实验五 植物染色体标本的制备和观察

实验五植物染色体标本的

制备和观察一实验目的掌握常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法。二实验原理常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。但压片法的不足之处是染色体很难分散开，染色体容易变形和断裂。去壁低渗法是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶质和组成细胞壁的α-纤维素、半纤维素溶解掉，使植物细胞只有质膜，然后按哺乳类动物染色体标本制备的方法——低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。三实验仪器、材料和试剂1仪器、用具：培养箱、显微镜等2材料：蚕豆种子3试剂：⑴秋水仙素⑵磷酸缓冲液⑶甲醇、冰醋酸⑷改良苯酚品红染色液⑸混合酶液三实验仪器、材料和试剂3试剂：⑹70%、85%、95%乙醇

⑺

1mol/LHCL

四实验方法（压片法制备染色体标本）

1

取材把蚕豆种子预先浸泡6小时，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃温箱中发芽，幼根长至1～2cm左右，于上午13～14时剪下根尖0.5cm。2

预处理将剪下的根尖置0.02%秋水仙素溶液中，浸泡处理4小时。3

固定用水洗净处理过的根尖，经甲醇-冰醋酸（3∶1）固定6～24小时，再经95%、85%酒精各半小时，最后转入70%酒精中，4℃保存备用。四实验方法（压片法制备染色体标本）4

解离取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1NHCl中60℃解离8～10min，再用蒸馏水洗净。5染色改良苯酚品红染色液染色5～10min。6

压片把根尖放在载玻片上，切取分生区部分，加一滴染液，用镊子捣碎，盖上盖玻片，然后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。7

镜检。第一次压片。取解离后的根尖用清水冲洗10s后，置于载玻片中间，用刀片切去根冠及伸长区部分，只留1-2mm分生区，另取载玻片与其交叉成“十”字型扣压，将材料压成薄层，而后小心分开两载玻片。如此，两载玻片中间区域皆附有一薄层材料。染色。用石炭酸品红染色液，染色3min。第二次压片。盖上盖玻片再履吸水纸，用拇指轻压，亦可用铅笔的橡皮头在盖玻片上轻敲数下，使根尖细胞扩散呈云雾状。两载玻片十字交叉平扣1

能使细胞均匀铺开，克服采用盖玻片时加压用力不均匀的缺点；2

细胞均匀铺开后染色，不仅缩短染色时间，而且可以克服对整个根尖染色，导致根尖内外层细胞染色不均匀；3

一个根尖材料可同时制取两个根尖细胞有丝分裂染色体标本装片。采用两次压片取代教材中介绍的一次压片，提高制片成功率，由于第二次压片只要盖好盖玻片，轻点压平即可，无须太过用力，避免过重挤压而压裂盖玻片，导致实验失败或影响观察效果。两载玻片十字平扣交叉压片好处多四实验方法（去壁法制备染色体标本）1．取材将蚕豆种子放在25℃温箱中发芽，待根长到1～2cm时使用。2．前处理根尖用0.1%秋水仙素溶液处理3～4小时。3．固定用水洗净处理过的根尖，经甲醇/冰醋酸（3∶1）固定2-24小时，换入70%酒精保存。四实验方法（去壁法制备染色体标本）4．水解取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1NHCl中60℃解离14～15min，再用蒸馏水洗净5染色改良苯酚品红染色液染色5-10min。6漂洗漂洗液换洗2-3次，每次1-2min。

7酶解

切取着色深的分生区放到小杯中，加入混合酶液（2.5%纤维素酶+2.5%果胶酶），25℃下酶解2～4小时。解离是除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，材料制片后细胞分散便于观察.笔者长期实验教学实践表明，采用95%乙醇和浓盐酸等量混合的解离液解离细胞，在58-60℃1mol/L热盐酸中水解细胞14-15min，染色后，滴1-2滴混合酶室温下酶解细胞40min左右或在28℃温箱中酶解20min左右的效果好.实践表明，95%乙醇和浓盐酸等量混合液进行解离操作，可简化实验步骤，且大大缩短实验时间。四实验方法（去壁低渗法制备染色体标本）8．洗涤倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后加入45%醋酸。9压片吸取材料，置于载玻片，盖上盖玻片，然后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。10镜检

预处理：切取长约5mm的植物根尖，浸入0.1%秋水仙素中，室温下处理4小时将根尖放入1mol/L的盐酸中，60℃水浴，恒温条件下解离8~10min。解离后倒出HCl，水洗2次，每次3~5min。将材料直接浸入改良苯酚品红中，盖上盖玻片。用镊子或铅笔轻轻敲打，使根尖细胞分散开。五作业绘出植物中期细胞染色体图。在制片的过程中有哪些需要注意的问题？为什么在压片前需要先经过酸水解？比较常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的效果。六注意事项