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文档简介

CRISPR/Cas9

——ANewWayforGenomeEditingGenomeEditingCRISPR研究历史1987年,日本课题组在K12大肠杆菌的碱性磷酸酶基因附近发现串联间隔重复序列随后的研究发现这种间隔重复序列广泛存在于细菌和古细菌的基因组中正式命名为clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats(CRISPR)CRISPR的间隔序列(spacer)与宿主菌的染色体外的遗传物质高度同源CRISPR基因座结构CRISPR间隔序列的获得Cas1和Cas2Csn2作用未经证实免疫作用的实现人工CRISPR/Cas9系统tracrRNA修复引起突变非同源末端重接(non-homologousend-joining,NHEJ),直接在断裂处随机修复,多发生在双链断裂时。同源重组修复(homologousrecombinationalrepair,HR),以同源DNA为模板进行修复,单双链断裂时发生概率相近。利用HR,可以引入DNA模板,实现定向突变。应用基因治疗例如用iPS细胞治疗人类的镰刀型贫血症,将病人的皮肤细胞诱导成iPS细胞利用CRISPR/Cas9突变型的切口酶来介导同源重组修复突变的血红蛋白基因再将修复的iPS细胞定向诱导分化为造血干细胞移植到病人体内.应用HIV病毒清除工具Hsin-KaiLiao,YingGu,ArturoDiazetal.UseoftheCRISPR/Cas9systemasanintracellulardefenseagainstHIV-1infectioninhumancells.NatureCommunications,2015,6:6413衰老模型I.Harel,B.A.Benayoun,B.Machadoetal.Aplatformforrapidexplorationofaginganddiseasesinanaturallyshort-livedvertebrate.Cell,2015,160(5):1013-1026专利2013年初,MIT的Zhang研究组首次报道利用CRISPR/Cas9系统对人293T细胞的EMX1和PVALB基因以及小鼠Nero2A细胞的Th基因

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