高效液相色谱法测定碳酸氢钠注射液中依地酸二钠的限量

摘

要：为控制碳酸氢钠注射液中依地酸二钠的限量，采用高效液相色谱法对依地酸二钠的含量进行检测，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.3%四丁基氢氧化铵（用甲酸调节pH值至4.0）-乙腈（70:30）为流动相，检测波长为254nm。经试验证明，高效液相色谱法可作为碳酸氢钠注射液中依地酸二钠限量控制的方法，具有便捷、准确、重现性好等特点。关键词：高效液相色谱法；碳酸氢钠注射液；依地酸二钠；限量控制

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引言碳酸氢钠注射液是调节水盐、电解质及酸碱平衡的药物，多用于代谢性酸中毒治疗。本品主要成分为碳酸氢钠，辅料为依地酸二钠、注射用水。依地酸二钠是金属离子络合剂，在药品生产中加入依地酸二钠是为了控制金属离子对药品（特别是液体制剂）质量的影响，即依地酸二钠作为药用辅料经过审批是允许在药品处方中存在的。随着国家对药品审评标准的提高，对药品中辅料的控制也提出了更严格的要求。依地酸二钠作为金属离子络合剂，在静脉给药输液中的参考用量为0.01%～0.075%。静脉制剂中过多使用依地酸二钠会引起人体血钙浓度下降，所以对其限度的控制已经成为提高药品质量的一种手段以及质量评价的一项指标。本文以碳酸氢钠注射液（规格为250mL：12.5g）为样品，在参考现有依地酸二钠检测方法的基础上，建立了一种碱性注射液采用高效液相色谱法对依地酸二钠含量进行测定的方法，从而控制依地酸二钠限量。

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仪器与试药1.1

仪器LC-10ATVP和LC-10ATVPpius高效液相色谱仪；C18色谱柱（250mm×4.6mm，5

μm）；AUW120D电子天平。1.2

试药盐酸、三氯化铁、四丁基氢氧化铵（10%水溶液）、乙腈等均为分析纯；依地酸二钠对照品符合美国药典标准；碳酸氢钠原料，批号：150109；碳酸氢钠注射液（规格为250mL：12.5g）批号分别为：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911、2016050912、2016050913。

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方法与结果2.1

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.3%四丁基氢氧化铵（用甲酸调节pH值至4.0）-乙腈（70:30）为流动相，检测波长为254nm。理论板数按依地酸二钠峰计算不低于2000。2.2

测定法取样品溶液5mL置于10mL量瓶中，加入1mol/L盐酸1.8mL，超声5～10min，加入0.2%三氯化铁溶液2.5mL，加水定容至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；另取依地酸二钠对照品10mg，精密称定，置于100mL量瓶中，加入5%碳酸氢钠溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置于10mL量瓶中，加入1mol/L盐酸1.8mL，超声5～10min，加入0.2%三氯化铁溶液2.5mL，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液；精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法规定，以峰面积计算，依地酸二钠含量不得超过0.11mg/mL。2.3

方法学验证2.3.1

专属性检测对照品溶液：取依地酸二钠对照品，用5%碳酸氢钠溶液溶解。空白溶液：取5%碳酸氢钠溶液，不加入依地酸二钠。衍生试剂：取0.2%三氯化铁溶液2.5mL，加水至10mL。样品溶液：取碳酸氢钠注射液。取以上各溶液按2.2实验方法检测，分别取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。图1为碳酸氢钠空白图谱，图2为对照品图谱，图3为样品图谱。结果显示：空白溶液加衍生试剂没有明显色谱峰，对主峰无干扰；对照品溶液和样品溶液有明显单一的色谱峰，且理论板数为17802。由此可见，用此方法检测依地酸二钠专属性较好。2.3.2

线性关系精密称取依地酸二钠2mg、5mg、8mg、10mg、12mg、15mg各1份，置于100mL量瓶中，加入5%碳酸氢钠溶液溶解，并稀释至刻度，作为系列标准溶液。按2.2实验方法检测，以浓度与峰面积做标准曲线。表1为线性关系的考察数据，图4为线性关系。结果表明：依地酸二钠在10～75μg/mL范围内呈良好的线性关系，线性方程为y=180625x+7402.7（r2=0.9991）。2.3.3

精密度取样品（批号：2016050811）按2.2实验方法进行检测，重复进样6次，精密度检测结果如表2所示。结果表明：采用同一批号的样品重复进样6次，相对标准偏差RSD=0.08%，说明使用本方法检测依地酸二钠精密度较好。2.3.4

回收率取依地酸二钠8mg、10mg、12mg各3份，精密称定，置于100mL量瓶中，加入5%碳酸氢钠溶液溶解，并稀释至刻度，分别制成含依地酸二钠80%、100%、120%的供试品溶液。按2.2实验方法进行检测，结果用回收率表示，如表3所示。结果表明：使用本法测定依地酸二钠的回收率良好。2.3.5

定量限精密称取依地酸二钠10mg，加入5%碳酸氢钠溶液，溶解并稀释成100mL，再从中取5mL，置于10mL量瓶中，加入1mol/L盐酸1.8mL，超声5～10min，加入0.2%三氯化铁溶液2.5mL，加水定容至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液。在此浓度下稀释10倍、100倍、200倍。按2.2实验方法进行检测，进样，记录色谱图。结果：经检测，当浓度为50μg/mL的依地酸二钠稀释至100倍时，依地酸二钠峰高约为基线噪声的16倍，其检验量约为0.5μg/mL；当稀释至200倍时，依地酸二钠峰高约为基线噪声的10倍，其检验量约为0.25μg/mL。所以，该检测方法的定量限为0.25μg/mL。2.3.6

耐用性检测取样品（批号：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911），在同一台高效液相色谱仪上，使用不同的色谱柱（按标准要求为C18柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂），分别按2.2实验方法进行检测，耐用性检测结果如表4所示。取样品（批号：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911），用同一根C18色谱柱（柱子编号为H15-111041），不同型号的高效液相色谱仪，按2.2实验方法进行检测，耐用性检测结果如表5所示。果表明：使用不同色谱柱和不同高效液相色谱仪对样品进行检测，结果比较接近。由此可见，使用该方法检测碳酸氢钠注射液中依地酸二钠的耐用性良好。2.4

样品检测取样品（批号：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911、2016050912、2016050913），按2.2实验方法进行检测，结果如表6所示。按规定，碳酸氢钠注射液中依地酸二钠含量不得超过0.11mg/mL。根据表6结果显示，样品检测全部合格，符合标准限量规定。

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结语本次实验研究表明，高效液相色谱法测定碳酸氢钠注射液中依地酸二钠限量的方法学验证符合2015版《中国药典》要求，具有便捷、准确、重现性好等特点，可作为碳酸氢钠注射液中依地酸二钠限量控制的方法，适用于碳酸氢钠注射液的生产和质量控制。需要注意的是，本实验中用到的流动相0.3%四丁基氢氧化铵溶液是使用四丁基氢氧化铵（10%水溶液）配制的，对比了两个生产试剂厂商的两种包装形式。一家是上海展云化工有限公司，包装形式为塑料瓶；另一家是成都市科龙化工试剂厂，包装形式为玻璃瓶。不同包装形式的