20231011-锐讯生物数字PCR系统介绍 v2

锐讯生物数字PCR系统苏州锐讯生物科技有限公司Innovation,IntellectualCreation,ExcellenceinLifeRainsure核心产品奖项专利产品进展公司概况

成立于2017年1月

注册地：苏州工业园区及美国硅谷

San

Jose

现有员工100人

数字PCR仪器：完整系统自主开发、全自动升级

血液感染诊断试剂盒：细菌/真菌/耐药

自主知识产权仪器，已获批国内NMPA医疗器械注册证及CE-IVD，FDA

EUA

国家高新技术企业

近30项自主知识产权

苏州工业园区领军企业、苏州工业园区上市苗圃企业锐讯生物介绍锐讯生物数字PCR产品系列从dPCR到临床整体解决方案T仪器制造诊断试剂微流控芯片临床服务3公司荣誉4

国家级高新技术企业国家级科技型中小企业江苏省民营科技企业苏州园区领军人才企业姑苏科技创业天使计划苏州园区上市苗圃企业2019年最值得关注女性创业者证券时报年度新锐企业美国专利同时也申请了PCT专利5inUSA25inCHINA目录1.锐讯数字PCR系统介绍2.锐讯数字PCR系统平台优势3.锐讯数字PCR相关应用锐讯数字PCR系统介绍1数字PCR即DigitalPCR，实现对起始样品核酸的绝对定量。通过将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中，在每个微反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子，实现单分子模板PCR扩增通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。Source：/newsf/2014-6/20146394200425.htm数字PCR概念锐讯数字PCR系统技术流程8技术流程锐讯数字PCR的数学原理浓度计算公式C=-ln(Nneg/N)/Vdroplet(copies/μl)9Nneg：阴性微滴的数量；N：总微滴的数量；Vdroplet：微滴的平均体积（μl）；P：阴性微滴的比例Nneg/N；C:反应体系中靶标DNA的拷贝数浓度（copies/μl）;锐讯数字PCR系统微滴芯片拍照10锐讯数字PCR系统计算原理泊松分布校正11C=-ln(Nneg/N)/V(copies/μl)样本制备样本扩增读取&分析1999年Vogelstein等首次建立了dPCR基本实验流程和重要原则：以终点信号的有无作为判断依据，正式提出了dPCR的概念。有限稀释PCR泊松分布12技术阶段技术分类靶标灵敏度特异性技术特点及应用一代普通PCR+凝胶电泳SNP单核苷酸多态，单位点灵敏度低特异性差核酸快速检测二代实时荧光定量PCR病原微生物核酸、肿瘤基因突变等灵敏度较高特异性较高较高精度，可相对定量三代数字PCR绝对定量、稀有等位基因检测等灵敏度高特异性高高精密度、抗干扰能力强、高灵敏度、绝对定量数字PCR应用优势比较锐讯数字PCR系统平台优势2获批计量院校准证书2021年7月锐讯数字PCR系统获得中国计量院校准证书锐讯数字PCR和PreciGenome微流控/LNP文献引用已超过102篇，产品被全球客户引用次数超过1000次唯一被GoogleScholar收录的中国数字PCR产品产品发表全球用户发表国际期刊，实力备受认可唯一获批NMPA/FDA/CE-IVD三大医疗认证的数字PCR中国医疗器械注册证FDA授权CE-IVD资质DropDx-2250数字PCR系统液滴发生与PCR扩增一体机生物芯片阅读仪低至单分子——数字化绝对定量技术C=-ln(Nneg/N)/V(copies/μl)样本制备样本扩增读取&分析无需标准曲线的绝对定量DNA/mRNA/miRNA/lncRNA提高对抑制物的耐受度克服抑制物对定量结果的干扰

