60℃）热浸（70℃~80℃）例：《中国药典》2015年版一部收载的品种一清颗粒中黄连的鉴别

取本品4g，加甲醇25mL，浸溃2小时并时时振摇，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液。浸泡时间：根据样品质地及检验要求确定。优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少。缺点：费时、费溶剂、提取不充分，较少用于含量测定。（二）回流提取法

例：《中国药典》2015年版一部收载的品种乙肝养阴活血颗粒中齐墩果酸的鉴别。

取本品30g或15g(无蔗糖），研细，加三氯甲烷40ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。优点：提取效率高，提取时间短缺点：提取杂质较多对热不稳定或有挥发性组分则不宜采用回流提取法。（三）连续回流提取法

例：《中国药典》2015年版一部收载的品种大山楂丸中熊果酸中熊果酸含量测定。优点：提取效率高，所需溶剂少提取杂质少，操作简便缺点：受热易分解的成分不宜使用对热不稳定或有挥发性组分则不宜采用回流提取法。（四）水蒸气蒸馏法例：2015年版《中国药典》一部收载的品种正骨水中挥发油的含量测定采用了该方法

精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加饱和氯化钠溶液100ml，振摇1〜2分钟，放置1〜2小时，分取上层液，移入圆底烧瓶中，用热水洗涤分液漏斗数次，洗液并入圆底烧瓶中，照挥发油测定法（2015年版《中国药典》四部通则2204甲法）测定，读取挥发油量，计算样品中挥发油的含量(％)。（五）超声提取法2015年版《中国药典》一部收载的品种二丁颗粒中秦皮乙素和咖啡酸的鉴别。

取本品15g或3g(无蔗糖），研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干,残渣加热水20ml使溶解，放冷，用乙酸乙繭振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙醆提取液，蒸干，残渣加甲諄lml使溶解，作为供试品溶液。（六）超临界流体萃取法最常使用的超临界流体：超临界CO2和趟临界N2O。通过加入极性改性剂如甲醇、乙醇、丙酮等增加极性化合物的溶解能力，这使得CO2能萃取从低级性的亲脂性化合物至极性化合物，从而使SFE的应用范围更加广泛。（七）消化法金属离子常常被有机物络合，在重金属、砷盐或其他有害元素检查时，需进行有机破坏方可转为可测的无机金属离子状态。1湿法消化（1）硝酸-高氯酸（2）硝酸-硫酸法（3）硫酸-硫酸盐法2干法消化有机物炽灼炭化直至灰化，以达到分解有机物的目的（八）微波辅助萃取法①萃取时间短；②溶剂用量少；③可根据吸收微波能力的大小选择不同的萃取溶剂，

控制样品与溶剂间的热交换；④可实现多个样品的同时萃取。特点：二、分析目的与样品提取（一）供鉴别用样品的提取中药鉴别主要是鉴定中药材和饮片的真伪或者判别中药制剂中是否含有处方中所列药味，可采用显微、化学反应、色谱和光谱等手段进行定性分析。显微鉴别无需制备供试溶液；其他的理化鉴别则均需要制备供试溶液。鉴别用供试品溶液的制备不强调量的准确性。鉴别用供试溶液的制备方法力求简便、易操作。（二）供杂质检查用样品的提取中药制剂中杂质：重金属、砷盐等无机杂质；农药残留、马兜铃酸、乌头碱、土大黄苷等有机杂质。无机杂质检查：消化法处理样品，以干法或湿法消解。有机杂质检查：可根据检查的要求，来选择样品的提取方法，如果涉及定量，则按含量测定的方法提取，如农药残留量的测定等；如果仅是限量检查，则按鉴别的方法提取，如附子理中丸中乌头碱的检查、三黄片中土大黄苷的检查等。（三）供含量测定用样品的提取含量测定时，样品的提取特别强调待测成分要提取完全，另外，含量测定的样品提取过程中还应注意准确度。样品的称量需要精密称定，如果是用部分测定法，可以利用移液管精密加入一定量提取溶剂，通过提取前后的称重补重来确定最终提取溶液的体积，如果用全部测定法，则提取完后，洗涤滤纸和滤渣，洗液并入滤液，最终定容到相应的体积，容量瓶的容积即为最终提取液的体积。样品是否需要分离纯化，纯化到什么程度，与测定方法的专属性、分离能力、检测系统对杂质的耐受程度密切相关。