更高的检测灵敏度提升高丰度野生型背景下的<0.1%突变检出率

更高的数据精密度与重复性能识别1.1倍的浓度变化，对靶标核酸含量的连续监测、横向比较17无需标准曲线的绝对定量目标分子的总数比液滴的总数小得多，所有的液滴都有0或1个目标分子目标分子数=阳性液滴数每个液滴的平均拷贝数较大，有些液滴会有两个或更多的目标分子。目标分子数>阳性液滴数适用于泊松分布适配荧光定量PCR试剂盒数字PCR样品发生的核心：稳定油滴的生成生成油与PCRmastermix的兼容性是关键！锐讯公司独创专利体系稳定剂使液滴生成油兼容不同厂商的mastermix一键操作，显著降低人工干扰样本制备样本转移液滴制备与扩增结果读取与分析加样·转移芯片仅需一步手工操作有效的液滴数量：取决于液滴生成及稳定度，可稳定实现20000可用液滴单个微滴的体积：取决于液滴生成精度及纠偏，图像识别，对每个液滴实现体积定量自动化程度：避免操作误差，无需样本转移操作，仅需芯片转移操作，避免操作误差数据质控及回溯：图像法更方便回溯与质控，支持图像回溯及样本一周内复测AI智能识别，修正入微——数字PCR精度修正数据回溯与扩增产物回收C=-ln(Nneg/N)/V(copies/μl)样本扩增读取&分析流式法数字PCR-样品不可保留DropDx-2044HT数字PCR芯片支持数据质控及回溯图像法更方便回溯与质控扩增产物可回收测序锐讯数字PCR市场推广6大优势1唯一获得FDA，CFDA，CE-IVD三大医疗认证的数字PCR系统2自动化程度高：一步法操作，显著降低人工操作，实现高灵敏，提升标准化与自动化3样品可回溯：反应结束后芯片可存放保存，用于后续复核4平台开放，兼容第三方试剂5配套检测项目丰富，可为客户定制开发各类服务6密封式芯片分区技术，无惧核酸污染锐讯数字PCR系统相关应用3锐讯检测项目项目1——感染性疾病病原微生物诊断项目2——白血病淋巴瘤诊断新项目项目3——液体活检/伴随诊断新项目项目4——多重疟原虫分型及定量检测项目5——新冠病毒高灵敏检测及新冠标准品赋值白血病淋巴瘤诊断新项目/02血液病诊断的MICM流程MMorphology（形态学-染色镜检）IImmuno-phenotyping（免疫分型-流式细胞术）CCytogenetic（细胞遗传学-原位杂交）MMoleculargenetic（分子生物学-PCR）常见白血病的分类按照异常细胞的成熟度和累及的细胞种类不同，分成四类急性淋巴细胞白血病（ALL）5岁以下儿童高发ALL根据细胞系列归属分为T-ALL和B-ALL常见的染色体易位包括BCR-ABL,t(4;11)和t(8;14)五年生存率约68%急性髓系白血病（AML）成年人高发，平均发病年龄67岁儿童白血病病例中AML占20%左右按照幼稚细胞发育阶段分为M0-M7等多种亚型FLT3,

c-Kit和RAS突变在AML中常见五年生存率约27%慢性淋巴细胞白血病（CLL）老年人高发，平均发病年龄71岁欧美国家最常见白血病B淋巴细胞最常见13号染色体缺失最常见五年生存率约83%慢性髓系白血病（CML）成年人高发，平均发病年龄64岁95%有BCR-ABL染色体易位可进展为急性白血病疾病发病机理非常清晰五年生存率约67%CML诊断与监测的“金标准”BCR/ABLt(9；22)(q34；q11)是CML的标志物，95%CML患者可检测出典型的t(9；22)(q34；q11)易位，约5%的CML患者通过核型分析难以检测到Ph染色体，但可检测出融合基因存在，仍被归为Ph+CML分类。占所有白血病患者比例

15%BCRABLMR5.0的临床检测需要使用BCR-ABLIS来反映BCR-ABL（P210）转录本水平以正确评价患者疗效BCR

ABL

MR

5.0

已经写入新的白血病诊疗指南：qPCR检测定性，不定量，仅能检出MR

4.0同等骨髓标本下，数字PCR可实现MR4.5-5.0监测。慢性髓性白血病中国诊断与治疗指南（2020年版）锐讯数字PCR平台实现BCR-ABL高灵敏监测高准确度与灵敏度SampleRatio(%)observed0.00100.00240.00320.00250.01000.01830.01600.01530.08000.08800.10000.11350.40000.43751.00001.12032.00002.326810.000011.158150.000051.7386L60.001%L50.01%L40.1%L31%L210%L130%临床标本实测-显著优于RT-PCR样本编号DDPCR-BCR-ABL拷贝数（copies/ul)DDPCR-ABL拷贝数（copies/ul)DDPCR-突变比例RT-PCR-BCR-ABL拷贝数RT-PCR-ABL拷贝数RTPCR-突变比例液滴数M20-2920810.161707200.00595%0302000069238M20-2882103740000.00000%0794000066702M21-231502119200.00000%0404000067523M21-231604655200.00000%0686000072562M20-288221.843976000.00046%0526000072549M21-297804202400.00000%0753000072817M202010697353605051207.00032%21200092300022.96569495M20201124649352071408069.11270%1360000757000179%72496M20210060402944800.00000%0995000072593M21-025268324291201.59210%P19070652M20-2920901937600.00000%05760000764600M2021-004701.843887200.00047%0250000074522M20202782901128000.00000%72234锐讯数字PCR用于其他血液相关基因检测32EML4-ALK(E13A20)更多融合基因数字PCR检测试剂盒RET-PTC1RET-PTC3BCR-ABLROS1NTRK1NTRK2NTRK3PAX8-PPARG序号基因COSM适应症1BCR-ABLp210COSF1755、COSF1757CML/ALL2SF3B1COSM110696伴环形铁粒幼细胞骨髓增生异常综合征(MDS-RS)3SF3B1COSM132937伴环形铁粒幼细胞骨髓增生异常综合征(MDS-RS)4SF3B1COSM84677伴环形铁粒幼细胞骨髓增生异常综合征(MDS-RS)5MPLCOSM18918ET及PMF6MPLCOSM19193ET及PMF7JAК2COSM24439PV、ET/PMF8JAК2COSM12600PV、ET/PMF9CALRCOSM1738055无JAK2或MPL突变的MPN患者10CALRCOSM1738056无JAK2或MPL突变的MPN患者11FLT3COSM784ALL12FLT3COSM788ALL13FLT3COSM783ALL14IDH1COSM28747AML、MDS15IDH1COSM28749AML、MDS16IDH1COSM28746AML、MDS17IDH2COSM41590AML、MDS18IDH2COSM33733AML、MDS19ABL1COSM12560CML20MYD88COSM85940LPL/WM（淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症）21KITCOSM1314与胃肠道间质瘤，肥大细胞病，急性髓性白血病有关22NPM1COSM17559AML23NPM1COSM17571AML24NPM1COSM17573AML锐讯数字PCR平台提高MyD88检出灵敏度

qPCR结果数字PCR结果（%）4046

0.09944047

阳性5.05854049

0.9434051

0.48314053

0.11674055

1.41414057

04058

1.30224059

0.03694061

04062

0.22114063

04064

04065

04067

04068

04069

04070

阳性5.97314071

阳性1.52064073

04074

阳性20.54514075

阳性4.59074076

04077

0.36624078

0.0414082

0.36214086

0.47394087

阳性15.19174089

04090

阳性2.99114092

0.02734093

0.024qPCR检测阳性为12个，检出率为18.18%，数字PCR检测阳性41个，检出率62.12%；数字PCR的阳性符合率与qPCR检测100%符合；qPCR在10%以上突变能够准确检出，10%以下突变则概率检出；数字PCR能做到不漏检，并且能对突变水平分级，在后续分级治疗有较大优势。白血病淋巴瘤诊断新项目BCR-ABLMR5.0ABL耐药突变B细胞淋巴瘤BCL2-IGH融合基因定量检测淋巴浆细胞淋巴瘤MYD88定量检测骨髓增生性疾病JAK2定量检测液体活检/伴随诊断数字PCR在伴随诊断中的应用/03液体活检–基于血液样品的检测??时间线血液分析„液体活检“组织检测