常用的净化方法：液一液萃取法，色谱法，沉淀法，盐析法等。净化方法的选择：既要依据被测定成分和杂质的理化性质、存在形式、浓度范围的差异，又要结合分析的目的。第三节样品的净化沉淀法是基于某些试剂与被测成分或杂质能够生成沉淀，或者某些溶剂的加入会大大降低被测成分或杂质在原溶液中的溶解度，分离沉淀或保留溶液以达到精制的目的。

注意：一、沉淀法①过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设法除去。

②大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分不因沉淀而损失。③被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新溶解或直接用重量法测定。如西瓜霜润喉片中西瓜霜的含量测定。常用的液-液萃取方法分为有机溶剂直接萃取法和离子对萃取法。二、液-液萃取法

1.直接萃取法主要用于液体样品中被测组分的提取，多用有机溶剂将被测组分从水溶液中提取出来。萃取溶剂的选择原则：相似相溶极性较强的组分：如皂苷类成分用正丁醇萃取；中等级性的组分：如黄酮类成分可用醋酸乙酯萃取；易形成氢键的组分：如生物碱成分可用氯仿萃取；非极性组分：如挥发油可用乙醚、石油醚等萃取。弱酸性、弱碱性组分：调整溶液的pH值后用有机溶剂萃取。2.离子对萃取法强酸、强碱性组分：用离子对萃取。萃取工具：分液漏斗萃取次数：如用于含量测定，需要萃取

多次，次数提取回收率决定。注意：萃取过程中应注意防止

消除乳化现象。酒剂、酊剂等含醇量比较高的液体制剂，

在萃取前需要先挥去乙醇。经典柱色谱法常用填料有：氧化铝、硅胶、大孔树脂、聚酰胺、硅藻土、活性炭、离子交换树脂以及键合相硅胶C8、C18等，目前市场上也有商品化的色谱小柱。三、色谱法四、固相萃取法固相萃取小柱：柱管、筛板和固定相三部分组成操作①柱的活化；

②上样；

③淋洗，④洗脱。操作分两步：首先是萃取，将针头插入试样容器中，推出石英纤维，利用其表面的色谱固定相对分析组分的吸附作用，将组分从试样基质中提取出来，并逐渐富集，完成试样前处理过程；然后是色谱进样，将针头插入色谱进样器，推出针头中的石英纤维，利用气相色谱进样器的高温或者液相色谱、毛细管电泳的流动相将吸附的组分从固定相中解吸下来，完成色谱进样操作，再由色谱仪进行分离分析。提取方式：①石英纤维直接插入试样中进行提取，适用于气体与液体中组分的分析；②顶空提取，适用于所有基质的试样中挥发性、半挥发性组分的分析。主要用于分析挥发性、半挥发性物质。五、固相微萃取技术一、样品提取液的浓缩常见的浓缩方式：第四节

浓缩与衍生化1．水浴蒸发2．自然挥散3．减压蒸发4．气流吹蒸法5．冷冻干燥

一、样品的衍生化主要目的：第四节

浓缩与衍生化①提高检测的灵敏度；②改善色谱分离效果。①对反应要求不苛刻，且能迅速定量地进行；②对某个样品只能生成一种衍生物；③反应副产物以及过量的衍生化试剂不干扰待测组分的分离和检测；④化学衍生化试剂方便易得、通用性好。衍生化反应要求：根据衍生化反应与色谱分离的时间先后：柱前衍生法柱后衍生法①脂肪酸的甲酯化；②脂肪酸甲酯化衍生物的进样和分离；③脂肪酸甲酯化衍生物的定性和定量。脂肪酸分析方法包括以下步骤：脂肪酸甲酯化常用方法：①脂肪酸皂化酯化反应；②脂肪酸酯交换反应；③3脂肪酸的其它衍生物。如：硅烷化中药制剂（如糖浆剂、煎膏剂、口服液等）中含有防腐剂、抗氧剂、矫味剂等，这些添加剂有时对被测成分的分析干扰较大。一、固体中药制剂的前处理特点蜜丸的处理方法：第五节

各类中药制剂的前处理特点①直接加有机溶剂进行提取，或水溶解蜜

丸，离心后取药渣进行提取。②加入一定量硅藻土研磨直至均匀分散，

再用溶剂提取。滴丸、栓剂常用基质：水溶性；非水溶性①将栓剂或滴丸与硅藻土等惰性材料混合、研匀，根据被分析成分的性质和基质的类型，用适宜的溶剂提取。根据分析的成分为脂溶性，而基质为亲水性基质，一般用有机溶剂提取；若被分析的成分极性大，而基质为油脂性基质，一般用水或稀醇提取。②对于油脂性基质还可将栓剂切成小块，加适量水，于温水浴上加热使其融化，