病情复发一般性个体化预测药物反应诊断药物失效筛查组织活检液体活检重复活检有风险且伦理流程复杂循环肿瘤细胞循环DNA循环RNA基于血液样品检测的技术挑战<1%>1%必须使用超高灵敏的方法进行检测ddPVRvs高灵敏qPCR锐讯产品在非小细胞肺癌中的应用38T790M、19del的高、中、低三个突变频率的标准品，运用锐讯设备和锐讯引物探针验证结果如下表，和测序结果对应一致且重复。位点NGS结果重复1重复2T790M0.96%0.8%0.9%1.9%1.3%1.4%7.7%8.4%8.6%19Del0.9%1.9%2.0%1.8%3.2%3.2%4.7%6.3%6.7%EGFRL858RcfDNA实测位点结果39AF0.12%AF0.94%AF1.92%EGFRT790McfDNA数据平台对比40锐讯数字PCR仪灵敏性较好，在低突变频率情况下（0.1%）检测表现优秀,重复性较好结直肠癌靶向用药新思路：液体活检与间歇性停药Siravegna等人，（2015）NatureMedicine21，795–801（2015）数字PCR液态活检–BELLE2临床研究信息概况研究编号=NCT01610284公司=诺华制药试验药物=Fulvestrant（雌激素受体拮抗剂）±Buparlisib（PI3K抑制剂）患者群体=荷尔蒙受体阳性/HER2阴性晚期乳腺癌

患有局部晚期或转移性乳腺癌的绝经妇女已接受或正在接受雌激素合成酶抑制剂治疗试验状态=第III阶段•425/29/2024

数据在SABCS2015中公布-JoséBeselga博士，MemorialSloanKettering癌症中心雌激素生长因子受体BurparlisibPan-PI3K抑制剂蛋白合成肿瘤生长和发展内分泌疗法耐药性乳腺癌检测模块（AKT1/PIK3CA/ESR1）•435/29/2024Baselga等人，SABS2015在ctDNAPIK3CA突变的患者中，Buparlisib结合Fulvestrant使用在临床上改善了病人的无进展生存率（PFS）ctDNAPIK3CA突变阳性安慰剂+FulvestrantctDNAPIK3CA突变阴性）安慰剂+Fulvestrant中位PFS，月份单侧名义P值安慰剂+Fulvestrant安慰剂+Fulvestrant无进展生存概率，%无进展生存概率，%时间（月）时间（月）CI，置信区间；ctDNA，循环肿瘤DNA；HR，

危险比；PFS，无进展生存率本讲演稿产权属作者/讲演者所有。如要复制和/或传播，请联系baselgai@征得许可。中位PFS，月份单侧名义P值只能使用血液检测核心结果：用存贮的组织分析PIK3CA突变状态时，对药物的反应上未发现显著的统计血差异。使用OncoBEAM™BCP分析产品对血样分析

PIK3CA突变状态时，联合应用Buparlisib后，PIK3CA突变患者总体表现出生存的显著改善（从3.5个月变为18.4个月）•445/29/2024安慰剂+Fulvestrant整个群体PI3K路径激活（归档组织）PI3K突变（ctDNA）PI3K非突变（ctDNA）总体反应率，%锐讯PIK3CA液态活检检测多重检测PanelSampleName锐讯数字PCR

ctDNA检测结果艾德qPCR试剂盒组织检测结果S01阴性阴性S02阴性阴性S03阴性阴性S04阴性阴性S05阴性阴性S06阴性阴性S07阴性阴性S08阴性阴性S09阴性阴性S10阴性阴性S11阴性阴性S12阴性阴性S13阴性阴性S14E545KE545KS15E545KE545KS16E545KE545KS17E542KE542KS18E545KE545KS19E545KE545KS20H1047R+E545KH1047R

Well1st

Well2nd

Well3rd

Well4th

FAME545KH1047RH1047YH1047LHEXH1047-WTC420-WTE542-WTE545/Q546-WTROXQ546RQ546EC420RE545ACY5E542KE545GE545D

中日友好医院实测临床数据，与组织检测高度符合实体瘤MRD检测实体瘤MRD检测起步较晚，但实体瘤MRD检测的临床价值并不亚于血液瘤。已有研究证明，MRD检测用于肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌等实体瘤的临床治疗方案评估、预后监测是可行的。2021年11月，《Nature》子刊《NatureCommunications》发表了一项ctDNA-MRD研究结果，结果显示非小细胞肺癌术后ctDNA-MRD分析不仅具有预测复发的预后性功能（较影像学发现复发中位提前了88天），还具有预测性功能，可预测辅助化疗的获益情况（阳性患者可获益于辅助治疗，阴性患者没有获益），表明ctDNA-MRD的检测可更好地预测疾病复发风险，并帮助指导辅助化疗决策。早前，GuardantHealth在一项针对结直肠癌患者的回顾性研究中，对手术切除后的患者立即采集了血液样本进行分析，发现48%患者存在癌症复发迹象，所有检测到残留病变的癌症患者均在18个月内复发，且无假阳性，这种检测手段结合差异化治疗手段，有望提高患者无进展生存期。2021年4月，《ClinicalCancerResearch》公开了GuardantReveal的研究数据：MRD产品灵敏度达到91%，特异性达100%。合作方向1、乳腺癌PIK3CA（共11个位点）伴随诊断，临床试验，试剂注册2、血流感染、疟原虫等感染诊断项目，临床试验，发表专利3、白血病、淋巴瘤、实体肿瘤等MRD检测，临床研究，发表文献数字PCR设备数字PCR检测试剂数字PCR技术支持人员山东省相关收费250700017白血病融合基因分型检测

150元/项定量加收150元250403065 各类病原体DNA测定 80元/项

每类病原体测定计费一次助力华山医院快速精准鉴别诊断某患者，男性，大连人，长期在非洲务工，2021年11月5日从非洲返沪。11月20日，完成14天集中隔离后，准备回家居家隔离，路上突感胸闷、乏力后晕倒入院。经过询问流行病学史、全面评估生命体征、采集相关病史。新冠核酸、抗体、血常规CRP、肝肾功能、胸部CT、心电图等相关检查报告陆续跟进，报告显示“白细胞异常增多、血小板低下、肝功能严重损伤、急性肾功能衰竭”，病情危重需要立即施救。送入隔离病房后，追加疟原虫抗原检测提示：患者感染恶性疟原虫，但不排除其他型疟原虫的混合感染。数字PCR检测，准确地找到两种疟原虫——恶性疟、卵形疟。最后确诊为疟疾，且为恶性疟原虫及卵形疟混合感染的重型疟疾。随后特效药成功应用到患者身上，48小时后患者血液里已找不到疟原虫了。精准判断病情，高效确定的治疗，及时遏制住了病情恶化。新冠病毒定性、定量赋值/05RT-PCR,Fast,Highflux,AccurateThe2thgenerationPCRtechnology≥10virusmoleculescanbedetectedDigitalPCR,

MostAccurateThe3thgenerationPCRtechnology≥1virusmoleculecanbedetected1000+Clinicalsampletested2-3copies/mlDetectionlimit500+Clinicalsampletested150copies/mlDetectionlimit50新冠灵敏度的显著提升：新冠病毒检测的“金标准”

锐讯数字PCR在新冠检测中的应用51新型冠状病毒核酸检测目前面临漏检，假阴性的问题目前PCR核酸检测方法最大的两个问题：感染窗口期问题，携带者不发病的话，病毒载量太低，现有实时荧光定量PCR试剂盒普遍检测下限是500-1000拷贝，灵敏度不够，检不到，这个问题数字PCR可以胜任。出院标准，病愈患者低病毒携带难以有效检出。

分子诊断技术qPCR等温扩增数字PCRmNGS定性/定量相对定量定性绝对定量定性灵敏度（阳性率）一般高